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P B Schneider U Denk M Breitenbach K Richter P Schmid-Grendelmeier S Nobbe M Himly A Mari C Ebner B Simon-Nobbe 《Clinical and experimental allergy》2006,36(12):1513-1524
BACKGROUND: Alternaria alternata is one of the most important allergenic fungi worldwide. Mannitol dehydrogenase (MtDH) has previously been shown to be a major allergen of Cladosporium herbarum and cross-reactivity has been demonstrated for several fungal allergens. OBJECTIVE: The present study's objective was to clone the MtDH from an A. alternata cDNA library, express and purify the recombinant non-fusion protein and test its IgE-binding properties. Methods A cDNA library prepared from A. alternata hyphae and spores was screened for mannitol dehydrogenase by DNA hybridization with the radioactively labelled C. herbarum homologue as a probe. The resulting clone was sequenced and heterologously expressed in Escherichia coli as a recombinant non-fusion protein, which was purified to homogeneity and analysed for its IgE-binding capacity. RESULTS: The coding sequence of the full-length cDNA clone comprises 798 bp encoding a protein with a molecular mass of 28.6 kDa and a predicted pI of 5.88. Protein sequence analysis revealed an identity of 75% and a homology of 86% between the MtDHs of A. alternata and C. herbarum. The functional mannitol dehydrogenase was expressed in the E. coli strain BL21(DE3) transformed with the vector pMW172 and purified to homogeneity. The enzyme catalyses the NADPH-dependent conversion of d-fructose to d-mannitol. In IgE-ELISA and immunoblots, MtDH is recognized by 41% of A. alternata-allergic patients. In vivo immunoreactivity of the recombinant MtDH was verified by skin prick testing. Finally, inhibition-ELISA experiments confirmed cross-reactivity between the MtDHs of A. alternata and C. herbarum. CONCLUSION: Mannitol dehydrogenase (Alt a 8) represents an important new allergen of the ascomycete A. alternata that might be suitable for improving diagnostic and therapeutic procedures. 相似文献
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目的:观察核心结合因子a1(Cbfa1)对兔骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的诱导作用。方法:体外分离培养兔骨髓MSCs,用AdEasy1/Cbfa1。转染MSCs,在转染后3d,1、2、3和4周时,组织化学和免疫组化等方法检测成骨标志碱性磷酸酶和骨钙素的表达。结果:AdEasy1/Cbfa1转染后的兔骨髓MSCs表现出与成骨细胞相似的形态,并且表达碱性磷酸酶和骨钙素。结论:Cbfa1可诱导兔骨髓MSCs向成骨细胞分化。 相似文献
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本研究建立了大鼠气管上皮细胞体内-体外转化模型,大鼠气管内滴注苯并芘,三天后处死大鼠,消化气管上皮细胞,接种于无血清完全培养基。细胞形成集落后,换为选择培养基继续培养五周,统计转化率。结果显示,25mg/kg和50mg/kg的苯并芘可诱导大鼠气管上皮细胞转化及微核增加,用同样方法研究了煤焦沥青提取物,结果表明,剂量为8mg/kg和25mg/kg的煤焦沥青提取物能明显诱导大鼠气管上皮细胞转化。 相似文献
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脂蛋白(a)对肾小球系膜细胞的作用 总被引:21,自引:0,他引:21
目的探讨脂蛋白(a)[Lp(a)]对肾小球系膜细胞(GMC)的作用。方法将体外培养的系膜细胞,加脂蛋白(a)刺激后,测定细胞生长率和细胞上清中血小板活化因子(PAF)、肿瘤坏死因子(TNF)、乳酸脱氢酶(LDH)及纤维连结蛋白(FN)水平,并以未经刺激者作对照。结果经脂蛋白(a)刺激48小时,在终浓度5~20mg/L时细胞生长率轻度增加,而在50~400mg/L时细胞生长率明显下降。刺激18小时,细胞上清中PAF的水平明显高于对照,且与脂蛋白(a)浓度呈明显正相关(r=0.937,P<0.01);L929细胞的杀伤率有所增加,但未达50%;LDH的水平在脂蛋白(a)100mg/L以下时有所增加;刺激18、48、72小时后的细胞上清纤维连结蛋白均为阴性。结论脂蛋白(a)对系膜细胞体外增殖有低浓度轻度促进、高浓度抑制的双向作用,对细胞PAF的产生具有浓度依赖的促进作用,并能增加细胞上清中LDH及TNF水平,因而可通过多种途径介导肾小球损伤。 相似文献
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紫胡皂甙的高效液相色谱分离与测定 总被引:10,自引:0,他引:10
建立了高效液相色谱法,应用反相柱,以甲醇-水(66∶34)为流动相,分离了柴胡中的主要有效成分柴胡皂甙a、c、d(Saikosaponina,c,d)并用紫外法进行含量测定。 相似文献
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以聚合酶链反应(PCR)法在mRNA水平检测T淋巴细胞受体α链可变区基因表达为例,介绍用~(32)P标记的人工合成寡核苷酸探针对PCR产物特异性作阳性证实的方法。该法以干琼脂糖凝胶作为支持物、相对较为简便和省财。用Ca探针以干凝胶作支持物的杂交结果,证实29个Vα基因的PCR扩增中物均为特异性的,放射自显影的带型与位置和溴乙锭染色所示完全吻合。 相似文献
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