原因不明复发性流产患者蜕膜NK细胞亚群特征研究

目的通过分析原因不明复发性自然流产(URSA)患者流产蜕膜组织中NK细胞亚群表型特征,探讨蜕膜NK细胞在URSA发病中的作用。方法选取URSA患者26例为URSA组,20例同期正常妊娠行人工流产者作为正常早孕组,采用流式细胞术分析蜕膜组织NK细胞亚群表型、比例及其抑制性受体CD94/NKG2A表达情况。结果蜕膜中CD3-CD56+NK细胞约占淋巴细胞的70%,是妊娠子宫蜕膜中淋巴细胞的主要类型,URSA组蜕膜NK细胞比例与正常早孕组无明显差异;正常早孕组蜕膜NK细胞主要为CD56brightCD16-亚群,约占80%;而URSA组CD56brightCD16-亚群比例为(72.2±15.2)%,明显低于正常早孕组,而CD56dimCD16+亚群比例(15.3±6.7)%,明显高于正常早孕组,均有统计学差异(P<0.05)。URSA组蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群CD94/NKG2A表达显著低于正常早孕对照组(P<0.01)。结论 URSA的发生可能与其蜕膜NK细胞CD56brightCD16-和CD56dimCD16+亚群比例失衡有关,而且蜕膜CD56brightCD16-细胞亚群抑制性受体CD94/NKG2A表达明显降低,可能引起NK细胞异常激活,参与URSA妊娠母胎免疫耐受的破坏。     

早产孕妇蜕膜细胞凋亡、周期变化及Bcl-2、Caspase-3和 p21蛋白的表达研究

Objective?To investigate the apoptosis, cell cycle and expression of Bcl-2, Caspase-3, p21 protein in decidual cells of pregnant women with preterm labor. Methods?90 pregnant women were selected for the study, including preterm labor group (n=30), full term labor group (n=30) and full term cesarean section group (n=30). Cell cycle, apoptosis and expression of related protein Bcl-2、Caspase-3、p21 were compared in three groups. Results?The apoptosis rate of decidual cells in the preterm labor group (31.6±5.2%) was significantly higher than that in the full-term labor group [(15.1±2.4)%] and full-term cesarean section group[(17.2±2.8)%] (P<0.05), and the proportion of decidual cell G0/G1 in the premature delivery group [(62.5±7.1)%] was significantly higher than that in the full-term labor group [(51.0±9.0)%] and full-term cesarean section group [(50.8±8.9)%] (P<0.05). The expression of Bcl-2 in decidual cells in preterm labor group (0.3±0.10) was significantly lower than that in full-term delivery group(1.0±0.0) and term cesarean section group(1.1±0.2), and the expression of Caspase-3 in decidual cells in preterm labor group(1.8±0.2) was significantly higher than that in full-term labor group (1.0±0.0) and term cesarean section group (1.1±0.2) (P<0.05). The p21 protein in preterm labor group (2.1±0.2) was significantly higher than that in full-term labor group (1.0±0.0) and term cesarean section group (1.3±0.2) (P<0.05). Conclusion?The apoptosis and cell cycle block of decidua cells of the pregnant women are significantly increased, and the possible mechanism is to take part in the occurrence of preterm labor by regulating the expression of Bcl-2, Caspase-3 and p21.     

CXCL12与不明原因复发性流产的相关性研究

目的 通过探讨正常早孕妇女和有复发性流产史的早孕妇女之间绒毛及蜕膜组织中趋化因子12(CXCL12)的表达,了解CXCL12在妊娠中的作用.方法 通过免疫组织化学分别检测30例正常早孕妇女和有复发性流产史的早孕妇女绒毛及蜕膜组织中CXCL12的表达情况.结果 正常早孕妇女与有复发性流产史的早孕妇女绒毛组织和蜕膜组织中CXCL12的表达比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 在妊娠早期绒毛及蜕膜组织中CXCL12的表达下降,可能在不明原因复发性流产的发生中起着重要作用.     

USP22基因在人早孕期母-胎界面的表达及意义

目的:检测早孕期绒毛及蜕膜组织中泛素特异性水解酶22(USP22)基因和蛋白水平表达,以探讨USP22在母-胎界面的生理性调节作用。方法:分别采用免疫组织化学方法、荧光实时定量PCR法、Western blot检测20例早孕期正常妊娠妇女及15例不明原因复发性流产患者绒毛、蜕膜组织中USP22的定位、mRNA及蛋白表达水平。结果:USP22在早孕期绒毛和蜕膜组织中均呈阳性表达。在蜕膜基质细胞,USP22主要定位于胞质,少部分定位于胞核;在绒毛滋养细胞,USP22主要表达于绒毛细胞滋养细胞的胞质和胞膜。实时荧光定量PCR及Western blot检测显示绒毛及蜕膜组织中均可见USP22mRNA及蛋白的表达;与正常妊娠组比较,复发性流产组绒毛USP22mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),蜕膜组织中USP22mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:USP22在人早孕期母-胎界面表达,并参与了正常早孕期绒毛滋养细胞侵袭的调控和正常妊娠的维持。母-胎界面USP22表达下降可能是导致自然流产发生的原因之一。     

人蜕膜和绒毛膜组织在鸡胚绒毛尿囊膜的种植和在体培养观察

来源于人流组织的蜕膜和绒毛膜,异种接种于发育8d的鸡胚绒毛尿囊膜(ChickenChorioallantoic Membrane,CAM)上,进行在体培养观察10d.将378块绒毛膜和808块蜕膜组织分别种植于69和122个鸡胚,鸡胚胎存活率分别为86.96%和98.36%(P<0.01),种植组织成活率分别为93.62%和93.81%;种植组织于在体培养过程中,CAM表面产生血管增生及出血现象,出血率分别为41.67%和20.37%(P<0.05).两种组织种植后均无异种排斥反应和炎症反应发生.建立CAM在体培养模型,简便快速,观察方便,可同时进行大样本实验,是一种很好的实验手段.     

