微小RNA-362在脑星形细胞瘤中的表达

目的研究微小RNA(microRNA,miR)-362在不同级别星形细胞瘤中的表达,探讨其临床意义及价值。方法使用定量聚合酶链反应(PCR)方法比较长治医学院附属和平医院32例星形细胞瘤患者和4例正常脑组织中miR-362的表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较使用配对t检验。结果所有星形细胞瘤组织miR-362表达(0.194±0.052)明显低于正常脑组织miR-362表达(0.436±0.044,t=8.887,P<0.05),差异有统计学意义,其中低级别星形细胞瘤组织miR-362表达(0.172±0.045)和高级别星形细胞瘤(0.202±0.070)均明显低于正常脑组织miR-362表达(t=10.101,t=6.386,P<0.05),差异有统计学意义,但低级别星形细胞瘤组织miR-362表达与高级别星形细胞瘤miR-362表达之间差异无统计学意义(t=1.284,P>0.05)。结论miR-362在星形细胞瘤组织中表达下调,但在低级别与高级别星形细胞瘤间无差异。     

神经钙黏蛋白在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的探讨神经钙黏蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法随机选取2017年8月-2019年8月浙江省肿瘤医院全子宫切除术宫颈标本存档蜡块150例,分为宫颈鳞癌组76例、宫颈上皮内瘤变组50例和正常宫颈组织组24例,统计分析3组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53、p63表达情况,并分析宫颈鳞癌组患者的临床病理特征与N-cad表达的差异。结果宫颈鳞癌组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53表达阳性率均显著高于宫颈上皮内瘤变组、正常宫颈组织组,p63表达阳性率显著低于宫颈上皮内瘤变组、正常宫颈组织组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈上皮内瘤变组患者的N-cad、N-cadherin、HIF-1α、p53表达阳性率均显著高于正常宫颈组织组,p63表达阳性率显著低于正常宫颈组织组,差异均有统计学意义(P<0.05)。宫颈鳞癌组临床分期Ⅱ期患者的N-cad表达阳性率显著高于Ⅰ期患者,组织学分级G2-G3级患者的N-cad表达阳性率显著高于G1级患者,差异均有统计学意义(P<0.05);但不同年龄、淋巴结转移患者的N-cad表达阳性率之间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论神经钙黏蛋白在宫颈癌中的表达升高,能够将一种新的潜在靶分子提供给宫颈癌的治疗。     

人白细胞介素2基因在酵母菌中的表达及发酵研究

将一带有人白细胞的介素2cDNA 的大肠杆菌——酵母菌穿酸质粒转化啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 8534-8c,再将转化子与另一啤酒酵母 Saccharomyces cervisiae CSH83—L 进行杂交,得到二倍体菌株.同时,还研究了单倍体转化子和二倍体菌株在表达重组白细胞介素2上的差异以及不同培养条件下二倍体菌株的表达情况,确定了合适的发酵条件,并进行了五立升自动发酵罐的发酵研究.     

诱发口腔鳞癌细胞凋亡嵌合基因表达载体的构建

目的：获取含凋亡基因fas表达调控元 件cdc25A片段和fas开放阅读框架的cdc25A -fas嵌合基因，构建和鉴定真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A -fas和pAdTrack-cdc25A-fas，为将口腔鳞癌细胞固有的 促细胞增殖信号转变为促细胞凋亡信号的研究奠定基础。方法:根据fa s基因、cdc25A已知序列设计合成引物，采用PCR技术从pBLF58-1质 粒中扩增得到嵌合基因cdc25A-fas；然后定向克隆至真核表达载 体pAdTrack-CMV和pAdTrack，分别转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞；卡那霉素筛 选阳性克隆；进行PCR、酶切鉴定和序列分析。结果：PCR扩增得到特异 的 1 603 bp的cdc25A-fas片段；筛选并鉴定得到含pAdTrac k-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A- fas的大肠杆菌E.coli DH5α阳性克隆。结论:成功构建了真核表 达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25 A-fas,为下一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定基础。     

bcl-2基因在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

采用链霉亲和素过氧化酶免疫组织化学方法 (S -P法 )检测 30例初发成人急性髓系白血病(AML)患者的骨髓细胞bcl - 2蛋白表达 .结果 :( 1)AML患者骨髓细胞中bcl - 2蛋白阳性表达率为( 55 12± 2 3 78) % ( 19%～ 93% ) ,显著高于正常对照 (P <0 0 1) . ( 2 )AML按FAB分型各亚型间比较 :bcl- 2蛋白表达在M1,M2 型阳性率较高 ( 60 58± 19 0 5) % ;M3 型则较低 ( 2 1 50± 6 2 2 ) % ;M4 ,M5型最高( 69 64± 14 96) % . ( 3)经标准诱导治疗后 ,完全缓解 (CR)组的bcl- 2蛋白表达显著低于未缓解 (NR)组 (P <0 0 5) .提示 :bcl- 2蛋白在AML细胞中呈高表达 ,并为白血病化疗耐药的预后指标之一 .     

