化痰通腑汤加减治疗缺血性中风患者临床疗效和对血清标志物的影响

目的 探究化痰通腑汤加减治疗缺血性中风的疗效及对血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)、泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)水平的影响。方法 选择哈尔滨市中医医院2019年1月—2021年1月收治的120例缺血性中风患者，使用随机数字表将其分为参照组和治疗组，各纳入60例，比较两组临床疗效、AngⅡ、LP-PLA2、UCH-L1、炎症因子、Barthel指数和国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。结果 两组患者临床疗效等级差异有统计学意义(P<0.05),治疗组有效率高于参照组(P<0.05),差异具有统计学意义。两组患者治疗前血浆AngⅡ、LP-PLA2、UCH-L1水平差异无统计学意义(P>0.05),两组患者治疗后血浆AngⅡ、LP-PLA2、UCH-L1水平均显著降低(P<0.05),且治疗组血浆AngⅡ、LP-PLA2、UCH-L1水平低于参照组(P<0.05),差异有统计学意义。两组患者治疗前超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)差异无统计学意义(P>...     

激光显微切割结合蛋白质组学技术分析DDAH-1在肝细胞癌表达的变化

目的:应用激光显微切割(laser capture microdissection,LCM)结合蛋白组学技术筛查肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织及其癌旁组织的差异表达蛋白,分析二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(dimethylarginine dimethylaminohydrolase1,DDAH-1)在肝细胞癌表达的变化。方法:选取2003-2006年间东方肝胆外科医院原发性肝细胞癌患者的手术切除标本40例。利用LCM技术分离捕获肝癌组织及癌旁组织的肝实质细胞,应用二维凝胶电泳技术(two dimensional gel electrophoresis,2-DE)筛选全部标本共同差异表达频率>80%、差异强度>3倍的蛋白质点;应用电喷雾串联质谱(electrospray ionisation tandem mass spectrometry,ESI-MS/MS)及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异蛋白点进行质谱鉴定分析;采用Western blotting及免疫组化对差异蛋白DDAH-1进行检测。结果:2-DE筛查获得在肝癌及癌旁组织差异表达的蛋白质点共20个,通过质谱鉴定获得12个蛋白质,其中5个在肝癌组织表达上调,7个下调;这12个蛋白质与细胞代谢、增殖、分化及信号调控相关,其中的DDAH-1是参与调控一氧化氮相关通路的重要酶。Western blotting检测显示,20例标本中16例DDAH-1表达明显升高;免疫组化检测证实,10例标本DDAH-1全部呈强阳性表达。结论:肝细胞癌组织细胞中筛查到12个差异表达蛋白质,其中的DDAH-1在肝癌组织中表达上调,其有可能在肝癌发生、发展过程中起重要作用。     

乌司他丁治疗急性胰腺炎临床分析

随着人们生活水平的提高,急性胰腺炎的发病率呈上升趋势,奥曲肽是目前治疗急性胰腺炎公认有效的药物,但由于其价格昂贵,限制了其临床广泛使用,乌司他丁是从人尿中提取的精制糖蛋白,有抑制胰蛋白酶、弹性蛋白酶、纤溶酶等蛋白水解酶及透明质酸酶、淀粉酶、脂肪酶等糖类和脂类水解酶的作用.我院2002～2006年对乌司他丁和奥曲肽治疗急性胰腺炎进行临床分析,总结如下.     

利用天然乙内酰脲酶启动子在大肠杆菌中诱导N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶的可溶性表达

将来源于放射土壤杆菌(A.radiobacter)TH572的编码N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶的基因克隆至质粒pET30a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),结果蛋白质大部分以包涵体形式表达。本试验采用天然的乙内酰脲酶启动子(P_(Hase),长度为     

α，β-不饱和酮的环氧化物的简便制备

α,β-不饱和酮与1,1-二过氧羟基环己酮(环己酮加过氧化氢碘催化氧化制得)于极性溶剂中进行Weitz-Scheffer氧化反应可生成酮的α,β-环氧化物。11例收率79%～100%。     

