凋亡相关蛋白Apr-2的克隆、测序及初步表达

目的: 从HL-60细胞凋亡模型中克隆凋亡相关蛋白Apr-2编码区基因,并对其进行表达,为进一步研究Apr-2的结构功能及多克隆抗体的制备奠定基础.方法: 建立HL-60细胞凋亡模型,提取HL-60凋亡细胞总RNA,以RT-PCR方法获取Apr-2 cDNA编码区全序列,将其与PGEM-T Easy载体连接,转化E.coli DH5α,构建重组克隆载体PGEM-TEasy/apr-2,测序正确后,将目的片段亚克隆入PGEX-4T-2原核表达载体,并转化大肠杆菌, IPTG诱导重组蛋白质表达,分析蛋白质在细菌中的表达分布,进行凝胶自动扫描分析. 结果:序列分析表明,与GenBank中已登录的Apr-2 cDNA编码区序列比较,完全一致.表达的融合蛋白占菌体总蛋白质的40%以上,主要以包涵体的形式存在. 结论:成功的获得了细胞凋亡模型HL-60中Apr-2 cDNA编码区的克隆及其融合蛋白表达产物.     

血液透析患者C-反应蛋白与心血管疾病的关系

目的:探讨血液透析患者的慢性炎症与心血管疾病的关系.方法:对64例稳定的血液透析患者进行统计分析慢性炎症的标志物-血C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)和心血管疾病(心肌梗死、心绞痛及心力衰竭)的关系.结果:64例患者中有28.1%(18/64)的患者CRP超过正常值(正常值为＜5 mg/L),平均血CRP12.61 mg/L±4.81 mg/L(5.90 mg/L～21.4 mg/L).其中有心血管疾病患者27例,无心血管疾病患者37例.心血管疾病组的CRP(7.79 mg/L±6.61 mg/L)明显高于无心血管疾病组(2.14 mg/L±3.59 mg/L)(P＜0.01).多元Logistic逐步回归分析证实:CRP是心血管疾病的独立致病因素.结论:血液透析治疗的患者确实存在慢性炎症;慢性炎症与心血管疾病有关.     

不同类型高脂血症患者血清sVCAM-1测定的临床意义

目的 :探讨血清可溶性血管细胞黏附分子 (sVCAM 1)浓度在不同类型高脂血症中的临床意义。方法 :应用酶联免疫吸附 (ELISA)法测定 6 6例不同类型高脂血症患者血清sVCAM 1的浓度 ,与正常对照组比较。结果 :高胆固醇组、高胆固醇高甘油三酯组 ,其血清sVCAM 1浓度分别为 (999 81± 16 5 0 3)ng/ml、(10 5 5 4 2± 14 8 6 4 )ng/ml,均高于正常对照组 (P <0 0 1) ,而高甘油三酯组血清sVCAM 1为 (85 1 32 170 5 9)ng/ml,虽高于正常对照组 (P <0 0 5 )。但均低于高胆固醇组和高胆固醇高甘油三酯组 (P <0 0 1) ,高胆固醇组与高胆固醇高甘油三酯组的血清sV CAM 1浓度比较未显示统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :高脂血症患者血清sVCAM 1浓度高于正常对照组 ,不同类型高脂血症患者血清sVCAM 1浓度不同 ,因此 ,血清sVCAM 1可作为评价动脉粥样硬化危险性的血清学指标之一。     

肺癌组织中血管内皮生长因子受体Flt1及KDR的表达及其与肿瘤转移和预后的关系

①目的　探讨肺癌中血管内皮生长因子受体Flt1、KDR的表达与其转移及预后的关系。②方法　应用免疫组织化学PowerVisionTM PV90 0 0法 ,测定 75例肺癌标本中Flt1、KDR的表达。③结果　肺癌组织中Flt1、KDR的表达较为广泛 ,主要位于肿瘤细胞胞浆及胞膜上 ,纤维母细胞和血管内皮细胞胞浆中亦有表达。Flt1、KDR在肿瘤细胞中的阳性率均显著高于在间质纤维母细胞中的表达 (χ2 =6 .0 7、5 .88,P <0 .0 5 )。肿瘤细胞及纤维母细胞中该两种受体的阳性率在不同年龄、不同性别及不同病理类型、不同病理分级之间差异均无显著性 (χ2 =0 .0 1～4 .84 ,P >0 .0 5 ;P =0 .2 9～ 0 .79)。肿瘤细胞中Flt1、KDR的阳性表达率在 3组不同大小的肿瘤间差异均有显著性(χ2 =1 0 .35、7.2 9,P <0 .0 5 ) ,而纤维母细胞中差异均无显著性 (χ2 =2 .86、2 .5 6 ,P >0 .0 5 ) ;肿瘤细胞及纤维母细胞中Flt1、KDR的阳性率在淋巴结有、无转移两组间的差异均有显著性 (χ2 =4 .72～ 9.32 ,P <0 .0 5 ) ,在 3组不同术后生存时间病人间亦均有显著性差异 (χ2 =8.81～ 1 9.1 9,P <0 .0 5 )。肿瘤细胞中Flt1、KDR的表达呈极显著性正相关 (r =0 .4 4 ,P <0 .0 1 )。④结论　肺癌的生长主要依赖自分泌机制 ,联合检测Flt1、KDR可能对肺癌转移     

