基于不同Caspase凋亡通路的玄参环烯醚萜总苷抑制心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究玄参环烯醚萜总苷抑制心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法:将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和玄参环烯醚萜总苷低、中、高剂量给药组,每组10只。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎。各剂量药物组大鼠在造模成功后分别灌胃玄参环烯醚萜总苷混悬液,每次剂量为50、100、200 mg/kg(以总苷提取物质量计),灌胃体积为10 m L/次,每天2次,连续给药7 d;假手术组和模型组大鼠同法灌胃等体积生理盐水。记录大鼠术前、术后及给药7 d过程中的Ⅱ导联心电图S-T段变化情况;检查大鼠心功能指标;采用比色法、免疫抑制法或酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)、N末端钠尿肽原(NT-pro BNP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况;采用比色法检测心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;采用ELISA法、酶解比色法或酶解荧光法检测心肌细胞中Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶8(Caspase-8)、Caspase-9、Caspase-12、Caspase-3、Calpain的蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心电图S-T段显著抬高,左室舒张末期内径、左室收缩末期内径均显著增加,左室射血分数、短轴缩短率均显著降低;血清中LDH、CK-MB、cTnⅠ、NT-pro BNP、TNF-α水平均显著升高;心肌组织中有大量黄褐色凋亡细胞;心肌组织中SOD活性显著降低,MDA含量显著升高;心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比值均显著降低,Bax、Cyt C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Calpain的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,各剂量药物组大鼠的上述指标及心肌组织病理学变化均有显著改善;心肌细胞中Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比值均显著升高,Bax、Cyt C、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12、Calpain的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:玄参环烯醚萜苷可同时通过抑制Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12相关的3条凋亡通路,继而抑制Caspase-3的激活,从而起到抗心肌细胞凋亡作用。     

HPLC法测定西红花不同部位中西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ

目的建立HPLC法测定西红花Crocus sativus L.不同部位中西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ的含有量。方法西红花不同部位乙醇提取物的分析采用依利特hypersil ODS2柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水(50∶50);检测波长440 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃。结果西红花苷-Ⅰ和苷-Ⅱ分别在1.406～50.48μg/mL(R~2=0.999 9)、1.044～30.65μg/mL(R~2=0.999 9)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.32%(RSD=1.15%)、102.16%(RSD=1.59%)。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于西红花的质量控制。     

白芍总苷胶囊联合艾拉莫德治疗干燥综合征临床观察

目的探讨白芍总苷胶囊联合艾拉莫德治疗干燥综合征的效果。方法选取2017年1月—2018年5月就诊的46例干燥综合征患者,随机分为2组。对照组在常规治疗的基础上口服艾拉莫德,观察组在对照组的基础上联合白芍总苷胶囊治疗。比较2组治疗效果。结果 2组治疗后的眼干、口干、雷诺现象以及关节痛等症状评分值均明显降低(P 0. 05),且观察组明显低于对照组(P 0. 05); 2组治疗后的红细胞沉降率、免疫球蛋白G和类风湿因子水平均明显降低(P 0. 05),且观察组明显低于对照组(P 0. 05)。结论白芍总苷胶囊联合艾拉莫德对干燥综合征患者的治疗效果明显优于单用艾拉莫德,值得临床应用。     

雷公藤多苷对寻常型银屑病患者外周血Th17/Treg相关细胞因子的影响

目的 观察雷公藤多苷治疗前后寻常型银屑病患者血清辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)相关细胞因子白介素-17(IL-17)，白介素-23(IL-23)和白介素-10(IL-10)的含量，探讨雷公藤多苷治疗寻常型银屑病的作用机制。 方法 对蚌埠医学院第一附属医院皮肤科2016年12月—2017年6月就诊的41例寻常型银屑病患者采用口服雷公藤多苷片治疗，每日3次，每次20 mg，疗程8周，以银屑病皮损面积和严重程度(PASI)评分评价疗效；采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组及患者治疗前后血清中IL-17、IL-23和IL-10水平变化。 结果 寻常型银屑病患者外周血Th17相关细胞因子IL-17和IL-23水平显著高于正常对照组(均P＜0.01)；而Treg相关细胞因子IL-10水平显著低于正常对照组。雷公藤多苷治疗后IL-17和IL-23水平明显降低，与治疗前相比差异有统计学意义(均P＜0.01)；而IL-10水平明显升高，与治疗前相比差异也有统计学意义(P＜0.01)。雷公藤多苷治疗后PASI评分与治疗前相比显著下降，差异有统计学意义(P＜0.01)。患者雷公藤多苷治疗前后PASI评分与IL-17和IL-23水平呈正相关性，而与IL-10呈负相关性(均P＜0.01)。 结论 雷公藤多苷治疗寻常型银屑病疗效显著，可能通过调节Th17/Treg相关细胞因子水平发挥其治疗作用。      

