用PCR体外定点突变技术诱导霍乱毒素A亚基突变体的构建

目的： 有效去除霍乱毒素Ａ 亚基（ ＣＴ Ａ） 的毒性作用而保存其佐剂性能。方法： 采用ＰＣＲ 体外定点突变技术（ＰＣＲ ＳＤＭ） ,设计两对引物,引入一个突变位点,通过重叠延伸法两次ＰＣＲ 扩增,使ＣＴ Ａ 编码基因第６３ 位密码子由ＣＴＣ 突变为ＴＴＴ,亦将扩增片断克隆入ＰＵＣ１９ 载体。结果： ＤＮＡ 测序结果表明在预期位点已发生突变,用ＰＣＲ 诱导成功ＣＴ Ａ 突变体。结论： ＰＣＲ 诱导突变准确、简便,为深入研究ＣＴ 免疫佐剂的作用打下了基础     

慢性进行性眼外肌麻痹与线粒体DNA缺失的关系

目的：对２例慢性进行性眼外肌麻痹（ｃｈｒｏｎｉｃ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｏｐｈｔａｌｍｏｋｅｇｉａ,ＣＰＥＯ）患者的骨髂肌中的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行缺失突变分析。方法：用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和放射自显影等方法。结果：在２例ＣＰＥＯ患者的骨骼肌标本中均存在线粒体ＤＮＡ的单一的大片段缺失突变;缺失的长度分别为４．５ｋｂ和５．５ｋｂ;突变型ｍｔＤＮＡ在总体ｍｔＤＮＡ中所占的比     

PAI-2ΔCD突变体的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

目的构建ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体基因,实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ的分离纯化方法。方法用ＰＣＲ扩增ＰＡＩ－２ΔＣＤ基因,经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后,突变体基因与原核表达载体ｐＬＹ－４重组并转化蛋白酶缺陷型菌株ＪＦ１１２５。经温度诱导表达,表达产物用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后,经高压匀浆破菌,用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实在相应相对分子质量处出现表达条带,约占全菌总蛋白的１５％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实表达产物具有ＰＡＩ－２免疫原性,溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。５Ｌ发酵菌液可得湿菌约１００ｇ,经多步纯化后,每升发酵菌液可得纯度达９７％的ＰＡＩ－２ΔＣＤ约３６ｍｇ,比活性为２８６４０ＡＩＵ／ｍｇ。结论成功构建了ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体,实现了在大肠杆菌中的表达,并成功地分离纯化了重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ蛋白。     

图像细胞分析与癌基因检测辅助诊断直肠癌

目的提高直肠癌术前活检的诊断率。方法对１７例术前活检未证实为直肠癌的患者的活检标本（实验组）和１５例正常肠粘膜活检标本（对照组）的石蜡包埋块进行常规病理检查、细胞图像分析（ＩＣＭ）、ｐ５３与ｒａｓ癌基因产物检测。结果实验组ＩＣＭ结果５３％为异倍体,癌基因检测结果ｐ５３与ｒａｓ基因表达阳性率分别为７１％、４７％。对照组的ＩＣＭ与癌基因检测结果均阴性。实验组中,常规病理检查１１例为不典型增生,５例为慢性炎症。常规病理检查为不典型增生的病例中经ＩＣＭ、癌基因检测８例为异倍体,ｐ５３与ｒａｓ基因表达阳性分别为１１和７例;慢性炎症病例中则既无异倍体,又无ｐ５３与ｒａｓ基因表达,二者之间,异倍体和两种基因表达阳性率差异均有显著意义（Ｐ＜００５）。ＩＣＭ与癌基因检测结果有较好的一致性。结论ＩＣＭ与癌基因检测,可以作为常规病理的补充,提高直肠良恶性病变的鉴别力。     

急性非淋巴细胞白血病中MGMT与p53基因突变的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因ｐ５３、ＭＧＭＴ在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中的改变。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对３１例ＡＮＬＬ患者、２２例正常人ｐ５３基因第５、６、７、８外显子和ＭＧＭＴ基因第１、４外显子进行突变分析。结果 ３１例ＡＮＬＬ中５例存在ｐ５３基因突变、４例存在ＭＧＭＴ基因突变,其中２例ｐ５３与ＭＧＭＴ同时发生突变。结论 ｐ５３基因突变在白血病发生中起一定     

采用定点基因缺失突变技术在大肠杆菌中分泌鲑鱼生长激素

目的：为获得与天然鲑鱼生长激素一致的基因工程产物,对已构建的鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒ｐＯｓＧＨ１５３进行改造,删除所编码表达产物氨基端多余的９个碱基,方法：采用ＰＡＬＴＥＲ系统进行寡聚核苷酸指导下的基因定点缺失突变。突变质粒ｐＯｓＧＨ１５８经限制性酶切图谱及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析加以证,结果：含有表达质粒ｐＯｓＧＨ１５８的大肠杆菌株经ＩＰＴＧ诱导后提取周质帽白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫     

复方云芝胶囊对丝裂霉素C诱发突变及老年自发突变的抑制作用

采用体外培养人淋巴细胞微核检测法,探讨复方云芝胶囊抗突变作用。结果表明,复方云芝胶囊（１０ｍｇ／Ｌ～５０ｍｇ／Ｌ）可显著抑制丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱发的微核形成,并可拮抗老年人自发微核,增加细胞增殖活性。     

p16和p15第二外显子HapⅡ位点在成人急性髓性白血病中的突变

目的　探讨p16和p15基因第二外显子HapⅡ位点在成人急性髓性白血病 (AML)中的突变。方法　用甲基敏感和甲基非敏感限制性内切酶切消化基因组DNA后 ,经PCR扩增和琼脂糖电泳研究 3 1例AML中无p16/p15基因第二外显子缺失的患者中HapⅡ位点的突变情况。结果　在 3 1例成人AML样本中 ,p16E2 的 4个HapⅡ位点和p15E2 的 6个HapⅡ位点均未发生突变。结论　本研究提示p16和p15基因第二外显子中因甲基化而引起的CCGG位点的突变在成人AML患者中不是主要失活方式。     

中药抗突变实验研究进展

自然界存在大量致突变物,人类长期接触致突变物可引起肿瘤、致畸、遗传缺陷等疾病。一方面人们努力降低环境污染,减少或避免致突变物/致癌物;另一方面在抗突变和抗癌研究中寻找一些有效抗突变/抗癌物质,并试图阐明其抗突变与抗癌作用机理。中药抗突变研究进展很快,前景非常广阔。笔者将近年来最新研究现状综述如下。 1 单味中药的抗突变研究 刘氏等[1]采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,探讨五加皮的体内抗诱变作用。结果五加皮对丝裂霉素(MMC)诱发的微核率和精子畸形率均有明显的拮抗作用,微核抑制率达50.5%～73.…     

南沙参多糖对亚慢性受照小鼠的抗突变作用研究

目的：研究南沙参多糖对亚慢性受照小鼠抗突变作用。方法：用^60Cγ射线全身低剂量均匀间断照射小鼠106d，累计吸收剂量为3．25Gy，检测外周血白细胞数、血小板数、睾丸精原细胞染色体畸变率、精子畸形率和骨髓嗜多染红细胞微核率。结果：辐射损伤后，外周血白细胞数、血小板数降低；染色体畸变率、精子畸形率和骨髓嗜多染红细胞微核率均增加，南沙参多糖可促进上述指标的恢复。结论：南沙参多糖对亚慢性受照小鼠损伤具有明显的保护作用，其机制与抗氧化作用有关。