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91.
目的建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系.方法将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下,成瘤后行鼠间传代,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测.结果历时14个月传至5代,皮下移植瘤存活率为90%,持续6个月,体外建系(OVA-319)细胞生长稳定.镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征;染色体分布在12~46条之间,多为异倍体,显示人类肿瘤异常染色体;流式细胞术和RT-PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA-319细胞结果一致,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿,MAGE-2基因在mRNA水平异常表达.结论人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA-319细胞系为人类肿瘤的研究提供了良好的实验材料. 相似文献
92.
93.
目的:证实树突状细胞(Dendrmc cells,DCs)可通过吞噬凋亡小体获取抗原物质,探讨其在肿瘤免疫治疗中的意义。方法:利用吸附单克隆抗体-磁珠分离系统(MACS),从人脐血中分离出CD34^ 细胞,体外以重组hGM—CSF hSCF hTNF—α hFL诱导培养DCs,光镜观察诱生细胞的形态,流式细胞术(FACS)检测其表型。电镜观察和流式细胞仪检测三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡的HL-60细胞,将凋亡的HL-60细胞与培养早期的DCs共育4~8h,电镜观察DCs吞噬凋亡小体的现象。结果:CD34^ 细胞经诱生后生成了大量具有典型形态和表型的成熟DCs;电镜下见凋亡的HL-60细胞内凋亡小体形成,流式细胞仪检测DNA含量,见亚二倍体峰形成。凋亡细胞与DCs共育后,电镜下见DCs吞噬凋亡小体的现象。结论:DCs可通过吞噬凋亡小体摄取抗原物质。 相似文献
94.
槲皮素对NB4,HL—60细胞形态、PML mRNA及蛋白表达的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 探讨槲皮素对NB4,HL-60细胞的形态、PML mRNA及蛋白的表达影响。方法 以NB4,HL-60细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright′s染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PML mRNA表达采用RT-PCR法。结果 1)经槲皮素处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2)槲皮素处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL-60细胞,PML发生相似改变。3)槲皮素处理后各组细胞PML mRNA表达均无显著影响。结论 在槲皮素诱导下,PML在蛋白水平参与诱导白血病细胞凋亡机制;槲皮素能诱导,NB4,HL-60细胞凋亡,抑制白血病细胞生长。 相似文献
95.
流式细胞术分析不同剂量X射线对HL—60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡 总被引:3,自引:0,他引:3
比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性,采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用硫式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变,结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势,经2,5Cy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少,结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测之间存在一定的关系。 相似文献
96.
目的 探讨视黄酸在脂蛋白代谢中的作用。方法 采用冻干浓缩培养液载脂蛋白 RID测定法 ,分别观察 4种不同浓度的视黄酸对培养的人肝癌细胞系 Hep G2细胞载脂蛋白 ( apo) A 、A 、C 、B10 0及 E分泌的影响。结果 视黄酸对 Hep G2细胞 apo A 、A 、B10 0及 C 的分泌均有促进作用 ,对 apo E的分泌则有抑制作用。在本研究条件下 ,当视黄酸的浓度为 2× 10 - 4 m ol/ L时 ,其对 Hep G2细胞 apo分泌的影响作用最大 ,此时apo A 、A 、B10 0和 C 的分泌分别增加 14.3% ( P<0 .0 1)、2 3.8% ( P<0 .0 5 )、16 .1% ( P<0 .0 1)、47.6 % ( P<0 .0 1) ,而 apo E的分泌减少 37.2 % ( P<0 .0 1)。结论 视黄酸对 Hep G2细胞 apo A 、A 、C 、B10 0及 E的分泌有不同的影响 相似文献
97.
反义bcl-2基因抗白血病作用的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
林祥华 《福建医科大学学报》2001,35(3):215-215
目的 研究反义bcl-2基因抗白血病作用及其特点,探讨反义基因或联合药物体外净化和治疗白血病可行性。方法 (1)RT-PCR和蛋白印迹方法检测HL-60、U937、K562、CEM白血病细胞株以及常见白血病类型的bcl-2 mRNA和P26蛋白表达情况。(2)选择高表达bcl-2基因的HL-60细胞株作为靶细胞,用人工合成bcl-2正反义硫代寡聚脱氧核苷酸(PS-ODN)体外培养处理。检测bcl-2 mRNA和P26蛋白的变化;DNA梯形分析细胞凋亡,锥虫蓝拒染法和克隆培养观察细胞生长;同时将HL-60细胞与PS-ODN培养孵育7天后的活细胞腹腔接种Scid鼠,半巢式RT-PCR和病理分析该HL-60细胞在体内生物学行为改变。(3)建立三种白血病细胞株CEM、K562、HL-60 Scid鼠白血病模型和有效监测与追踪白血病细胞株的方法,掌握体内白血病细胞株生物学行为;用bcl-2正反义PS-ODN腹腔给药治疗HL-60 Scid鼠白血病模型,观察治疗后体内白血病进展变化。(4)用RT-PCR方法克隆bcl-2基因和构建其两种不同的反义RNA逆转录病毒表达载体。(5)转染高表达bcl-2的HL-60细胞,比较两种反义RNA在对抗bcl-2的作用与降低内源性bcl-2蛋白水平上的异同性。观察两种反义RNA介导的靶基因抑制对烷化溶血磷脂(ALP)和四种化疗药物诱导的HL-60细胞凋亡的影响。(6)RT-PCR检测基因转染HL-60在化疗药物作用下FGFβ1表达。结果 (1)白血病细胞株表达bcl-2有差异,bcl-2 mRNA和它的P26蛋白不平行。(2)三种白血病细胞株HL-60,K562,CEM可在Scid鼠增殖,产生典型白血病浸润模型特征,白血病增殖和浸润程度与白血病细胞生物特性有关,其顺序为CEM>K562>HL-60。(3)人工合成的bcl-2反义硫化寡脱氧核苷酸(ASPO)能够下调HL-60细胞bcl-2表达,诱导凋亡,抑制增殖和克隆形成;同时使其失去在体内的致白血病能力。(4)bcl-2反义硫代寡脱氧核苷酸,腹腔给药能够抑制肿块增长,白血病扩张,延长Scid鼠生存期,呈剂量依赖性。(5)部分编码区的反义RNA能够降低HL-60细胞内源性Bcl-2蛋白水平,提高ALP和四种化疗药物对HL-60杀伤率,促进它们诱导的HL-60细胞凋亡。(6)反义基因转染的HL-60细胞在化疗药物作用下负调控因子TGFβ1基因表达增加。结论 bcl-2反义基因可有效对抗bcl-2原癌基因表达,发挥明显的抗白血病作用,为体外净化白血病细胞和体内治疗白血病提供依据。 相似文献
98.
c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。 相似文献
99.
小鼠树突状细胞肉瘤细胞系的建立及形态学鉴定 总被引:5,自引:1,他引:5
本研究目的是建立鉴定树突状细胞肉传代细胞系,即荷LII瘤615鼠脾脏进行原代细胞培养,经传统代培养后新建立一株体外传代细胞系,经鉴定为树突状细胞肉瘤细胞系,命名为DCS。该细胞体外呈分支状。酶组织化学检查发现碱性磷酶酶、酸性磷酶酶、1非特异性脂酶、过氧化酶及胞膜ATPase均阴性。 相似文献
100.
目的 研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。 方法 琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。 结果 VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。 结论 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失 相似文献