高通量实时荧光定量RT-PCR方法验证FL细胞对苯并(a)芘7,8-二氢二醇9,10-环氧化物处理的差异表达基因

目的验证由寡核苷酸微阵列检出的FL细胞对苯并(a)芘7,8-二氢二醇9,10-环氧化物(BPDE)处理的差异表达基因。方法FL细胞分别经0.1%二甲亚砜(DMSO)和0.5μmol.L-1BPDE处理,以高通量实时荧光定量RT-PCR方法(TaqMan(低密度芯片)平行检测185个目标基因的相对表达水平。结果BPDE处理组相对DMSO对照组,51个基因表达有差异,12个基因表达上调,39个基因表达下调,(n=3,P<0.05),涉及细胞增殖,分化,凋亡调控基因,转录调节基因和代谢酶基因等。结论高通量实时荧光定量RT-PCR可迅速对微阵列数据进行验证,差异表达谱有助于研究BPDE的毒理机制和细胞的应答反应。     

溶菌酶及其在食品中的应用

溶菌酶(Lysozyme),又称胞壁质酶,是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶,因其有溶菌作用,故命名为溶菌酶。溶菌酶是由129个氨基酸构成的单纯碱性球蛋白,化学性质非常稳定。由于细     

甲醛诱导内皮细胞ADMA代谢紊乱及其机制

目的观察甲醛对内皮细胞不对称性二甲基精氨酸(ADMA)代谢的影响,分别从氧化损伤及DNA-蛋白质交联两个方面分析甲醛影响ADMA代谢的特征,研究甲醛对内皮细胞损伤的可能机制。方法利用甲醛与人脐静脉内皮细胞共培养建立细胞实验模型,采用DMEM(低糖)培养基培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12),取生长良好的3~6代细胞进行实验。分为实验组(分别加入终浓度为6.25、12.5、25、50、100、200和400μmol/L的甲醛)和对照组(加入等体积的PBS溶液),采用丙酮酸二硝基苯腙比色法、二硫代二硝基苯甲酸比色法、黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法、化学比色法、高效液相色谱法、KCL-SDS沉淀法、SigmaPlot8.0作图。结果(1)甲醛对内皮细胞的损伤,在本研究所用的剂量范围内,表现出2个特点:6.25~25.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出下降,50.00~400.00μmol/L甲醛组使细胞上清液LDH漏出升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05);(2)甲醛诱导氧化损伤,低剂量(<12.50μmol/L)甲醛对细胞内GSH含量和SOD活力的影响与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛能明显降低细胞内GSH含量和SOD活力,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);细胞上清液MDA的含量随着甲醛浓度的增加而升高,与对照组相相比差异有统计学意义(P<0.05);(3)甲醛对ADMA/eNOS的影响,甲醛呈浓度依赖性的诱导细胞上清液ADMA产生,并抑制细胞内DDAHⅡ活性,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低剂量(<12.50μmol/L)甲醛显著提升细胞内eNOS活性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);高剂量(>12.50μmol/L)甲醛呈浓度依赖性显著降低细胞内eNOS活性(P<0.05)。(4)甲醛诱导DNA-蛋白质交联,6.25~12.50μmol/L甲醛组诱导细胞内DPC交联率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);25.00~400.00μmol/L甲醛组促进细胞内DNA、蛋白质发生交联,DPC交联率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)甲醛诱导人脐静脉内皮细胞ADMA代谢紊乱,表现为呈浓度依赖性诱导内皮细胞ADMA产生。(2)甲醛诱导ADMA代谢紊乱可能与氧化损伤和(或)DNA-蛋白质交联所致DDAHⅡ活性降低有关。     

环氧化物和氮杂环丙烷与叠氮化钠的高选择性开环

环氧化物和氮杂环丙烷与叠氮化钠在聚乙二醇中室温下反应30-45min，开环分别得到2-叠氮醇或2-羟基叠氮物：和2-叠氮胺基物成2-胺基叠氮物，17例收率95％～99％。     

利用改进的基因组步行技术克隆新型水解酶全基因

利用同源-简并的混合寡核苷酸引物（consensus-degeneratehybrid oligonucleotide primers，CODEHOP）介导新微粒酶的PCR筛选，得到这些酶所有的基因片段，并用改进的基因组步行技术得到所鉴定基因的全序列。本研究基于盒式一连接改进了基因组步行方法，主要在于可用任意的限制性内切酶消化基因组DNA，用Taq DNA聚合酶对消化的DNA进行末端平滑化，并加上一个腺嘌呤（A）避免自身环化，随后腺嘌呤3’端连接于同样未磷酸化的寡核苷酸盒完成TA连接。