增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）自身增强子I（enhancerI，ENHI）对HBV DNA疫苗免疫应答的影响。方法 采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原（HBsAg）和HBsA-ENHI基因片段，重组到载体VR1012中，构建两种HBV DNA疫苗，转染CADS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB／c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果 转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHI的HBV DNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高，两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异；免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL），两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHI可使HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加，对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB／C小鼠引起的免疫应答无明显影响。     

腹腔穿刺诊断复合伤中闭合性腹部外伤68例体会

腹腔穿刺对腹部闭合伤的诊断有实用意义，特别是多发伤、复合伤时，病情危重，常因伴昏迷或休克，不能确切提供病史，也不宜搬动的情况下，诊断性腹腔穿刺在确定是否剖腹探查方面起着决定性作用。自1995年至2005年间我科共收治伴发闭合性腹部伤的复合伤68例，均经腹腔穿刺明确诊断，现报告如下：     

结核分支杆菌rpoB基因突变与耐利福平的临床应用

目的：研究结核分支杆菌耐利福平（RFP）分离株rpoB基因突变情况并评价其应用价值。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR—SSCP）方法对355株结核分支杆菌临床分离株（其中敏感株109株，耐RFP或含耐RFP株246株）rpoB基因进行检测，并对其中17株耐药株用双氧末端终止法进行测序分析。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，109株药物敏感株的rpoB基因均无突变，特异性100％；246株耐药株中，225株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性91．5％。17株耐药株（其中SSCP异常11株，正常6株）PCR扩增产物经测序证实，11株在531位密码子TCG-TTG，4株在526位密码子CAC-TAC，1株在516位密码子GAC—GTC，1株未改变。结论：rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制；其最常见的突变位点是531位色氨酸和526位组氨酸，应用PCR—SSCP技术可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性。     

土壤环境基因组技术及其在新药发现中的应用

土壤是微生物最重要的生境，土壤微生物具有极大的多样性。然而传统培养技术只能得到约1％的微生物纯培养，其余都是未被纯培养微生物。利用土壤环境基因组技术，可以把未被纯培养微生物的基因克隆到载体中并在宿主中进行表达，获得比已培养微生物丰富的代谢产物多样性，这为我们发现新颖结构先导化合物以及新药开辟了新的道路。本文介绍应用环境基因组技术构建土壤DNA文库的思路和方法。     

更昔洛韦与阿昔洛韦治疗带状疱疹116例疗效比较

阿昔洛韦治疗带状疱疹国内已有文献报道,更昔洛韦是继阿昔洛韦后开发的广谱抗DNA病毒药,是目前最新的抗疱疹病毒药。我们于2004年1月~2005年2月在住院患者中用该药治疗带状疱疹并与阿昔洛韦进行比较,现将结果报道如下。临床资料病例选择:带状疱疹病人病程≤7天,年龄17~70岁,1周内未服用或外用抗病毒药物者,排除严重肝、肾功能不全、全身衰竭、肿瘤、自身免疫性疾病患者及应用糖皮质激素或免疫抑制剂者、对阿昔洛韦或更昔洛韦过敏者及妊娠和哺乳期妇女。按入院顺序随机分为治疗组和对照组,治疗组60例,对照组56例,两组的年龄、性别、病程以…     

抗-HBs(+)患者血清HBV-DNA定量检测 --附24例阳性病例分析

近一时期 ,国内外均有抗 -HBs(+ )的HBV感染的报道。本文收集了 2 4例类似病例 ,男 15例 ,女9例。最大 66岁 ,最小 7岁 ,平均 2 5 8岁。 9例ALT轻度升高 ,19例有乏力、腹胀、肝区不适等症状 ,8例有家族史。抗HBc -IgM阳性 2例 ,抗HBc -IgG阳性 8例 ,抗 -HBe阳性 5例 ,1例合并HCV感染。乙肝五项中仅抗 -HBs一项阳性 15例。 2 4例抗 -HBs(+ )患者血清HBVDNA含量由 1 6ng/ml到4 5 3ng/ml不等。乙型肝炎的临床表现是多种多样的 ,一般认为 ,血清HBsAg阴性提示无HBV感染 ,而HBsAg阴转 ,尤其抗 -HBs阳转为机体已清除HBV的标志…     

布鲁氏菌病感染与免疫研究近况(续前)

3 布氏菌在单核细胞内生存、繁殖和感染的可能因素 我们知道,布氏菌是胞内寄生菌,主要寄生于机体的单核细胞(包括巨噬细胞)内,在胞内生存、繁殖后才能发挥其在体内的致病作用。因此,将布氏菌能在胞内寄生能力视为其致病基础。3.1 不同血清对布氏菌调理及在胞内生存的作用血清对细菌调理吞噬作用的影响是肯定的,尤其     

考马斯亮蓝染色在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用

在研究医学媒介节肢动物与宿主相互关系过程中，经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，以分析功能成分的变化及作用关系，通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱，可识别不同的蛋白，或用凝胶电泳法分析DNA，其中的关键显色技术是考马斯亮蓝染色法。本文结合实际研究的经验，介绍一种快速显色的技术，供相关人员参考使用。本实验流程仅需三小时，且具有快速、安全、染色及观察（色带）简便等优点。     

贲门失弛缓症（AC）临床研究荟萃精彩导读

烧心在AC患者中较常见；AC有多种病理组织学改变；原发性AC患者食管黏膜活检的DNA分析；AC患者血清改变了胃底肌间神经丛表型和NO介导的运动；磁共振透视检查可评价食管动力失调；腹腔镜肌层切开术治疗AC。     

慢性乙型肝炎患者基因型以及其病毒载量前C区突变的研究

乙型肝炎病毒是引起慢性病毒性肝炎的重要病原之一，并可导致肝硬化和肝癌发生，严重危害人类健康。根据HBV基因组DNA序列差异〉8％为判断标准，HBV被分为A-G八个基因型，而且其分布有地域性差异。基因型是影响病毒复制，抗病毒治疗疗效以及病毒变异的重要因素，基因型且与疾病的预后、治疗药物的选择等均有一定关系。作通过实时荧光定量PCT、多引物对巢式PCR技术和DNA序列分析，分别测定142例慢性乙肝患血清中HBV DNA的病毒载量、乙肝病毒的基因型以及其前C区（G1896A）突变，旨在探讨浙江部分地区的HBV基因型的分布情况以及各基因型之间的病毒及前C区的突变的差异。为以后选择抗病毒药物治疗打下理论基础；现报告如下。