烟碱样胆碱能受体（N-AChR）的分离提纯以及在药理毒理研究中的应用

本报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化N—AChR，研究其生化性质，并在毒物、药物、实验性重症肌无力（EAMG）等方面进行了研究。一、N—AChR的分离提纯：N—AChR膜片可用于研究天然状态下受体性质和功能。我们用几次蔗糖密度连续梯度和不连续梯度离心分离，得到的受体膜片无活性胆碱酯酶，比活性达5nmol α-神经毒素结合点／mg蛋白。采用眼镜蛇α-神经毒素为配基制成的亲和层析柱，提纯了N—AChR蛋白，达到了等电聚焦纯，等电点为5．2。发现PAGE出现两条带，     

烟碱与强直刺激诱导大鼠海马CAl区的长时程增强具有不同机制

目的：研究烟碱与强直刺激在海马CAl区诱导的长时程增强是否具有不同机制．方法：细胞外记录离体海马脑片CAl区锥体细胞层群体峰电位．结果：烟碱10μmol/L可易化强直刺激诱导的长时程增强，同样，强直刺激也可易化烟碱10μmol/L诱导的长时程增强．MK—801 10μmol/L或N^G-nitrol-L-arginine methyl ester (L-NAME) 20 μmol/L可阻断强直刺激诱导的长时程增强，但不能抑制烟碱10μmol/L诱导的长时程增强．结论：烟碱与强直刺激在海马CAl区诱导的长时程增强具有不同的突触机制．     

中间期肌无力综合征logistic回归模型的建立

目的:尝试建立中间型综合征的logistic回归模型,以便较为客观地预测中间型综合征(IMS)的早期发生.方法:连续观察2000年4月～2009年2月广西医科大学附属三院收治的急性有机磷农药中毒患者136例,按成组设计分为IMS组27例与非IMS组109例.观察指标为入院24 h内的农药种类,服用剂量,复能剂量,洗胃次数,血糖,血钾,胆碱脂酶(AchE),红细胞,肝功白蛋白,年龄,是否出现烟碱样症状,呼吸骤停,阿托品化及导泻.采用logistic逐步回归方法筛选变量建立回归模型.结果:建立预测模型为:[LnR/(1-R)]＝-1.844+2.196烟碱样症状-0.053胆碱酯酶.ROC曲线下面积为0.884;Hosmer-Lemeshow拟合优度检验P值为0.469,表明模型拟合较好.结论:烟碱样症状和AchE作为IMS的两个主要因素建立回归模型后可应用于IMS的早期预测.     

碘化二甲基粉防己碱对骨骼肌细胞烟碱诱发电流的抑制作用

目的：比较碘化二甲基粉防己碱（DMTI）和二氢－β－刺桐啶碱（dHβE)对烟碱诱发电流的抑制作用，并确定DMTI在烟碱受体上的作用位点，方法：取新生Wistar大鼠骨骼肌细胞体外培养获得肌球，用膜片箝全细胞记录技术，观察肌球的烟碱诱发电流。结果：0．08mmol.L^-1 DMTI抑制烟碱诱发电流幅度的作用与0．02mmol.L^-1dHβE的作用类似，向单个细胞持续给烟碱覆盖诱发电流的全过程，电流的衰减过程反映了烟碱受体的失敏，DMTI使烟碱诱发电流的慢失敏时间常数减小，即加速受体失敏，但没发现dHβE有这种作用，在－30，－50，－70，－90mV钳制电压处观察电压改变对DMTI和对DHβE作用的影响，没有发现DMTI或dHβE抑制烟碱电流的作用随钳制电压改变而改变，即两的作用都是非电压依赖性的，表明DMTI和dHβE都不是离子通道阻断剂。结论：由于烟碱受体是变构蛋白，变构调节剂能加速受体失敏，DMTI的抑制作用符合变构调节剂的作用特点，并且作用位点不在烟碱受体离子通道，而dHβE不是变构调节剂。     

新AMD治疗药将免除眼内注射的痛苦

Athenagen公司开始了用于湿性AMD（年龄相关性视黄斑变性）的抗血管生成药美卡拉明（mecamylamine，ATG003）（Ⅰ）的临床试验。（Ⅰ）可抑铹烟碱乙酰胆碱（nACh）受体，并显示能减少血管生成和血管通透性（这是AMD的特征）。该产品是一种眼药水配方，一天自我给药一次或二次，从而免除眼内注射的痛苦。Ⅰ期临床试验预计选录约40例病人，分4个剂量组，预期于2006年12月份完成，规模更大的Ⅱ期临床预计于2007年上半年开始。     