IL-1B-31及IL-1RN基因多态性与胃癌易感性关系

目的：研究白细胞介素1B基因(IL-1B)启动子区域-31位点和白细胞介素1受体拮抗剂基因(IL-1RN)多态性在中国南方人群胃癌患者与健康对照中的分布，初步探讨其各基因型与胃癌的关联性。方法：收集285例胃癌患者与265例健康人群的外周血标本和流行病学调查资料，提取基因组DNA，IL-1RN基因型采用PCR方法直接确定。IL-1B基因采用PCR—RFLP方法分型。结果：IL-1RN基因有5种基因型，分别是1／1、1／2、1／3、1／4、2／2型，其频率在病例组中分别为81．9％、14．6％、7．0％、1．8％和1．1％。而在对照组中分别为81．6％、16．5％、0、0．8％和1．2％。各基因型在病例与对照组中分布没有显著性差异。IL-1B基因-31位点3种基因型C／C、C／T、T／T在胃癌病例组中频率分别为21．8％、48．6％和29．6％。而在对照组中分别为27．9％、48．8％和23．3％。与C／C型比较，携带T／T基因型者胃癌发生的危险性增加63．3％(OR=1．633，95％CI=1．014～2．628)。这一危险性在高年龄组、男性、饮酒、HP感染阳性、有癌症家族史的人中更为显著。结论：IL-1B基因启动子区域-31位点多态性可能与该人群胃癌易感性相关；未发现IL-1。RN基因多态性与胃癌易感性关联。     

胰岛素样生长因子-1在妇科疾病中的作用

在许多组织增生过程中，通过内分泌、旁分泌和自分泌会产生胰岛素样生长因子-1(IGF-1)。最近的研究发现，IGF-1存在于各种增生组织，如子宫内膜和卵巢组织。患有严重子宫内膜异位症时，血清中IGF-1水平较高，而子宫内膜局部的：IGF-1水平减低，这可能是导致不孕的原因，多囊性卵巢综合征(PCOS)患者卵巢局部的IGF-1活性增强，与患者肥胖、高雄激素水平等一系列临床症状有关。IGF-1在良、恶性肿瘤中也起着重要的作用，IGF-1能刺激子宫肌瘤细胞的生长。围绝经期妇女若存在高IGF-1和低IGF-1结合蛋白-3(IGFBP-3)水平，则患乳腺癌的风险增大。绝经前后女性的高IGF-1水平与宫颈癌、卵巢癌和子宫内膜癌的发病率存在相关性。     

肝纤维化组织中MMP1、TIMP1的表达及其临床意义

目的 :检测肝纤维化组织中基质金属蛋白酶 1 (MMP1 )、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 (TIMP1 )的表达 ,为肝纤维化的诊治提供重要的分子生物学指标。 方法 :采用链霉菌抗生物蛋白 -过氧化酶联接法 (S- P法 )检测70例肝纤维化组织中 MMP1 、TIMP1 的表达。结果:(1) TIMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强 ,并且呈正相关关系 (r=0 .92 74 ,P <0 .0 1)。 (2 ) MMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重无明显变化 ,无相关关系(r =0 .2 181,P >0 .0 5 )。 结论:TIMP1 与肝纤维化的发生、发展密切相关 ,随纤维化发生、发展阳性表达增强。从分子水平对肝纤维化、肝硬化病变进行评估 ,为早期诊治肝纤维化和判断预后提供依据。     

