Tumstatin对兔耳增生性瘢痕的抑制作用

目的 探讨肿瘤抑素(Tumstatin)对兔耳瘢痕组织生长情况的影响.方法 建立兔耳增生性瘢痕模型,用Tumstatin对兔耳腹侧建立的增生性瘢痕模型通过在体局部注射进行干预,随机设立Tumstatin治疗组、Tumstatin预防治疗组、曲安奈德对照组、生理盐水对照组;停止药物注射21天后各组同时于每只兔的双侧对称部位取材瘢痕组织,每一取材瘢痕组织均分成同样大小的四等份,分别进行组织形态学观察、CD34免疫组化方法测定血管密度的变化、观察血管内皮细胞与成纤维细胞凋亡的变化情况.结果 Tumstatin预防治疗组和Tumstatin治疗组中,新生毛细血管密度、内皮细胞活性以及成纤维细胞数量都较曲安奈德和生理盐水对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Tumstatin能够较曲安奈德更明显地抑制增生性瘢痕的生长,为Tumstatin用于防治增生性瘢痕的可行性提供了初步的理论依据.     

Canstatin与tumstatin抑制甲状腺癌细胞SW579迁移的机制研究

目的:研究canstatin与tumstatin对甲状腺癌SW579细胞迁移的影响及其机制.方法:利用MTT实验和划痕实验检测SW579细胞增殖和迁移.Western blot技术检测运动相关蛋白的变化.结果:Canstatin与tumstatin可以明显抑制SW579细胞增殖和迁移.Canstatin与tumstatin处理后细胞的MMP 3、9和12蛋白水平明显下降.在canstatin作用下Wave2蛋白含量下降,而tumstatin没有类似作用.结论:Canstatin与tumstatin通过抑制MMP 3、9和12蛋白水平导致SW579细胞运动减弱.     

肿瘤抑素抗肿瘤相关肽对人卵巢癌细胞作用的体外研究

目的探讨肿瘤抑素（Tumstatin）185-203位氨基酸（19肽）对卵巢癌细胞（SKOV3）的治疗作用。方法使用NTS、Annexin／PI和蛋白印迹的方法检测肿瘤抑素19肽对SKOV3细胞增殖和凋亡的影响，以及Bcl-2、BAX等凋亡相关蛋白的表达情况。检测了19肽对SKOV3细胞侵袭能力的影响，同时应用RT-PCR的方法检测基质金属蛋白-2（matrix metallopmteinase-2，MMP-2）、组织金属蛋白酶抑制物-2（tissue inhibitors of metallopmteinase-2，TIMP-2）和膜型基质金属蛋白-1（membrane-type 1 matrix metalloproteinase，MT1-MMP）mRNA表达量的变化情况。结果19肽能够有效抑制SKOV3细胞的增殖，诱导细胞凋亡，而降低Bcl-2的表达，激活caspase通路可能是其诱导细胞凋亡的分子机制之一。此外该19肽能够有效抑制SKOV3细胞的侵袭，这与抑制MT1-MMP的表达进而抑制MMP-2的膜结合活性相关。结论肿瘤抑素19肽可以通过诱导凋亡和抑制细胞侵袭对体外培养的SKOV3产生杀伤和抑制作用。     

人tumstatin 基因的克隆表达及其鉴定

 目的 重组表达人tumstatin，为人tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。方法 提取HEK293细胞总RNA，通过RT-PCR扩增人tumstatin基因，导入pMD19-T，测序，然后亚克隆至pET28a，IPTG诱导表达，产物进行SDS-PAGE分析和Westernblot鉴定。结果 提取的总RNA经电泳，有清晰的28S和18S两条带。RT-PCR扩增产物长度与理论值750bp相一致。测序证实tumstatin基因正确插入载体中。重组人tumstatin在大肠杆菌中高效表达，表达量约占菌体总蛋白量的30％。Westernblot证实所表达蛋白为目的蛋白。结论 重组人tumstatin蛋白在大肠杆菌中高效表达，为进一步的tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。     

肿瘤抑素41肽重组表达及活性研究

目的：构建肿瘤抑素41肽重组质粒,使其高效表达并纯化得到41肽,研究其抗肿瘤活性。方法人工设计并合成肿瘤抑素41肽基因序列,克隆到表达载体 pTYB21上,转化到大肠埃希菌 BL?21（DE3）中, IPTG诱导融合蛋白高效表达,几丁质亲和层析柱纯化后经Tricine?SDS?PAGE鉴定41肽。利用MTT法、吖啶橙／溴化乙锭（ AO／EB）荧光染色、小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理切片来研究肿瘤抑素41肽的生物学活性。结果构建肿瘤抑素41肽重组质粒,获得可溶性肿瘤抑素41肽。体外实验显示,41肽具有抑制人脐静脉内皮 HUVEC 细胞、人胃癌 HGC?27细胞和人肝癌HepG2细胞增殖和促进HUVEC、 HGC?27细胞凋亡的作用。体内实验显示,41肽对小鼠H22腹水型转移肝癌实体瘤生长具有明显的抑制作用,抑瘤率达到34?35％。结论成功构建了pTYB21?41肽重组质粒,肿瘤抑素41肽具有显著的抗肿瘤活性,为肿瘤抑素机制研究和临床应用研究奠定了基础。     