炔诺酮对人子宫蜕膜神经节苷脂组分的影响

应用Ladish分部及微量分析法,对正常早孕期和服用炔诺酮(15mg/天,连用5天)早孕期妇女的子宫蜕膜神经节苷脂(Gg)进行定性和定量分析与比较。结果表明服药组的 Gg 总量(以脂结合唾液酸 LBSA 表示)为71.6±4.5μg/g 蜕膜,为正常对照组的1.35倍(P<0.05)。高效薄层层析(HPTLC)分析其图谱与对照组相同,主要成分为 GM_3、GM_2、GM_1、GD_3、GD_(1a)和 GT_(1a),但含量上有变化。GD_3含量为15.3±1.5μg/g 蜕膜。为正常时的1.91倍(P<0.025),GM_3和 GD_(1a)相对含量降低。服药组的 Gg 的 HPTLC 图谱中尚发现 Rf 值为0.035的条带,其含量为5.8±1.5μg/g 蜕膜,为对照组的4.15倍(P<0.05),其层析行为提示该条带可能为四糖基的神经节苷脂。炔诺酮作用下的蜕膜 Gg 的变化与其抗早孕作用有关。     

早孕期蜕膜免疫细胞谱及其与妊娠结局的相关性

目的探讨早孕期蜕膜免疫细胞谱变化及稽留流产对妊娠免疫细胞谱的影响。方法选取2017年9月至2018年9月深圳中山泌尿外科医院收治的行人工流产的正常早孕患者(人工流产组,n=34),行清宫术的稽留流产患者(稽留流产组,n=17)及同期于本院IVF助孕成功的正常妇女(正常内膜组,n=27)作为研究对象。运用免疫组化及数字化分析系统定量检测正常妇女子宫内膜及流产组蜕膜组织中各免疫细胞的检测阳性率。结果早孕期妊娠前后的免疫细胞谱有如下改变:妊娠早期人工流产组蜕膜CD56⁺自然杀伤(NK)细胞、CD68⁺巨噬细胞、CD83⁺成熟树突状细胞数均显著高于正常内膜组(P<0.001),而CD8⁺T细胞、Foxp3⁺调节性T(Treg)细胞及CD1a⁺未成熟树突状细胞在两组之间则无显著差异(P>0.05)。在不良妊娠结局稽留流产组患者蜕膜组织中CD68⁺巨噬细胞、CD8⁺T细胞及Foxp3⁺调节性T(Treg)细胞数均显著高于人工流产组(P<0.05),而CD56⁺自然杀伤(NK)细胞、CD83⁺成熟树突状细胞及CD1a⁺未成熟树突状细胞与人工流产组相比无显著差异(P>0.05)。结论早孕期蜕膜中NK细胞、巨噬细胞及成熟树突状细胞的适度增加有利于母胎免疫耐受的形成,但异常高表达的蜕膜巨噬细胞、CD8⁺T细胞及Foxp3⁺Treg细胞可能与不良妊娠结局有关。     

细胞间粘附分子-1在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达

为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在妊高征子宫蜕膜及胎盘中的表达,在20例正常妊娠及24例中、重度妊高征患者中,以选择性剖宫产取其子宫蜕膜及胎盘,用免疫组织化学方法检测其ICAM-1的表达,发现妊高征子宫蜕膜的血管中可见ICAM-1阳性的滋养细胞侵人,且这些血管周围有淋巴细胞浸润(P<0.05);胎盘合体滋养细胞染色明显强于正常妊娠(P<0.001).结果表明ICAM-1阳性滋养细胞侵入蜕膜血管伴血管周围淋巴细胞浸润,以及胎盘合体滋养细胞ICAM-1表达增强.提示ICAM-1介导的免疫机制在妊高征的发病中可能有重要作用.     

趋化因子受体CXCR7在人早孕期滋养细胞和蜕膜基质细胞的表达

目的 研究趋化因子受体CXCR7在人早孕期母-胎界面的表达特征.方法 收集人早孕期绒毛与蜕膜组织,免疫组织化学技术分析趋化因子受体CXCR7及CXCR4在母-胎界面的表达情况;分别分离培养人早孕期滋养细胞及蜕膜基质细胞,免疫细胞化学技术分析CXCR7和CXCR4在两种细胞的表达.结果 人早孕期绒毛与蜕膜组织及体外分离培养的人早孕期滋养细胞、蜕膜基质细胞均可观察到特异性CXCR7和CXCR4阳性染色,但两种细胞CXCR7染色强度（平均光密度值）均略低于CXCR4,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 人早孕期滋养细胞及蜕膜基质细胞共表达趋化因子受体CXCR7和CXCR4,提示CXCR7可能在母-胎免疫微环境形成中也起重要作用.