miRNA-146b在甲状腺结节超声引导下细针抽吸活检样本中的表达

目的 探讨miRNA-146b表达在甲状腺结节超声引导下细针抽吸活检(US-FNAB)样本中的应用价值.方法 选择2013年9月在上海交通大学医学院附属瑞金医院行US-FNAB的30例甲状腺结节患者.采用RT-PCR技术检测甲状腺结节US-FNAB样本中miRNA-146b的表达,并与手术后病理结果进行对照.采用t检验比较甲状腺乳头状癌(PTC)与甲状腺良性结节、有无淋巴结转移的PTCmiRNA-146b表达差异.应用受试者操作特性(ROC)曲线分析miRNA-146b表达诊断甲状腺良恶性结节、PTC有无淋巴结转移的阈值、敏感度和特异度.结果 30例甲状腺结节US-FNAB样本中,病理证实PTC伴淋巴结转移10例,PTC不伴淋巴结转移10例,甲状腺良性结节10例.PTC与甲状腺良性结节、伴淋巴结转移PTC与无淋巴结转移PTC miRNA-146b表达差异均有统计学意义(t=2.539,P=0.017,t=2.431,P=0.026).ROC曲线显示,miRNA-146b表达诊断甲状腺良恶性结节及PTC有无淋巴结转移的阈值分别为1.295、3.020,敏感度分别为80％、80％,特异度分别为80％、90％.结论 甲状腺结节US-FNAB样本中miRNA-146b表达能有效鉴别PTC与甲状腺良性结节,并对PTC伴淋巴结转移有预测作用.     

miRNA-143通过抑制KRAS降低前列腺癌细胞的增殖

目的探讨miRNA-143对前列腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法通过RT-PCR和Western blot方法检测miRNA-143及其靶基因KRAS在前列腺癌组织中的表达;用MTT方法和集落形成实验研究miRNA-143对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞增殖的影响。结果 miRNA-143及其靶基因KRAS在前列腺癌组织中的表达呈负相关;miRNA-143高表达对DU145细胞的增殖具有抑制作用;DU145细胞中miRNA-143高表达抑制KRAS-ERK信号通路的激活及Cyclin D1的表达。结论 miRNA-143通过RAS/MAPK信号通路抑制前列腺癌的增殖,为激素非依赖性前列腺癌治疗提供了分子生物学基础。     

miRNA-196a与宫颈癌的关系研究

目的：探讨miRNA-196a与宫颈癌的相关性.方法：采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测35例宫颈癌组织、35例宫颈上皮内瘤样病变组织（CIN）和40例非癌疾病切除的正常宫颈组织中miRNA-196a的表达,分析miRNA-196a与宫颈癌的发生发展的相关性;并通过转染的方法将miRNA-196a转入宫颈癌细胞株Siha中,观察其对Siha细胞迁移和侵袭的影响.结果：相对于CIN组织和非癌疾病切除的正常宫颈组织,宫颈癌组织中miRNA-196a的表达水平明显上调,差异有统计学意义（P ＜0.01）;miRNA-196a的表达水平与患者有无淋巴结转移、临床病理分级、临床分期和间质浸润深度密切相关（P＜ 0.01）,但与患者年龄、肿瘤直径大小和绝经与否均无明显关系（P＞0.05）;转染miRNA-196a可促进Siha细胞的迁移和侵袭.结论：miRNA-196a与宫颈癌的发生发展、迁移、侵袭密切相关.     

miRNA-497与miRNA-195基因簇在宫颈癌组织中的表达及预测靶基因的生物信息学分析

目的探讨miRNA-497-195基因簇在宫颈癌组织中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miRNA-497-195基因簇在宫颈癌发生中的作用机制研究提供理论基础。方法收集2010年3月～2012年3月在广西壮族自治区人民医院就诊患者的宫颈标本,利用miRNA芯片技术检测宫颈病变组织中miRNA表达谱,用real-time RT-PCR进行验证;采用real-time RT-PCR检测miRNA-497和miRNA-195在宫颈病变组织中的表达情况,并用Spearman法进行miRNA-497与miRNA-195相关性分析。通过生物信息学预测miRNA-497和miRNA-195的靶基因,并对其靶基因进行GO（gene ontology）功能富集分析及信号转导通路富集分析。结果芯片结果显示,宫颈癌及高度鳞状上皮内瘤变中miRNA-195和miRNA-497表现为下调（均P〈0.05）。real-time RT-PCR结果显示,miRNA-497和miRNA-195在宫颈癌组织中表现为下调,且表达存在显著性相关（r=0.983,P〈0.05）。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因大量重合,且集合功能也大量重合,并富集于细胞周期调控、生物学过程调控、转录调控、基因表达及核苷酸代谢过程等生物学过程,以及蛋白结合、核酸结合、蛋白激酶活性、连接酶活性等分子功能（P〈0.01）;KEGG通路分析涉及癌症通路、p53信号通路、GnRH信号通路、细胞外因子信号通路等信号传导通路及直肠癌、前列腺癌、甲状腺癌、黑色素瘤、慢性粒细胞性白血病、非小细胞肺癌等疾病通路（P〈0.05）。结论 miRNA-195和miRNA-497在宫颈癌组织中呈现低表达,二者表达呈显著正相关,miRNA-497-195基因簇可能是宫颈癌的抑制因子。miRNA-497和miRNA-195预测靶基因功能大量重合,并显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中。     

