恙螨体内汉坦病毒核酸的基因芯片检测

目的 建立快速、灵敏、特异的汉坦病毒基因芯片诊断方法。方法 根据发表的汉坦病毒属(HV)76-118株和R22株S基因核苷酸序列，设计引物和探针，制备寡核苷酸芯片。用CV3标记核苷和引物，运用不对称PCR技术制备单链荧光标记核苷酸片段，并与芯片上的寡核苷酸探针杂交，荧光扫描仪检测并分析信号。结果 研究制备的基因芯片能够检测汉坦病毒HTN型和SEO型病毒核酸的特异性荧光信号。结论 HV的基因芯片检测具有特异、灵敏、快速的优点。基因芯片的制备和检测技术的建立，可为肾综合征出血热等传染病的诊断和预防提供理想的方法。     

单细胞凝胶电泳检测酞酸酯类对DNA的损伤

目的应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术对增塑剂(DEHP)邻苯二甲酸二乙基己酯致小鼠胚胎成纤维细胞(3T6细胞)DNA损伤、损伤程度以及有无剂量-效应关系进行检测.方法将溶剂二甲基亚砜处理的3T6细胞作为阴性对照组,用H2O2染毒的3T6细胞作为阳性对照组(80μmol/L H2O2染毒),将不同浓度DEHP处理的3T6细胞设为4个剂量组(62.5,125,250,500μg/ml)进行SCGE检验.结果各染毒组细胞DNA损伤与阴性对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05);且随DEHP染毒浓度增加,3T6细胞DNA损伤程度加重,有剂量-效应关系.结论 DEHP体外染毒对3T6细胞能造成损伤,且随剂量的增加有加重的趋势.     

外周微量血单细胞凝胶电泳技术的正交试验

目的研究外周微量血单细胞凝脉电泳技术的最佳实验条件.方法采用四因素三水平的正交表L9(34)对电泳电压、电泳时间、解旋时间、铺胶层数四因素作正交试验.结果解旋时间为最主要影响因素,其次分别为铺胶层数、电泳时间和电泳电压;并且各因素下的第一水平为最佳水平.结论外周微量血单细胞凝胶电泳技术的最佳实验条件为:解旋20min、铺胶3层、电泳20?min、电泳电压20V.     

胆红素及牛黄拮抗苯乙烯所致肝癌细胞株损伤

目的　观察苯乙烯诱导的人肝癌细胞株 (HepG2 )细胞DNA链断裂损伤以及天然牛黄和胆红素对其损伤的拮抗效应。方法　采用单细胞凝胶电泳法观察HepG2细胞体外暴露于苯乙烯出现的DNA链断裂损伤 ,同时观察天然牛黄和胆红素对于苯乙烯诱导DNA损伤的拮抗作用。结果　在细胞存活未受到苯乙烯影响的浓度下 ,0 2μmol/L的苯乙烯即可诱导HepG2细胞明显的DNA链断裂损伤 ,彗星细胞频率和DNA迁移距离分别为 (9 5±2 1) %和 (4 5± 0 7) μm。在明显诱导DNA损伤浓度的苯乙烯处理时同时加入天然牛黄或胆红素 ,发现二者对苯乙烯诱导的DNA链断裂损伤在一定浓度下均有良好的拮抗作用 ,10 μmol/L的胆红素或天然牛黄与 1μmol/L的苯乙烯共同处理时 ,HepG2细胞的DNA损伤水平基本回复到本底水平。 结论　苯乙烯能够诱导HepG2细胞出现DNA链断裂损伤 ,10 μmol/L的胆红素或天然牛黄基本能完全拮抗苯乙烯诱导的DNA链断裂损伤。     

自来水中有机污染物对细胞DNA的损伤作用

目的　了解以东湖为源水的自来水中非挥发性有机污染物对细胞DNA的损伤作用。方法　应用单细胞凝胶电泳技术 ,对东湖源水不同水文期 (平水期、枯水期、丰水期 )的自来水中有机提取物所引起的Hela细胞DNA损伤作用进行观察。结果　 (1)不同有机提取物剂量组 (5 0 ,10 0 ,2 0 0 ,4 0 0ml/2 5ml培养瓶 )引起Hela细胞DNA损伤与阴性对照组相比均有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,并呈剂量 -反应关系 (P <0 0 5 )。 (2 )不同水文期水中非挥发性有机提取物对DNA损伤作用不同 ,总趋势是平水期 >枯水期 >丰水期。结论　以东湖为源水的自来水中非挥发性有机污染物对细胞DNA有断裂损伤作用 ,单细胞凝胶电泳技术的应用有助于环境水质的监测以及水中非挥发性有机提取物致癌及致突变机制的研究。     

