60Coγ射线对体外培养成骨细胞作用的实验研究

目的：研究放射性骨损伤的发病机制，探讨骨折合并射线损伤愈合能力下降的原因。方法：将体外培养的成骨细胞用^60Coγ射线一次性照射3、6、9、12Gy，以建立体外培养成骨细胞受射线作用的实验模型；同时，观察成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性改变，骨形态发生蛋白（BMP）和转化生长因子β1（TGF-β1）的胞质内表达量，以及细胞内钙离子的含量。结果：成骨细胞受射线照射后，其ALP活性明显降低，且与照射剂量呈明显量效关系，3Gy组抑制率为31.59%，而12Gy组则为84.95%；BMP、TGF-β1的表达量下降，但与照射剂量无明显量效关系；胞质内钙含量亦降低，但受照各组间的抑制率无明显统计学差异。结论：射线对成骨细胞具有直接损害作用，放射性骨损伤的重要方面就是射线对成骨细胞的主要功能酶ALP活性的损害，抑制BMP、TGF-β1等生长因子的合成，且干扰细胞内第二信使钙离子，从而致骨组织的再生重建机能下降。     

失重对成骨细胞基因表达和细胞功能影响的研究进展

骨骼可以适应包括重力在内的各种机械刺激，并对骨形成与骨吸收之间的平衡进行调整。失重状态下的骨质减少主要归因于骨形成的减少，这与成骨细胞功能下降有关，表现为细胞增殖粘附能力下降，与分化成熟相关的物质(碱性磷酸酶，骨钙素和I型胶原)的mRNA及蛋白合成均减少，多种生长因子的分泌量以及细胞对其反应性下降。成骨细胞功能下降的机制尚不明确，有假说认为失重时细胞形态的改变导致了基因表达与功能的变化。     

Hippo信号通路在骨质疏松症中作用机制的 研究进展

骨质疏松症（osteoporosis,OP）多发于中老年人群,属世界性公共健康问题。研究发现OP受多条信号通路调控,而Hippo信号通路对骨代谢具有重要调节作用,且可与多条信号通路发生相互作用,从而平衡成骨细胞和破骨细胞。本文对Hippo信号通路在OP中作用机制的研究进展进行综述,为该疾病的临床诊疗提供理论依据。     

PD98059对人骨髓间质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的:探讨胞外信号调节激酶(ERK)信号传导途径对骨髓间质干细胞(MSC)分化为成骨细胞的影响。方法:采用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液分离成人MSC,体外扩增,应用地塞米松、β-甘油磷酸钠、vitaminC定向诱导MSC分化为成骨细胞。在成骨诱导液中加入不同剂量的PD98059,观察其对成骨细胞形成的影响。结果:MSC体外扩增15代可获得(3-4)×10¹²个细胞。在成骨诱导液作用下,MSC可在体外定向分化为成骨细胞。不同剂量的PD98059均可抑制MSC分化为成骨细胞,并有剂量依赖关系;同时促使部分细胞转化为脂肪细胞。结论:ERK信号传导途径可能在MSC分化为成骨细胞和脂肪细胞过程中起关键作用。     

应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法：采用protein-A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基，对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘洗，夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：通过3轮生物淘洗，能被抗体捕获的噬菌体克隆为91．7％（11／12）；ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合；序列分析表明7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT，同源性分析显示该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性，结论：获得了具有良好结合活性的模拟表位肽，为基于表位水平的HFRSV（肾病综合征出血热病毒）特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据。     

白纹伊蚊和埃及伊蚊defensin A基因克隆及序列分析

应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的片段为defensinA的 1个新型 ,命名为DefA6。     

藏猪白细胞介素4基因Cdna的克隆及序列分析

目的：克隆藏猪白细胞介素4基因cDNA。方法：从体外ConA刺激70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增，pMD-T载体连接，常规转化后，进行酶切及序列测定进行鉴定。结果：研究表明克隆得到的IL-4基因cDNA与成华猪的IL-4同源性达到99％，与长白杂交猪的同源率为98％。结论：从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL-4基因。     

人FascDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达的研究

为获得高质量及充足的Ｆａｓ蛋白，采用ＰＣＲ技术调整Ｆａｓ基因的开放阅读框架，使之与生物素化蛋白基因阅读框架一致；缺失了ＦａｓｃＤＮＡ基因的起始密码子并增加一个大肠杆菌偏性终止密码子，构建ＦａｓｃＤＮＡ和生物素化融合原核表达质粒ＰｉｎＰｏｉｎｔ－Ｆａｓ。将重组质粒转入大肠杆菌ＨＢ１０１，经５００ｍｍｏｌＩＰＴＧ在３７℃条件下诱导４ｈ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测融合蛋白在大肠杆菌得以高效表达，表达量为细菌总蛋白的１３．８％。用亲和层析树脂对生物素化融合蛋白进行亲和层析纯化，得到Ｆａｓ重组的蛋白，且表达的Ｆａｓ融合蛋白具有抗体结合活性。此蛋白的表达成功将解决Ｆａｓ膜蛋白不易提取的难题，为深入研究Ｆａｓ提供了良好材料来源     

CLONING AND EXPRESSION OF cDNA FOR HUMAN LYMPHO-TOXIN

人淋巴毒素（ｈＬＴ）系由淋巴细胞经抗原或有丝分裂原活化后产生的一类细胞因子，它具有抗瘤、抗病毒活性和许多重要的免疫调节作用，是一种非常有前途的生物制剂。近年来发现的膜相关型淋巴毒素更提示ｈＬＴ可能具有尚未被揭示的免疫调节活性。因此，克隆人ＬＴｃＤＮＡ并在大肠杆菌表达重组ｈＬＴ，对于ｈＬＴ的开发利用和研究其功能都具有重要意义。本实验按照公布的ｈＬＴｃＤＮＡ序列，经计算机分析并结合实验要求设计并合成一对ＰＣＲ引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术从ＰＨＡ／ＰＭＡ活化２４ｈ的人Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ细胞总ＲＮＡ扩增出一５４１ｂｐＤＮＡ片段；经α－互补筛选，质粒小量快速抽提，限制性内切酶酶切鉴定，将该片段定向克隆于ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９质粒载体。限制性内切酶图谱分析和Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法序列测定表明：该ＤＮＡ片段与公布的人淋巴毒素ｃＤＮＡ序列完全一致。它包括编码人淋巴毒素成熟肽的全部ｃＤＮＡ序列。再进一步将该ｃＤＮＡ片段克隆于原核表达载体ｐＢＶ２２０，经地高辛标记探针菌落原位杂交筛选，限制性内切酶酶切鉴定方向，筛选出一阳性重组子ｐＢＶ－ｈＬＴ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析表明：经温控诱导，该重组菌成功