载氧血红蛋白纯化工艺研究

目的改善心脑血管缺氧载氧药物是一种创新药物。由于它半径比红细胞小400~1 000倍,易于通过毛细血管,给缺血组织及时供氧,迅速缓解或纠正缺氧状态,达到治疗抢救目的。血红蛋白的纯化工艺是载氧药物研制的重要工艺步骤。方法本研究建立了一套通过热敏法分离纯化人脐带血血红蛋白的工艺以及较为完善的纯化血红蛋白质量检测指标。结果与现有的纯化方式相比,热敏法操作简便,仪器设备造价低廉,纯化与病毒灭活同时进行,得到的纯化产品损失少,纯度高,各项理化指标达到国际水平。结论本工艺适用于规模制备纯化血红蛋白,为进一步研制治疗心脑血管缺氧载氧药物创造了有利条件。     

猪喉软骨硫酸软骨素的制备和自由基清除活性

直接用木瓜蛋白酶水解软骨,三氯醋酸除蛋白质,乙醇沉淀干燥得硫酸软骨素粗多糖,经DEAE-Sepharose fast flow离子交换层析分离纯化,高效凝胶渗透色谱和琼脂糖凝胶电泳测定其相对分子质量和纯度,比较硫酸软骨素粗品和纯品的体外自由基清除活性。结果显示硫酸软骨素粗品和纯品提取率分别为31.56±0.46%和19.79±0.78%,后者相对相对分子质量为75 174,粗品的DPPH.和.OH清除活性最强,随着产品纯度的提高,活性降低,而对于O2-.清除活性结果则相反。     

灰树花菌丝体抗肿瘤糖肽GFPS1b结构的研究

以体外抑制肿瘤细胞增殖的活性作为筛选导向，从灰树花深层发酵培养菌丝体中提取、分离纯化得到一酸性糖酞GFPS1b．HPGPC法测得其重均相对分子质量为21000．蛋白质质量分数16．60％，糖质量分数为81．32％。利用化学方法（单糖组成分析、部分酸水解、甲基化分析）和仪器方法（GC、GC—MS、红外吸收光谱、核磁共振）分析GFPS1b的糖链结构，结果表明其单糖组成主要有G1c、Ga1、Ara和少量的糖醛酸，其糖链主链由两个α-D—G1c（1→3）、α-D—Ga1（1→4）、α-D—G1c（1→3，6）和α-D—Ga1（1→6）组成的，其中葡萄糖基的6位发生取代，取代侧链主要为α-L—Ara-（1—4）-α-D—Glc（1→。可以认为GFPS1b为一新糖肽。     

重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究

目的　确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法　将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果　确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论　获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO 2结构与功能之间关系的研究提供了可行的纯化路线     

方格星虫多糖分离纯化及性质鉴定

以方格星虫（Sipunculus nudus）体壁和血液为试验材料，经胰蛋白酶水解，Sevage法去除蛋白质，乙醇沉淀得到粗多糖，透析并冷冻干燥后分别得到方格星虫体壁多糖（SWP）和血液多糖（SBP）。经凝胶渗透色谱分析，SWP和SBP均为单一组分，相对分子质量分别为284528和198212。红外光谱分析表明，两种多耱结构相似，不含硫酸基团，均含有葡萄耱、半乳糖、木糖和阿拉伯糖。SBP含有乙酰氨基，而SWP不含乙酰氨基，它们是以α-糖苷键或β-糖苷键连接的呋喃多糖。     

微血管内皮细胞的分离、纯化和功能特性

近年来的研究表明，微血管内皮细胞在形态、表型和功能等方面都不同于大血管内皮细胞，因此，采用微血管内皮细胞，而不是脐静脉内皮细胞来研究发生于组织器官水平的病变已经成为一种共识。然而，由于细胞分离培养技术的限制，微血管内皮的研究在我国还是一个薄弱的研究领域。近年来随着微血管内皮细胞分离、纯化、培养技术的提高，各种不同组织器官的微血管内皮细胞相继培养成功。利用体外培养的微血管内皮细胞作为细胞模型来研究各种疾病的发病机制已经成为医学研究的重要手段。本文回顾了近年来的相关文献，就微血管内皮细胞的分离培养、鉴定及不同组织器官微血管内皮细胞的功能特性作一简要综述。     

应用A蛋白分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体

目的 分离纯化鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα(高亲和力的IgE的Fc段受体)的单克隆抗体。方法 先培养ER-E5．3细胞，获得大量的含抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体的培养上清。然后应用A蛋白-Sphrose CL-4B制备亲和层析柱，分离纯化细胞培养上清中的单克隆抗体。结果 分离纯化的单克隆抗体纯度高，活性强。结论 应用A蛋白可以很好分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体。     

人精子甘露糖受体对精卵融合的影响

目的：进一步探讨人精子甘露糖受体（MR）在精卵融合中的作用。方法：采用改良后的甘露糖-琼脂糖凝胶亲和层析法分离纯化人精子MR，并将提纯的人精子甘露糖受体（pMR）作用于去透明带的金黄地鼠卵母细胞，应用透射电子显微镜技术和罗丹明偶联的兵豆凝集素（TAITC-LCA）免疫荧光标记技术观察pMR对卵子的影响。同时以pMR免疫小鼠获得抗MR抗血清，将其同人精子共同孵育一段时间，采用异种体外受精实验模型，即精子穿透试验（SPA），观察其对人精子与卵母细胞体外受精的影响。结果：（1）人精子MR能够诱发去透明带金黄地鼠卵母细胞中皮质颗粒的胞吐，并引起卵母细胞表面微绒毛形态和数量发生改变；（2）皮质颗粒胞吐后，其内容物可结合到卵3膜表面；（3）抗MR抗血清预处理精子可抑制精子与卵子的结合与融合，使受精率、穿透指数和结合指数下降，并均有剂量依赖性。结论：人精子MR在受精过程中起重要作用，其主要作用可能是介导精-卵膜融合并促进卵母细胞的活化。