太湖微囊藻毒素对细胞染色体及DNA损伤效应

目的研究太湖蓝藻水华中提取的微囊藻毒素的遗传毒性，探讨其对人类健康的潜在危害。方法应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和单细胞凝胶电泳技术观察太湖蓝藻水华中微囊藻毒素引起的细胞染色体及DNA损伤效应。结果太湖蓝藻水华中提取的微囊藻毒素可明显增强小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率，并呈一定的剂量-反应关系；单细胞凝胶电泳技术显示可诱导中国仓鼠(V79)细胞DNA单链断裂，DNA断裂分级及细胞损伤率明显高于对照组。结论太湖蓝藻水华中提取的微囊藻毒素具有明显的遗传毒性，对人类健康存在潜在的远期危害。     

二甲基甲酰胺诱发的人类外周血细胞DNA断裂损伤

〔目的〕探讨二甲基甲酰胺 (N ,N -dimethylformamide ,DMF)诱发的人类外周血细胞DNA断裂损伤情况。〔方法〕单细胞凝胶电泳法 (SingleCellGelElectropheresis ,SCGE)。〔结果〕接触DMF的作业工人与对照组相比 (t检验 )各指标间均有显著差异 (P <0 .0 1)。接触DMF的作业工人的 2年 -3年组、4年 -5年组、6年 -7年组与对照相比 (方差分析 )各指标间均有显著性差异 (P <0 .0 1) ,其中彗星长、尾长、Olive尾矩、尾DNA 总DNA(%)四个指标的 6年 -7年组与 2年-3年组间有显著性差异 (P <0 .0 5 )。〔结论〕长期接触DMF可引起DNA断裂损伤 ,断裂损伤程度随着接触年限的延长有加重的趋势。     

DNA提取方法进展

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。近年来一些新的或改进的DNA提取纯化方法不断出现，本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生物提取DNA的方法进行综述。     

高血压大鼠局灶脑缺血再灌注后X线修复交叉互补组1蛋白表达及DNA片段化损伤

目的　观察肾性高血压大鼠局灶脑缺血再灌注后DNA修复蛋白X线修复交叉互补组 1(XRCC1)蛋白的表达及与DNA片段化损伤的关系。方法　采用双肾双夹法建立肾性高血压大鼠模型 ,在此基础上采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型 ,采用免疫组织化学方法观察假手术组和缺血再灌注后 3h、6h、12h、2 4hXRCC1蛋白表达 ,采用TUNEL方法检测DNA片段化损伤。结果　免疫组织化学染色显示 ,假手术组大脑皮质和海马区出现大量XRCC1表达的阳性细胞 ,再灌注 3h缺血区皮质和海马CA1区XRCC1表达阳性细胞减少 ,即缺血区皮质和海马CA1区XRCC1灰度值升高 ,并一直持续到缺血再灌注 2 4h。缺血再灌注后 3h、6h、12h和 2 4h与假手术组相比差异有显著意义 (P <0 0 5 )。TUNEL染色显示 ,假手术组大脑皮质和海马CA1区未见阳性细胞 ,再灌注 2 4h缺血区皮质和海马CA1区可见较多阳性细胞。结论　脑缺血再灌注后XRCC1蛋白免疫活性下降和DNA修复机制的失败与DNA的片段化损伤及凋亡的发生有关。     

新疆中麻黄DNA片段的克隆与序列分析

对新疆3种中药麻黄(Ephedra)进行了RAPD分析，回收随机引物s13的PCR产物(750bp左右)，克隆到pMD18-T载体中，经电泳鉴定后进行序列分析。结果表明，已成功克隆并获得了新疆中麻黄771bp的DNA片段，对中药材的鉴定和标准化提供依据。