日本血吸虫Mf2基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum，Sj）Mf2蛋白，并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法 将SjMf2基因亚克隆至pCEX—5X—3原核表达载体，以GST融合蛋白的形式在ER2688中表达，表达产物免疫小鼠，免疫用抗原剂量为50μg/次.鼠，对照组分别注射FCA或PBS，在0、2、6周共免疫3次。第3次免疫后2周进行攻击感染，42d后杀鼠，观察减虫和减卵效果。结果 在IPTG诱导下，表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf2基因在大肠杆菌中得以高效表达，形成了SjGST—Mf2融合蛋白，用这种融合蛋白免疫小鼠，诱导产生了27．75％的减虫率和45．7％的每雌肝组织虫卵减少率(LEPF)。结论 SjMf2基因亚克隆至pGEX—5X—3载体后可在大肠杆菌中高效表达，表达产物能诱导小鼠产生一定程度的抗日本血吸虫保护性免疫力。     

骨骼肌钝挫伤后愈合质量的肌电评价

目的 :观察大鼠骨骼肌钝挫伤后 ,不同干预方法对骨骼肌修复过程中肌电信号的影响 ,研究肌电图在骨骼肌损伤愈合过程中的评价作用。方法 :10 8只雄性SD大鼠 ,利用自制的重物坠落打击装置造成右侧腓肠肌钝挫伤。随机分成 3组 ,即胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)组、中药组和自然愈合组 ,分别于损伤局部注射IGF - 1、黄芪丹参注射液、不作处理。于伤后第 2、5、7、10、14、2 1、2 8、35、5 6天观察并比较双侧腓肠肌的肌电图变化 ,记录纤颤电位和正尖波等自发活动 ,分析复合肌肉动作电位 (CMAP)并测量其潜伏期和波幅 ,观察伤后CMAP的变化。结果 :(1)各组大鼠均于伤后第 2～ 5天出现纤颤电位和正尖波 ,约至第 7～ 10天达到高峰 ,然后逐渐减少。以IGF - 1组最早消失 ,中药组次之。 (2 )各组大鼠的伤侧肌电图CMAP中的潜伏期逐渐缩短 ,波幅逐渐增高。以IGF - 1组最快 ,中药组次之 ,自然愈合组最慢。 (3)伤后第 8周 ,IGF - 1组和中药组大鼠损伤侧CMAP波幅接近正常 ,自然愈合组则显著低于其它两组。结论 :(1)肌电图检测证实 ,IGF - 1和黄芪丹参注射液均具有促进骨骼肌损伤愈合的作用 ,但以IGF - 1的作用更明显。 (2 )损伤肌肉局部肌电信号的变化 ,可以用来评价损伤骨骼肌的修复进程和愈合质量     

The prognostic impact of fluctuating levels of C-reactive protein in Brazilian haemodialysis patients: a prospective study.

BACKGROUND: A single elevated C-reactive protein (CRP) value predicts mortality in haemodialysis (HD) patients, but the relative importance of repeated vs occasional positive systemic inflammatory response findings is not known. METHODS: To assess the influence on survival of occasional inflammation, CRP, serum albumin (S-Alb) and fibrinogen were analysed bimonthly in 180 HD patients (54% male, 49+/-14 years). Clinically significant inflammation was defined as CRP >5.1 mg/l, based on the receiver operating characteristics curve for CRP as predictor of death. Based on four consecutive measurements of CRP, patients were assigned into three groups: group 1 (n = 74; 41%), no inflammation (CRP < or = 5.1 mg/l in all measurements); group 2 (n = 65; 36%), occasional inflammation (1-3 measurements of CRP > 5.1 mg/l); and group 3 (n = 41; 23%), persistent inflammation (all measurements of CRP >5.1 mg/l). The nutritional status was evaluated by subjective global assessment (SGA) and body mass index (BMI), and the survival (21 months of follow-up) by Kaplan-Meier curve and Cox model. RESULTS: The median and range of CRP values (mg/l) for group 1, 2 and 3 were: 3.2 (3.2-5.1), 3.6 (3.2-54.9) and 13.8 (5.2-82), respectively (P<0.001), whereas the prevalence of malnutrition, assessed by SGA and BMI, did not differ significantly between the groups. The survival rate by Kaplan-Meier analysis was significantly different among the groups (chi2 = 12.34; P = 0.0004). Patients in group 3 showed the highest mortality (34%; P = 0.001), compared with group 1 (8%) and group 2 (14%; P = 0.01), respectively, whereas there was no significant difference in mortality between groups 1 and 2. Age, CRP, S-Alb level and SGA were independent predictors of mortality. CONCLUSION: The patients with a persistent elevation of CRP had a higher mortality rate than the patients with occasional CRP elevation. Thus, persistent, rather than occasional, inflammation is an important predictor of death in HD patients.