五味子等29种中草药的体外抑菌实验

目的：探讨五味子等29种中草药对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的抑菌作用。方法：(1)药物用50％乙醇浸提，采用琼脂平板扩散法观察抑菌圈的大小；(2)琼脂平板连续稀释法测药物的最低抑菌浓度(MIC，mg/mm)。结果：(1)对三种实验菌均具有抑菌作用的药物有15种：五味子、五蓓子、黄芩、大黄、厚朴、秦皮等(抑菌圈直径在12～40mm)；(2)对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌具有抑菌作用而对绿脓杆菌无抑菌作用的药物有4种：铁苋、丹参、丹皮、黄柏(抑菌圈直径在12～35mm)；(3)只对一种实验菌有抑菌作用的药物有甘草、秦艽、夜交藤、七叶一枝花等10种；(4)各药对实验菌的MIC差异较大，对三种细菌以五味子的MIC最低，为6．25～10．00mg／ml。结论：五味子、五蓓子、黄芩、大黄、厚朴、秦皮等15种中草药对全部实验菌具有抑菌作用；铁苋、丹参、丹皮、黄柏对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌具有抑菌作用；其中对三种实验菌抑菌作用最强的是五味子，抑菌圈最大者达40mm，MIC最低(6．25～10．00mg／ml)。     

中国福氏志贺菌优势序列型ST91获得SRL和Tn7多重耐药岛分析

目的分析中国福氏志贺菌优势序列型ST91(sequence type 91)中志贺菌耐药岛(Shigella resistance locus,SRL)和Tn7耐药岛的分布及变化情况。方法对包括14种血清型(1a[7株],1b[1株],1d[1株],2a[5株],2b[1株],3a[3株],3b[1株],4a[1株],4av[1株],4b[1株],X[9株],Xv[25株],Y[2株]和Yv[1株])和7种ST型(ST91[50株],ST109[1株],ST18[3株],ST142[1株],ST143[1株],ST103[2株],ST16[1株])的59株中国福氏志贺菌基因组中SRL、Tn7耐药岛的编码基因及核酸序列进行分析,并与参考菌株2002017和YSH600的SRL和Tn7岛进行比较。结果所有50株中国分离的福氏志贺菌ST91菌株,1株ST109和1株ST142菌株均携带SRL和Tn7岛。1株ST18菌株仅携带2个耐药岛的3个耐药基因。其他ST型菌株均未发现耐药岛。与参考菌株2002017相比,9株ST91菌株的SRL耐药岛发生了插入或缺失。其中,7株ST91菌株缺失了编码四环素耐药性的tet基因;1株ST91菌株缺失了编码β-内酰胺酶的oxa-1和编码氯霉素乙酰转移酶的cat基因;1株ST91的SRL岛上插入了1个编码广谱β-内酰胺酶的blaTEM-1基因。所有50株ST91、1株ST109和1株ST142菌株携带的Tn7岛的核酸序列和编码基因与参考菌株相比未发现差异。结论福氏志贺菌ST91型中国分离菌株均携带SRL和Tn7耐药岛。在SRL岛上发生了基因的插入和缺失。处于进化早期的ST18菌株,在获得耐药岛的过程中可能发挥了重要作用。     

对大肠杆菌,痢疾杆菌抗药基因转移的实验研究

本文就肠道感染性疾病过程中对病人感染的致病性大肠杆菌、弗氏痢疾杆菌出现的耐药现象进行了研究。认为多数由抗药性质粒介导形成耐药性。这种耐药性可以传递,之所以能传递与质粒及其上面的耐药基因转移有关。这种耐药性传递是通过细菌的转化、转导实验研究手段而确定。该研究为在临床上进一步研究控制耐药基因的转移或研究质粒消除剂,从而控制微生物引起的感染创造了一定的条件。     

志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌多重PCR快速检测体系的建立

目的 建立快速检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR方法.方法 根据志贺菌ipaH基因、沙门菌ipaB基因及霍乱弧菌EPSM基因设计特异性PCR引物,加热煮沸法制备DNA模板,进行PCR扩增及琼脂糖电泳检测.结果 应用所建立的多重PCR方法能分别或同时快速、特异地检测出志贺菌606bp、沙门菌314bp和霍乱弧菌482bp的目的基因.结论 初步建立了灵敏、特异的一步法检测志贺菌、沙门菌和霍乱弧菌的多重PCR体系,可用于高危腹泻致病菌的早期快速诊断.     

多位点酶电泳法在菌痢暴发中的应用

从广州、江门两地分离到７９株Ｆ２ａ，采用多位点酶电泳（ＭＥＥ）技术对该菌的６种代谢酶进行了检测。结果表明，７９株Ｆ２ａ共分为１０个电泳型（ＥＴ），存在一个优势型（ＥＴ１）和一个次优势型（ＥＴ２），以及８个非优势型。该现象说明，ＥＴ１型是引起菌痢暴发和流行的优势克隆。用ＭＥＥ方法检测表型一致的Ｆ２ａ，可发现二者之间具有差异。     

痢疾杆菌GST-IpaH4.5载体构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建痢疾杆菌GST-IpaH4.5融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌（E.coli）中诱导表达。方法以痢疾杆菌福氏2a 301株全基因组为模板,PCR扩增痢疾杆菌ipaH4.5基因,在ipaH4.5的上游加上BamHⅠ酶切位点,下游加上XholⅠ酶切位点,将ipaH4.5基因定向插入质粒pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-IpaH4.5并转化E.coliDH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定,DNA序列正确后提取质粒转化E.coli BL21,筛选阳性转化子,异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达结果。结果成功构建IpaH4.5原核表达质粒pGEX-IpaH4.5并表达出大小约86 000Mr的GST-IpaH4.5融合蛋白。结论 GST-IpaH4.5融合表达载体的构建,为进一步纯化IpaH4.5蛋白和研究其在痢疾杆菌致病机制中的作用奠定了基础。     