高尿酸通过miR-663下调转化生长因子β1抑制内皮细胞迁移

目的探讨高尿酸通过miR-663影响内皮细胞迁移功能的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞系（EA．hy926）,用600μmol／L尿酸孵育48h,实时定量PCR检测miR-663的水平,并检测高尿酸患者血清中miR-663水平;利用双荧光素酶试验预测并验证miR-663的靶基因;检测高尿酸条件下内皮细胞中转化生长因子β1（transforming growth fator beta1,TGF—β1）的表达水平,利用miR-663抑制物、TGFB1siRNA转染及划痕实验观察高尿酸如何通过miR-663及其靶基因影响内皮细胞的迁移功能。结果高尿酸培养条件下内皮细胞中miR-663表达水平明显升高,高尿酸血症患者血清中miR-663的水平也高于正常人;双荧光素酶试验结果表明TGFB1的翻译水平受miR-663直接调控;高尿酸能明显抑制细胞的迁移能力,而高尿酸条件下TGF-β1的表达水平也明显下降,转染miR-663抑制物后,TGF-β1表达水平升高,内皮细胞迁移能力也明显改善,但是利用siRNA抑制TGF—β1的表达后,miR-663抑制物不能再促进内皮细胞的迁移。结论高尿酸通过miRNA-663下调TGF—β1而抑制细胞迁移。     

miRNA-155对淋巴瘤的影响（英文）

淋巴瘤是血液系统肿瘤中最常见的一大类。在我国,霍奇金淋巴瘤占淋巴瘤的9%-10%,是一组疗效相对较好的恶性肿瘤;非霍奇金淋巴瘤占全部淋巴瘤病例的90%左右,并且近十几年来发病率逐年升高。近年来,人们逐渐发现,淋巴瘤的发生与miRNA有着极其密切的关系,miRNA在淋巴瘤的病理生理过程中所扮演的角色越来越引起人们的重视。本文主要介绍miRNA的家族成员之一,即miRNA-155,及其在弥漫性大B细胞性淋巴瘤、Bur-kitt淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤中的作用机制,为今后对于淋巴瘤的治疗提供一些新的思路。     

Apolipoprotein A-I synthesis and secretion by cultured human intestinal mucosa.

Cultured human duodenojejunal mucosa was used to study the synthesis and secretion of apoprotein A-I (apoA-I), the major protein constituent of plasma high density lipoproteins. ApoA-I, measured by radioimmunoassay, was secreted continuously into the culture medium over a period of 24 hr. The highest rate was found in the first two hours (34.6 +/- 3.0 ng/mg tissue X hr, mean +/- SE, n = 24). Secretion rate decreased with incubation time, while changes of culture medium increased the rate. ApoA-I secretion was enhanced three- to fourfold by micellar lipid solution and was inhibited by puromycin, ApoA-I synthesis was confirmed by incorporation of 14C-leucine into this apoprotein. The specific activity of apoA-I in medium ultracentrifugal fractions (d less than 1.019 and d = 1.063--1.21 g/ml) was calculated from quantitative data obtained by radioimmunoassay and radioassay of apoA-I separated by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and found to be about 12 mCi/mmol. These observations indicate that cultured human intestinal mucosa is capable of secreting newly synthesized apoA-I. Organ culture may thus serve as a tool for studying the regulating mechanisms for the synthesis and secretion of this important apoprotein.     

抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞凋亡、侵袭的影响及其靶基因探讨

目的 探讨抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞株凋亡、侵袭的影响及其可能调控的靶基因。方法通过RNAi技术抑制胆管癌细胞株RBE中miRNA-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RBE细胞中RECK基因表达的改变。应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。用体外侵袭实验分析胆管癌细胞侵袭能力的改变。结果miRNA-21在胆管癌细胞株RBE中的表达得到有效抑制,并且RECK基因及其蛋白的表达明显上调。流式细胞仪显示RBE细胞凋亡率明显增高,且抑制miRNA-21的表达后胆管癌细胞的侵袭性明显下降。结论抑制miRNA-21的表达可促进RBE细胞的凋亡,并降低其侵袭能力,RECK作为miRNA-21的靶基因参与调控过程。