携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因转基因小鼠的制备及体内表达研究

目的 建立携带人类淀粉样前体蛋白瑞典型突变（Swedish mutation of amyloid precursor protein,APPSWE)基因的转基因小鼠模型。方法 采用受精卵原核显微注射法，将人类APPSWE转基因导入C57及昆明种小鼠受精卵内，然后将注射后保持完整的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内，然后应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交及逆转录PCR分析子代小鼠中外源基因的整合及表达情况。结果 注射后卵的存活率和幼子出现率分别为76.62%和10.38%；外源基因整合率为35.29%；共获得6只首建小鼠，已稳定传3代，PCR检测共55只阳性；提取阳性小鼠心、脑、肝、肾组织及骨骼肌以人类APPSWE基因外显子特异的引物进行逆转录PCR分析，结果发现其心、脑组织及骨骼肌中具有人类APPSWE基因的表达。结论 说明携带淀粉样前体蛋白瑞典型突变基因的转基因小鼠模型已制备成功。     

良性家族性新生儿惊厥 KCNQ2 基因新突变

目的 对一个中国良性家族性新生儿惊厥(benign familial neonatal convulsions，BFNC)家系进行基因诊断，并探讨其分子发病机理。方法 对该家系进行详细的临床检查及疾病基因的连锁分析。应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)-DNA直接测序，并用PCR-单链构象多态(single strand conformation polymorphism，SSCP)对先证者、家系内16人及家系外72名无血缘关系的正常入进行KCNQ2基因突变分析。结果 连锁分析提示该家系与KCNQ2基因连锁，并排除与KCNQ3基因连锁。PCR—DNA直接测序在先证者发现．KCNQ2基因突变193ldelG，PCR—SSCP发现家系内其他患者均出现与先证者相同的异常SSCP条带，而72名正常人未出现此异常条带。结论 KCNQ2基因突变是中国人BFNC的发病原因之一，193ldelG是国内外未曾报道过的新突变，连锁分析结合基因突变分析可对BFNC患者进行基因诊断。     

肿瘤易感基因BRCA1

BRCA1为一新的肿瘤易感基因,定位在17q21,其cDNA可转录7.8kb mRNA,编码含1863个氨基酸残基的长多肽,在遗传性乳腺卵巢癌中有高频率的BRCA1基因杂合性丢失,同时有多形式多位点的基因突变,符合肿瘤抑制基因特点。     

新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症4例临床特征及基因突变分析

目的探讨青岛地区新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCADD)患儿的临床特征及基因突变特点。方法利用串联质谱技术检测283 104名新生儿干血滤纸片中酰基肉碱水平,对筛查出的疑似SCADD患儿通过尿有机酸检测、短链酰基辅酶A脱氢酶(ACADS)突变检测进行确诊。结果共确诊4例短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症患儿,患病率1. 4/10万(1/70 776)。患儿临床表现无明显异常,串联质谱检测显示血丁酰基肉碱(C4)及其与乙酰肉碱(C2)、丙酰肉碱(C3)比值均增高。对4例患儿进行尿有机酸分析,乙基丙二酸均增高[8. 41～36. 34 mg/g肌酐(正常值0～6. 20 mg/g肌酐)],还有2例伴乳酸增高,1例伴丙酮酸增高。基因测序共发现7种ACADS突变,4种为已知突变,3种未报道突变,均为错义突变。4例患儿均为复合杂合突变,分别为:c. 1031AG/c. 989GA; c. 1186GA/c. 1195CT; c. 1031AG/c. 445AT; c. 1130CT/c. 1157GA。常见突变为c. 1031AG(25%),ACADS基因型与乙基丙二酸以及C4浓度水平无明显相关。对患儿进行饮食指导,随访均未出现临床症状,体格及智力发育正常。结论通过血串联质谱筛查配合基因测序可以对SCADD明确诊断,早期确诊的新生儿无临床症状,预后较好。     

乳腺癌和卵巢癌中BRCA基因的突变

一、ＢＲＣＡ1和ＢＲＣＡ2基因1990年Ｈａｌｌ等[1] 发现家族性乳腺癌与 17号染色体长臂上的一个位点有关。随后Ｎａｒｏｄ等[2 ] 也报道了家族性乳腺癌及卵巢癌与 17号染色体有关。 1994年这一基因位点被克隆鉴定 ,命名为ＢＲＣＡ1[3] 。该基因位于染色体 17ｑ2 1,全长10 0ｋｂ ,含 2 4个外显子。蛋白产物的相对分子质量为 2 0 00 0 0 ,含 1863个氨基酸。它可能涉及细胞周期的调控以及ＤＮＡ的修复。在培养细胞中 ,从Ｇ1期到Ｓ期的细胞中 ,ＢＲＣＡ1的表达增加。研究还显示ＢＲＣＡ1在快速增生的细胞中表达最高。缺乏ＢＲＣＡ1活性将使ＤＮ…     