维拉帕米耐药性人白血病细胞亚系的建立及其耐药机制的研究

为探讨人白血病细胞对耐药逆转维拉帕米的耐药机制,我们通过不断提高培养液中维拉帕米浓度建立维拉帕米耐药性Ｋ５６２亚系（Ｋ５６２／ＶＥＲ）,采用ＭＴＴ法测定维拉帕米、潘生丁和环孢素Ａ对Ｋ５６２、Ｋ５６２／ＶＥＲ细胞的毒性或耐药性;采用高效液相色谱仪、荧光检测器检测细胞内维拉帕米聚集量;采用Ｓ—Ｐ免疫细胞化学技术检测Ｐ—糖蛋白（ＰｇＰ）、ＧＳＴ、癌基因蛋白和抑癌基因蛋白的表达。结果显示：Ｋ５６２／ＶＥＲ细胞对ＶＥＲ的耐药程度是Ｋ５６２细胞的１０４倍,并对潘生丁和环孢素Ａ存在交叉耐药性;Ｋ５６２／ＶＥＲ细胞内ＶＥＲ聚集量比Ｋ５６２细胞下降３５～４３倍,二者均中度或高度表达Ｐ５３、Ｐ１６、ｃ—ｆｏｓ蛋白,低度表达Ｐ２１蛋白;Ｋ５６２／ＶＥＲ细胞高度表达ＰｇＰ,Ｂｃｌ－２只在Ｋ５６２细胞中表达。说明Ｋ５６２细胞系能产生对ＶＥＲ的获得性耐药性,其耐药机制可能与ＰｇＰ表达过量,并由此导致细胞内ＶＥＲ聚集下降等因素有关。     

电针对脊髓损伤早期bcl2mRNA及蛋白表达的影响

目的：探讨电针治疗脊髓损伤的机制。方法：成年雄性SD大鼠，随机分为模型(MC)组、电针(EA)治疗组、甲基强的松龙(MP)组及假手术(SO)组。采用改良的Allen’s捶击法致大鼠T10脊髓损伤，应用原位杂交和免疫组织化学方法及图像定量分析法观察脊髓损伤早期bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果：MC组脊髓损伤后6h bcl-2 mRNA表达有增高趋势，伤后24h表达增高；伤后6h bcl-2蛋白表达未见明显变化，伤后24h表达有增高趋势。EA组bcl-2 mRNA及蛋白表达均高于模型组，与MP组相比差异无显著性意义。结论：电针可上调bcl-2 mRNA及蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡，保护神经细胞。     

(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原在大肠杆菌中的高效表达

为了提高胰岛素原的表达量，用pQE-40质粒构建了(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原[(His)6-Arg-Arg- human Proinsulin，RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化，在摇瓶培养的条件下，目标产物：RRhPI以包涵体形式获得了高效表达，每升培养基收获湿菌体约27g，包涵体6g(干重1．8g)，RRhPI约540mg。该水平已超过现有文献报道的摇瓶培养的最高水平。     

组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体的表达研究进展

对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)及其突变体在大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞、丝状真菌、昆虫细胞和转基因动物乳腺等表达系统中进行表达的研究工作情况进行了综述，并对各个表达系统的优缺点进行了比较。     

Rb基因及细胞周期素D1在原发性卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义

目的研究卵巢上皮性肿瘤中pRb、cyclinD1的表达,探讨它们在卵巢肿瘤发生、发展中的作用并分析其临床意义.方法应用免疫组化S-P法检测pRb、cyclinD1在20例良性、9例交界性、31例恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达情况,分析其与临床病理指标的联系.结果 pRb的阳性表达率分别为良性卵巢上皮性肿瘤80%(18/20);交界性卵巢上皮性肿瘤66.67%(6/9);原发性卵巢上皮性癌58.06%(18/31).各组间差异无显著性(P＞0.05).恶性肿瘤组内pRb的表达与不同临床分期及淋巴结转移显著相关(P＜0.05).cyclinD1在良性、交界性、恶性卵巢上皮性肿瘤中的表达率分别为15%(3/20),55.56%(5/9),54.84%(16/31).良、恶性肿瘤间差异有显著性(P＜0.05).在卵巢恶性上皮性肿瘤中cyclinD1表达与不同临床期别、不同病理分级及有无腹水,有显著性差异(P＜0.05).临床分期越高,病理分级越低,cyclinD1阳性表达率越高.结论 pRb在卵巢恶性上皮性肿瘤中的失表达,可作为估计卵巢肿瘤恶性程度和预后的指标之一,cyclinD1的表达有利于卵巢肿瘤性质的鉴别,在卵巢癌发生的分子机制中起作用.