香菊颗粒中黄芪甲苷含量测定方法的改进及其与原方成分的一致性研究

目的:改进香菊颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法,并对相关制剂与原方成分的一致性进行评价,为中药复方的现代化制剂提供科学依据。方法:建立高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定香菊颗粒中黄芪甲苷的含量,并与原标准的薄层扫描法进行比较。以升麻素苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸、迷迭香酸、蒙花苷、木兰脂素为对照品,采用HPLC法测定自制香菊颗粒、香菊胶囊、香菊片在水中的释放成分,并以《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)》比较不同香菊制剂与原方干膏粉的指纹特征图谱;同时,采用HPLC-ELSD法测定并比较不同香菊制剂与原方干膏粉在水中的黄芪甲苷释放度。结果:所建立的黄芪甲苷含量测定HPLC-ELSD法专属性良好;黄芪甲苷检测质量浓度的线性范围为0.13～2.10 mg/mL;进样精密度、重复性、稳定性RSD均小于3%(n=6);平均加样回收率为97.66%(RSD=1.01%,n=6)。以此方法测得黄芪甲苷平均含量为0.398 mg/g(RSD=1.01%,n=3),较薄层扫描法偏差更小。特征指纹图谱比较结果显示,香菊颗粒、香菊胶囊、香菊片与原方干膏粉之间相似度均达0.850以上;香菊颗粒、香菊胶囊、香菊片和原方干膏粉在水中的黄芪甲苷平均释放度分别为0.392、0.358、0.349、0.389 mg;与原方干膏粉比较,香菊颗粒中黄芪甲苷的释放度差异无统计学意义(P>0.05),而香菊胶囊、香菊片中黄芪甲苷的释放度差异有统计学意义(P<0.01)。结论:所建立的HPLC-ELSD法准确、可行,可用于香菊颗粒中黄芪甲苷的含量测定;香菊颗粒与原方成分具有一致性。     

凉血散瘀方对肾虚血瘀型 IgA 肾病患者的疗效观察

〔摘 要〕 目的：分析凉血散瘀方加减辅助雷公藤多苷、醋酸泼尼松片治疗肾虚血瘀型 IgA 肾病患者的临床效果。 方法：选取三明市中西医结合医院 2019 年 6 月至 2020 年 6 月期间收治的 70 例肾虚血瘀型 IgA 肾病患者，依照治疗方案不同分为 观察组与对照组，各35例。对照组给予西药治疗；观察组在对照组基础上加用凉血散瘀方加减治疗。比较两组治疗效果。 结果：观察组患者治疗总有效率为 91.43 %，高于对照组的 71.43 %，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。治疗前两组患者的尿红细 胞个数、血清肌酐（Scr）、血尿酸（SUA）、24 h 尿蛋白定量、Ⅳ 型胶原（C–Ⅳ）、基质金属蛋白酶组织抑制物 –1（TIMP–1） 及层粘连蛋白（LN）比较，差异无统计学意义（P ＞ 0.05）；治疗后两组患者的尿红细胞个数、Scr、SUA、24 h 尿蛋白 定量、C–Ⅳ、TIMP–1 及 LN 均低于治疗前，且观察组患者的尿红细胞个数、Scr、SUA、24 h 尿蛋白定量、C–Ⅳ、TIMP–1 及 LN 均低于对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。观察组患者不良反应发生率为 2.86 %，与对照组的 8.57 % 比较，差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 结论：凉血散瘀方联合雷公藤多苷、醋酸泼尼松片治疗肾虚血瘀型 IgA 肾病患者， 可进一步改善患者病情，调节血脂水平，改善肾脏纤维化，且安全性不受影响。     

菟丝子雌激素样作用质量标志物的筛选及含量测定

目的初步筛选黑龙江产小粒菟丝子雌激素样作用的质量标志物,为后续实验研究及质量控制提供参考依据。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOFMS/MS)技术对菟丝子提取物进行定性分析,并建立菟丝子不同极性部位的指纹图谱。以小鼠子宫系数、子宫内膜厚度和血清雌激素水平评价不同极性部位的雌激素样活性,通过双变量相关分析和灰色关联度分析构建化学物质组与雌激素效应的组-效相关性,筛选质量标志物,并建立其中5个质量标志物的含量测定方法。结果在正、负离子扫描模式下共发现10个与菟丝子雌激素样作用相关的指标成分,分别为金丝桃苷、紫云英苷、豆甾醇、新菟丝子苷C、芹菜素、山柰酚、6-O-反式-对香豆酰基-呋喃果糖-(2→1)-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、异鼠李素和2,6-十八碳二炔酸。对其中5个质量标志物进行了含量测定,质量分数分别为金丝桃苷(2.753±0.097)mg/g、槲皮素(1.139±0.107)mg/g、芹菜素(1.104±0.047)mg/g、山柰酚(1.144±0.079)mg/g、异鼠李素(0.697±0.074)mg/g。结论基于组-效关联思路可初步发现黑龙江产小粒菟丝子的质量标志物,所建立的质量标志物含量测定方法准确、稳定。     

一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中4种黄酮

目的建立一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷和紫云英苷的含有量。方法杜仲叶50%甲醇提取物的分析采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长360 nm。以槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷为内标,计算芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的相对校正因子,计算其他3种成分的相对校正因子,再测定其含有量。结果槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷分别在5.37~161.00(r=0.999 9)、0.43~12.84(r=0.999 9)、1.58~47.33(r=0.999 8)、0.42~12.65(r=0.999 7)μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.27%、96.10%、95.30%、96.72%,RSD分别为1.90%、1.12%、1.07%、1.37%。一测多评法所得结果接近于外标法。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲叶的质量控制。