母系遗传耳聋大家系的线粒体基因组全序列分析

目的 在江苏淮阴一母系遗传非综合征型耳聋大家系中，寻找线粒体基因组上可能影响1555（A→G）突变表型的其他位点突变。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）和测序技术。检测了核心分支家系中27名母系成员的线粒体DNA上1555位点和7445位点的碱基变化，进而对该家系2名母系成员的线粒体全基因组和其他25名母系成员线粒体12S rRNA基因MTRNR1和tRNA-Ser^（UCN）基因MTTS1进行了全长测序。结果 再次证明了1555（A→G）突变是该家系成员致聋的分子生物学基础之一；并发现该家系27名母系成员的线粒体基因组中除1555（A→G）突变外，还同时存在有955-960（insC）同质型突变，两突变共分离。另外，新发现一个线粒体DNA突变——7449（insG），但该突变仅在2名母系成员中存在。结论 推测955-960（insC）突变可能通过改变12S rRNA基因的高级结构，并与1555（A→G）突变协同作用，提高了突变携带者对氨基糖甙类药物的敏感性；同时该突变可能也会导致线粒体蛋白质的合成缺陷。从而提高1555（A→G）突变致聋的外显率。     

非综合征型多指（趾）致病基因的研究进展

多指是最常见的先天性肢体异常，遗传方式多为常染色体显性遗传。迄今为止，用连锁分析的方法对多个非综合征型多指(趾)畸形家系进行了基因定位和致病基因的突变分析。本文就近年来在多指(趾)畸形致病基因研究方面做一综述。     

p21WAF1／CIPI基因导入对p53突变人肺癌细胞系生长特性的影响

目的 探讨含突变ｐ５３基因癌细胞系ｐ２１基因的抗肿瘤作用。方法 构建人ｐ２１表达重组子,导入ｐ５３基因突变的人肺癌ＰＧ细胞每当增产同表达ｐ２１的细胞系;然后观察其形态太生长特性的改变;ＣＤＫ４,ＰＣＮＡ水平;对基因毒性物的反应性。结果 在含ｐ５３基因突变的ＰＧ细胞内导入的性ｐ２１基因,其高表达ｐ２１约是ＰＧ细胞的６倍,转谬为薄等异型性降低;生长速度下降（５０％）,叠落生长不明显;在０．５％血甭条件     

马凡综合征微纤维蛋白1基因突变检测及单倍型连锁分析

目的：检测中国人马凡综合征（Marfan syndrome,MFS)患者微纤维蛋白1（fibillin-1,FBN1)基因的突变及对马凡综合征患者的家系成员进行症状前诊断。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性技术和测序方法，对汉族9个家系中共17个MFS患者进行基因突变检测；运用FBN1基因内4个内含子中的可变串联重复序列构建染色体单倍型，进行家系单倍型连锁分析和基因诊断。结果：发现MFS（A）家系Ⅱ1患者有单链构象改变，测序证实为位于FBN1基因第25号外显子3243－3256核苷酸之间有I个13bp的小片段缺失，为新位点基因移码突变，其序列为gcctctgcaccca;单倍型连锁分析发现MFS（B）家系Ⅲ1是1个无症状期患者。结论：中国人FBN1基因突变可以引起马凡综合征，应用突变检测与单倍型连锁分析方法能为马凡综合征基因诊断提供依据。     

F213I突变型高雪氏病分子伴侣治疗方法的研究

目的 研究高雪氏病新的分子治疗方法。方法 用β-葡萄糖脑昔脂酶(β-glucocerebrosidase，β-Glc)(EC3．2．1．45)的底物类似物(glucocerebroside analogue，GCA)作为分子伴侣，处理体外培养的不同突变型的高雪氏病患者皮肤成纤维细胞，采用荧光酶学手段测定β-Glc活性；Western印迹杂交技术分析该酶蛋白表达的量；细胞双染确定β-Glc在细胞内的定位；薄层层析法分析葡萄糖脑苷脂的降解情况。结果 该酶的底物类似物GCA可以提高体外培养的F213I突变型患者成纤维细胞内β-Glc活性；增加该酶蛋白的表达量；促进该酶蛋白向溶酶体内转运，加速底物葡萄糖脑苷脂(glucocerebroside，GlcCer)的降解。结论低分子量的GCA作为一种分子伴侣可能为F213I突变型高雪氏病的治疗开辟一条新的途径。