肿瘤抑素对婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖活力与细胞周期的影响

目的探讨抗血管生成药物肿瘤抑素(tumstatin)对体外培养的婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖与细胞周期的影响。方法将切取的血管瘤组织在体外消化,获得血管瘤内皮细胞,进行体外培养和传代;以不同浓度tumstatin多肽加入细胞培养基中,MTT法检测细胞活力,以流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果在2.5%体积胎牛血清的培养条件下,tumstatin对血管瘤内皮细胞增殖活力的抑制,呈现出量效关系;在17.0μg/mL浓度tumstatin的作用下,血管瘤内皮细胞的细胞周期G0/G1期为55.8%,而对照组为42.9%。结论 tumstatin能够在体外有效地抑制婴幼儿血管瘤内皮细胞的增殖活力,并呈现出一定的量效关系;tumstatin还能影响细胞周期的进程,促使其阻滞在G0/G1期。     

Tumstatin治疗喉鳞癌的实验研究

目的 探讨肿瘤抑素(Tumstatin)对喉鳞癌细胞(Hep-2)的治疗作用.方法 用Hep-2细胞株进行传代培养,台盼蓝法观察Tumstatin和顺铂对不同培养时间细胞的生长抑制情况;MTT法检测不同浓度的Tumstatin对Hep-2细胞存活率的影响,光镜观察细胞形态的变化;电镜和3′-原位末端标记法(TUNEL)检测Hep-2细胞凋亡的发生和形态学改变.结果 ①随着药物对Hep-2细胞作用时间的延长,细胞生存率明显降低,存在时间依赖性;②MTT检测显示,Tumstatin对细胞的增殖的抑制效应具有剂量依赖性;③光镜观察发现,药物作用组细胞出现病变;④电镜和TUNEL染色证实,Tumstatin对Hep-2细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主.结论 Tumstatin可能通过促进细胞凋亡发挥抗肿瘤的作用.     

血管形成抑制因子tumstatin45-132的基因克隆、表达和生物学活性

目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tum statin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达。方法: 采用RT PCR从人胚肾细胞系 293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132 (45 -132位氨基酸 )编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化E.coliBL21, 于 42℃进行热诱导表达。用SDS -PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性。结果: RT- PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致。以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化E.coliBL21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为 9 600的重组蛋白。表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的 10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖。结论: 成功克隆全长tumstatincDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性。     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞迁移及P38MAPK蛋白表达的影响

目的:观察tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞迁移及P38MAPK蛋白表达的影响,初步探讨tumstatin肽抗视网膜内皮细胞迁移的机制。方法:采用细胞划痕实验测定tumstatin肽(T8肽)对血管内皮生长因子(VEGF)诱导下RF/6A细胞(恒河猴视网膜微血管内皮细胞)迁移的影响;Western blotting检测T8肽对VEGF刺激后15,30,45,60min的RF/6A细胞P38MAPK蛋白水平的变化。结果:Tumstatin肽对RF/6A细胞迁移具有抑制作用,且可抑制VEGF对RF/6A细胞的促迁移作用,呈剂量依赖性。正常情况下,RF/6A细胞无P38MAPK蛋白的表达,但VEGF可诱导其表达P38MAPK蛋白,而tumstatin可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞P38MAPK蛋白的表达(加入20mg/LT8肽30,45,60min时蛋白表达受到显著抑制,差异有显著性意义,P<0.01)。结论:Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移,其作用可能与P38MAPK通路有关。     

肿瘤抑素相关肽T42肽的纯化及抗肝癌细胞Hepg2活性的测定

目的:利用已成功构建的肿瘤抑素相关活性肽T42肽高效表达基因工程重组菌pTYB2-T42,提取纯化T42肽,检测其抗肿瘤活性,为研究T42肽抗肿瘤作用机制及新型抗肿瘤药物研发提供实验基础。方法:将pTYB2-T42大肠杆菌进行培养,IPTG诱导其产生融合蛋白,经几丁质柱亲和层析得到目的蛋白,葡聚糖凝胶G15去除DTT干扰,Tricine SDS-PAGE鉴定T42肽,紫外分光光度法检测其浓度。MTT检测T42肽对细胞的生长增殖抑制作用,AO/EB荧光染色检测细胞凋亡形态学变化。结果:提取的T42肽其相对分子质量在5 000左右,与理论值4 600一致。MTT实验结果显示：T42肽作用下Hepg2细胞生长增殖受到抑制,且随着T42肽浓度的增加,Hepg2细胞存活率逐渐下降,其半数抑制浓度(IC₅₀)为30 mmol•L^-1;AO/EB荧光染色结果表明：经过30 mmol•L^-1 T42肽作用24 h后的Hepg2细胞表现出细胞皱缩呈圆形或卵圆形,核皱缩变形且胞膜受损等一系列细胞凋亡特征性的形态变化。结论:T42肽具有显著的抗肿瘤细胞活性,可明显抑制人肝癌细胞Hepg2的生长增殖,并促进其凋亡。