差异筛选肝癌凋亡细胞cDNA文库的简便方法

目的差异筛选人肝癌凋亡细胞ｃＤＮＡ文库。方法消减杂交和点杂交相结合的噬菌斑原位杂交法筛选ｃＤＮＡ文库，首先采用（－）ｃＤＮＡ探针杂交，挑取（－）的噬菌斑克隆，再用（－）和（＋）两种ｃＤＮＡ探针与初筛出的噬菌斑克隆杂交的差异筛选方法。结果得到４个充分孤立的噬菌斑克隆，其插入片段长度为１．５ｋｂ左右。结论该方法简便、快速，是差异筛选ｃＤＮＡ文库的一种较为可行的简便方法。     

人硫氧还蛋白cDNA的克隆、表达及其多克隆抗体制备

目的制备硫氧还蛋白1(thioredoxin-1,Trx-1)多克隆抗体。方法从乳腺癌细胞系MCF-7中用RT-PCR的方法得到了Trx-1全长基因,将它克隆到原核表达载体上进行大量的表达和纯化,纯化的蛋白对新西兰大白兔进行背部多点注射,40d后取其血清用梯度饱和硫酸铵沉淀的方法进行多克隆抗体的纯化。用ELISA和Western印迹实验测定抗体效果。结果成功获得了Trx-1全长cDNA,通过原核表达得到了大量Trx-1蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体。结论此多克隆抗体对Trx-1蛋白具有良好的识别能力,可以应用于Trx-1的功能研究。     

肽文库及其在免疫学研究中的应用

<正>肽文库是一定长度肽段的混合物,里面包含所有可能的氨基酸排列信息。肽文库可被分为两种,一种是合成肽文库（synthetic peptide library）,另一种是噬菌体肽文库（Phage peptide library）。关于这两种肽文库及其在免疫学的研究中的应用,在1997年国外医学免疫学分册上已有较好的综述。在此文中,仅对合成肽文库及其在免疫学研究中的应用谈一点我的理解,并介绍一下我采用合成肽文库做的一点工作。     

血管内皮生长因子反义基因转染对高转移人巨细胞肺癌细胞系生 …

目的 探讨反义血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因转染在抑制恶性肿瘤生长和转移的抗肿瘤血管基因治疗中的意义。方法 利用基因重组技术构建正义和反义ＶＥＧＦ１２１ ｃＤＮＡ真核表达载体,用脂质体法转染高转移性人巨细胞肺癌细胞（ＰＧ）,经Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹免疫化学检测ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平,并对转染前后细胞进行体外生长和裸鼠体内生长转移等多项生物学行为实验,结果 转染反义转     

牛碘酸转运体的cDNA在大鼠脑内的分布

为了观察牛磺酸转运体的ｃＤＮＡ的大鼠脑内的分布，用＾３５Ｓ标记的ＴＡＵＴＤＮＡ探针，对大鼠全脑连续切片进行原位分子杂交，阳性反应广泛分布于脑灰质的不同区域，例如嗅球、梨状皮质，大脑皮质 、齿状回、海马和颗粒层细胞为阴性，而周围的胶质细胞为阳性，脑干的某些核，在灰质的神经元和社会胶质细胞观察到反应颗粒。     

采用IL－6cDNA控针检测人IL－6基因表达

采用缺口平移技术对ＩＬ—６ｃＤＮＡ进行了生物素和同位素标记，证明两种标记的ＩＬ－６ｃＤＮＡ（３０ｎｇ／ｍｌ）均可检出低至５ｐｇ的同源ＤＮＡ，而模拟探针（５００μｇ／ｍｌ）对高达１００ｎｇ的同源序列无此反应。应用ＩＬ－６ｃＤＮＡ对富含ＩＬ－６ｍＲＮＡ的标本进行斑点杂交或Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，证明人参三醇皂甙促进了淋巴细胞ＩＬ—６基因表达（４倍），人胎脾单个核细胞、人胎脑组织匀浆和人胎胰岛细胞内均含有高浓度ＩＬ—６ｍＲＮＡ。     

正常人T淋巴细胞cDNA文库一未知DNA片段的克隆与分析（摘要）

正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库一未知ＤＮＡ片段的克隆与分析（摘要）蔡铀庆，朱锡华（第三军医大学分子免疫学研究室重庆６３００３８）本研究设计并合成了一对引物。从正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中，采用聚合酶链式反应，经α－互补颜色筛选和ＰＣＲ方法筛选，获得一...     

鸡柔嫩艾美耳球虫cDNA文库构建与表达序列标签分析

为系统分析鸡球虫敏感虫株和抗药虫株不同发育阶段的基因表达情况,利用柔嫩艾美耳球虫敏感株和抗马杜霉素株(由敏感株诱导)的未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子为材料构建了一个混合cDNA文库,并用该文库获得了2806条3'端高质量的表达序列标签(ESTs)。通过生物信息学分析:EST序列拼接出1424个假定独立转录本(TUTs),冗余度为49.3%。从cDNA文库中筛选出大量的低丰度表达基因,约占TUT总数的91.5%,且功能未知基因约占TUT总数的83.6%。在功能注释基因中,编码MIC2蛋白、BT1家族蛋白和核糖体蛋白等入侵和发育相关的基因高丰度表达。     

斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的　克隆斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并对其进行测序和序列分析。方法　利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果　RT PCR扩增出了一约5 0 0bp的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 95bp。将推导的氨基酸序列作同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着较高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。结论　克隆获得了斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,该片段包含了与半胱氨酸蛋白酶活性和空间结构相关的重要基因位点。