烟碱对帕金森病小鼠保护效应的研究

目的观察帕金森病(PD)模型小鼠自主行为及脑纹状体中多巴胺（DA）代谢的变化,研究烟碱在PD中的作用。方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立C57BL小鼠PD模型,分别应用高效液相色谱-电化学以及免疫组织化学方法检测MPTP和烟碱对C57BL小鼠纹状体DA、二羟基苯乙酸(3,4-dihydroxyphenlaceticacid,DOPAC)、高香草酸(hemovanillicacid,HVA)水平及酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化的影响。结果注射MPTP后,小鼠自主行为减少,自主行为计数为44.86±8.51,烟碱能抑制这一作用,MPTP+烟碱组自主行为计数为57.28±3.27(P＜0.01）,并能明显减轻MPTP引起的小鼠纹状体DA〔分别为(0.73±0.28)μg/g、(1.40±0.19)μg/g,P＜0.01〕、DOPAC〔分别为(0.41±0.13)μg/g、(0.90±0.09)μg/g,P＜0.01〕、HVA〔分别为(0.31±0.07)μg/g、(0.47±0.19)μg/g,P＜0.01〕的降低及TH阳性神经元的损害,TH阳性神经元计数分别为20.04±2.14和35.75±3.01,P＜0.01。结论烟碱对PD小鼠具有一定的保护作用。     

吸烟与尼古丁对DSS肠炎小鼠免疫反应的影响机制

炎症性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD),IBD的发病机制至今不明,但是免疫功能异常在IBD发病机制中的重要作用是不容置疑的。临床流行病学研究已经证明,吸烟可以缓解UC患者的临床症状,但对CD却有恶化作用。临床观察亦发现,尼古丁灌肠和尼古丁皮贴剂对活动性UC具有治疗作用,基础研究及动物实验结果亦提示,吸烟对UC的治疗作用可能与尼古丁有关。明确吸烟/尼古丁对UC/CD的作用机制和调控环节(因素),有助于进一步澄清UC/CD在发病机制以及治疗原则等方面的异同,为IBD的预防、综合治疗提供依据。 1 材料和方法 1.1 材料野生型(购自SLC Co.,LTD.Shizuoka,Japan)和IFN-γ基因敲除(Bar Harbor,ME,USA)雄性BALB/c小鼠,6～8周龄,体质量20g～25g。饲养于日本弘前大学医学部动物实验中心,IBD模型制作依照Okayasu et al的方法,小鼠给     

烟碱对心肌缺血/再灌注损伤大鼠炎症细胞因子的影响

目的 探讨烟碱对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠炎症细胞因子的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、I/R组、烟碱高剂量(400μg/kg)组、烟碱低剂量(40μg/kg)组及α-银环蛇毒素(α-BGT,1μg/kg)组5组,每组10只.采用结扎心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注90 min制作大鼠心肌I/R损伤模型;假手术组仅穿线不结扎.制模前30 min各药物组颈静脉注射相应剂量药物干预,假手术组和I/R组给予等量生理盐水.于再灌注末取右颈动脉血,测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-10浓度和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)活性;然后处死动物,取缺血区心肌组织测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应检测心肌组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白及mRNA表达,并观察心肌超微结构.结果 与假手术组比较,I/R组血浆TNF-α、IL-8、IL-10、CK-MB、cTnI、心肌MPO活性及ICAM-1蛋白和mRNA表达均显著升高[TNF-α(ng/L):158.7±32.7比31.5±5.8,IL-8(ng/L):0.71±0.06比0.30±0.04,IL-10(ng/L):69.0±7.8比41.4±4.3,CK-MB(U/L):2 540±169比1 120±102,cTnI(μg/L):26.2±4.6比0.9±0.2,MPO(U/g):4.2±0.6比1.6±0.4,ICAM-1蛋白:0.210±0.025比0.100±0.018,ICAM-1 mRNA:1.82±0.23比1.18±0.20,P＜0.05或P＜0.01],病理学显示心肌组织损伤较重.与I/R组比较,烟碱高剂量组血浆TNF-α、IL-8降低[TNF-α(67.3±9.8)ng/L,IL-8(0.47±0.04)ng/L],IL-10升高[(147.5±12.5)ng/L],CK-MB、cTnI及心肌MPO活性、ICAM-1蛋白和mRNA均降低[CK-MB(1 282±145)U/L,cTnI(4.7±1.4)μg/L,MPO(2.5±0.4)U/g,ICAM-1蛋白0.140±0.026,ICAM-1 mRNA 1.31±0.25,P＜0.05或P＜0.01],心肌组织损伤减轻;而烟碱低剂量组和α-BGT组上述指标与I/R组比较差异无统计学意义.结论 烟碱可阻断内皮细胞表达黏附分子,阻断中性粒细胞黏附、游出,改善抗炎/促炎反应平衡,从而拮抗大鼠心肌I/R损伤时的过度炎症反应.