Correlation between the sulfamethoxazole-trimethoprim resistance of Shigella flexneri and the sul genes

The aim of this study was to discuss the correlation between the sulfamethoxazole-trimethoprim resistance of Shigella flexneri (S. flexneri) and the antibiotic resistance genes sul1, sul2, and sul3 and SXT element.From May 2013 to October 2018, 102 isolates of S. flexneri were collected from the clinical samples in Jinan. The Kirby–Bauer (K-B) test was employed to determine the antibiotic susceptibility of the S. flexneri isolates. The antibiotic resistance rate was analyzed with the WHONET5.4 software. The isolates were subject to the PCR amplification of the sul genes (sul1, sul2, and sul3) and the SXT element. On the basis of the sequencing results, the correlation between the sulfamethoxazole-trimethoprim resistance of the S. flexneri isolates and the sul genes was analyzed.The antibiotic resistance rates of the 102 S. flexneri isolates to ampicillin, streptomycin, chloramphenicol, tetracycline, and sulfamethoxazole-trimethoprim were 90.2%, 90.2%, 88.2%, 88.2%, and 62.7%, respectively. The antibiotic resistance rates of these isolates to cefotaxime, ceftazidime, and ciprofloxacin varied between 20% and 35%. However, these isolates were 100% susceptible to cefoxitin. Positive fragments were amplified from 59.8% (61/102) of the 102 S. flexneri isolates, the sizes of the sul1 and sul2 genes being 338 bp and 286 bp, respectively. The sequence alignment revealed the presence of the sul1 and sul2 genes encoding for dihydrofolate synthase. The carrying rate of the sul1 gene was 13.7% (14/102), and that of the sul2 gene was 48.0% (49/102). No target gene fragments were amplified from the 3 isolates resistant to sulfamethoxazole-trimethoprim. The sul3 gene and SXT element were not amplified from any of the isolates. The testing and statistical analysis showed that the resistance of the S. flexneri isolates to sulfamethoxazole-trimethoprim correlated to the sul1 and sul2 genes.The acquired antibiotic resistance genes sul1 and sul2 were closely associated with the resistance of the 102 S. flexneri isolates to sulfamethoxazole-trimethoprim.     

四川省某学校一起细菌性痢疾暴发疫情调查

目的调查某学校细菌性痢疾暴发疫情发生的原因,为制定防控措施提供科学依据。方法2019-05-20,四川省茂县某乡镇小学发生一起细菌性痢疾暴发疫情,根据暴发调查步骤制定病例定义开展病例搜索,对搜索到的病例进行个案调查并描述病例的三间分布情况,再开展病例对照研究和现场卫生学调查,以寻找此次疫情发生的危险因素,明确暴发原因。利用描述流行病学方法描述病例的时间、空间和人群分布特征,罹患率差异用χ^2检验,病例对照研究中计算OR值及95%可信区间。结果该次疫情历时7 d(2019-05-20/26),共有病例97例(确诊病例25例,临床诊断46例,疑似病例26例),罹患率为30.50%(97/277);患者以腹泻、腹痛、发热和里急后重为主要临床症状;流行曲线提示本次疫情属于点源暴露,可疑暴露日期5月20-22日;不同性别之间(37.68%和32.37%,χ^2=0.86,P>0.05)、住校生和走读生之间(34.62%和35.06%,χ^2=0.06,P>0.05)、各班级之间(20.59%、42.42%、50.00%、46.16%、35.71%、26.92%、21.62%、45.45%和25.00%,χ^2=15.17,P>0.05)罹患率差异无统计学意义;病例对照研究显示,喝生水是本次疫情发生的危险因素(OR=3.77,95%CI:1.16~12.27);共采集样本85份(水样7份,血样6份,病例粪便样31份,肛拭子10份,学校环境样19份,留样食品样12份),其中25份粪便标本检出福氏Ⅵ型志贺氏菌;7份水样卫生学检测总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌超标。结论这是一起学校生活饮用水被福氏Ⅵ型志贺氏菌污染而导致的急性细菌性痢疾暴发疫情。     

点免疫结合试验和反向间接血凝试验检测粪便中福氏志贺氏菌的研究

采用单克隆抗体作为试剂,建立了两种用于快速检测粪便中福氏痢疾杆菌的方法—DIBA夹心法和RPHA法。长期以来困扰研究者的非特异性干扰问题,可能用煮沸标本上清的方法得到解决。检测114份病人标本的结果证明,用常规培养法检测阳性者,DIBA和RPHA检测均为阳性,两类方法的符合率为86.4％。由此证明两种快速免疫学方法不仅能检出完整的细菌细胞,而且也能检出其裂解产物。这两种方法,尤其是RPHA法具有较高的敏感性、特异性和快速性,且不需复杂的仪器设备,加之实验程序简单,甚适于在基层单位及农村地区应用。     

福氏2a志贺氏菌肠毒素基因分型

目的：对福氏２ａ志贺氏菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ２ａ,Ｆ２ａ）的志贺氏肠毒素１（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ１,ＳＥＴ１）和志架氏肠毒素２（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ２,ＳＥＴ２）进行基因分型,提高菌痢暴发流行时同源性分析的水平。方法：对一起暴发Ｆ２ａ菌痢在现场流行病学调查的基础上,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,检测４３株Ｆ２ａ菌的志贺氏肠毒素１基因（ｓｅｔ１