干扰肿瘤相关巨噬细胞的P2X4受体表达可抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭

目的研究P2X4受体在小鼠胶质瘤中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）的表达对胶质瘤细胞侵袭迁移的影响及分子机制。方法将16只健康C57BL/6小鼠随机分为肿瘤组、对照组（8只/组），利用小鼠胶质瘤GL261细胞接种于小鼠大脑尾状核，建立小鼠脑胶质瘤模型。术后第21天处死小鼠，取荷瘤小鼠及正常小鼠脑组织，采用HE染色观察小鼠胶质瘤形态，利用免疫荧光检测Iba-1、P2X4受体的表达情况；应用GL261条件培养基将RAW264.7细胞诱导为TAMs，采用RT-qPCR检测巨噬细胞极化相关标志物及P2X4受体在TAMs的mRNA表达情况；采用Western blot检测P2X4受体在TAMs的蛋白表达情况；采用siRNA P2X4，下调TAMs中P2X4受体的蛋白表达，RT-qPCR、Western blot检测siRNA P2X4转染后TAMs中IL-1β、IL-18的mRNA及蛋白表达；利用transwell侵袭及迁移实验检测siRNA P2X4转染后TAMs对GL261细胞侵袭迁移能力的影响。结果与对照组相比，荷瘤小鼠脑胶质瘤组织中有较高数量的Iba-1阳性细胞（P < 0.0001），且P2X4受体在Iba-1阳性细胞中的表达增高（P=0.001）；使用GL261条件培养基刺激RAW264.7细胞转化为TAMs后，M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调（P=0.0001、0.001），M1型巨噬细胞标志基因iNOS、TNF-α表达也上调（P=0.006、0.001），但以M2型巨噬细胞标志基因Arg-1、IL-10表达上调更为显著，同时TAMs中P2X4受体蛋白表达水平及mRNA水平均增高（P=0.005、0.014）。干扰TAMs中P2X4受体表达引起其IL-1β、IL-18的mRNA（P < 0.01）及蛋白表达水平（P < 0.01，P < 0.05）降低，并抑制TAMs促进胶质瘤细胞侵袭和迁移的能力（P=0.004、0.017）。结论降低肿瘤相关巨噬细胞P2X4受体表达可能通过IL-1β、IL-18影响胶质瘤细胞的迁移和侵袭。     

IL-17A与自发性高血压大鼠肾上皮间质转化密切相关

目的探究IL-17A在原发性高血压大鼠肾上皮间质转化（EMT）中的作用。方法4周龄的SPF级自发性高血压大鼠（SHR）（实验组）、京都维斯塔尔大鼠（WKY）（对照组）各20只，分别随机分为4组，每组5只，在4、6、10、30周龄进行实验观察。采用无创尾动脉血压测量仪动态检测大鼠的血压情况；流式细胞技术分析大鼠脾淋巴细胞中Th17细胞的频数；RT-PCR法及免疫组化技术检测大鼠肾脏IL-17A、iNOS、Arg-1、E-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平；ELISA法检测大鼠血浆中IL-17A的水平。结果从6周龄始SHR大鼠血压显著高于同期的WKY组（P < 0.05或P < 0.01），SHR大鼠Th17细胞频数以及肾脏和血浆中IL-17A的表达亦显著高于同期WKY组（P < 0.05或P < 0.01）；在30周龄时SHR大鼠肾脏中E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于WKY组（P < 0.01），而Arg-1 mRNA及蛋白的表达显著高于WKY组（P < 0.01）；iNOS mRNA及蛋白的表达在6、10周龄时显著高于WKY组（P < 0.05或P < 0.01），α-SMA mRNA及蛋白从10周龄始显著高于WKY组（P < 0.05或P < 0.01）。SHR大鼠肾脏中IL-17A mRNA及蛋白表达水平从10周龄始与E-cadherin mRNA及蛋白表达水平呈显著负相关（r=-0.731，P < 0.05；r=-0.827，P < 0.01），而与α-SMA mRNA及蛋白表达水平呈显著正相关（r=0.658，P < 0.05；r=0.968，P < 0.01）。结论IL-17A与SHR大鼠肾EMT的过程密切相关，可能是通过介导肾脏浸润的巨噬细胞M1/M2极化发挥作用。     

支气管哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的分析

目的 观察支气管哮喘(哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)水平及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达的变化,探讨CD4+ CD25+ Treg在哮喘发病中的作用.方法采用流式细胞仪检测78例哮喘患者(急性发作期组30例,慢性持续期组25例,缓解期组23例)和29例健康志愿者(正常对照组)PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中Foxp3 mRNA的表达.结果 急性发作期组和慢性持续期组PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达明显低于缓解期组和正常对照组(P＜0.05);缓解期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达虽亦低于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);急性发作期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达低于慢性持续期组(P＜0.05).结论 哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+ CD25+ Treg数量减少,功能下降,可能参与哮喘的发生和发展.     

导板与显微镜辅助拆除纤维桩的精确度比较

目的通过离体牙模型对导板支持与显微镜辅助2种纤维桩拆除系统的精确度进行比较，为临床医师拆除纤维桩提供新思路和理论依据。方法将28颗人类离体前磨牙随机分为导板组与显微镜组，进行根管治疗及纤维桩修复治疗后，分别采用数字化导板与显微镜辅助超声器械进行纤维桩拆除。利用Mimics 10.0软件测量拆除后的偏差值，比较2种纤维桩拆除系统的精确度。结果导板组的尖端垂直偏差为0.99 mm±0.52 mm，尖端水平偏差为0.75 mm±0.19 mm，角度偏差为2.32°±0.64°，体积损失为8.09 mm³±1.42 mm³；显微镜组的尖端垂直偏差为0.44 mm±0.23 mm，尖端水平偏差为0.23 mm±0.07 mm，角度偏差为0.64°±0.31°，体积损失为15.25 mm³±3.94 mm³。2组的尖端水平偏差、角度偏差和体积损失的差异有统计学意义（P<0.05），尖端垂直偏差的差异无统计学意义（P>0.05）。结论在数字化导板的支持下拆除纤维桩有助于减少桩核修复后牙的体积损失，但精确度较显微镜辅助超声器械拆除低。     

系统性红斑狼疮患者Th1、Th2细胞因子表达异常与T细胞亚群功能失调相关性研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者Th1、Th2细胞因子表达异常与T细胞亚群功能失调的相关性。方法用流式细胞仪测定病例组与对照组T细胞表面标志CD3、CD4、CD8的表达情况。用酶联免疫吸附测定法测定病例组与对照组血清IFN-γ及IL-4水平。结果SLE患者CD3 CD4 细胞较正常对照组明显降低(P<0.01),CD4 CD8 细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),CD4 /CD8 T细胞比例倒置;血清IFN-γ水平较正常对照组明显增高(P<0.01),而血清IL-4水平较正常对照组明显降低(P<0.05)。结论SLE患者体内细胞免疫功能紊乱,以Th1细胞亢进为主,产生大量Th1细胞因子,介导免疫调节反应。同时,CD8 T细胞功能亢进,CTL细胞参与机体组织损伤,进一步导致免疫紊乱及免疫病理损伤加重。     

低温等离子体促进人牙龈上皮细胞在钛表面的黏附

目的研究低温等离子体（NTAP）处理人牙龈上皮细胞（HGECs）后的生物学行为。方法将HGECs传代培养，待生长活性最佳的第3~5代细胞，消化重悬后经NTAP处理适当时间（0，10，20， 30，60 s）后，接种在钛盘表面，加入口腔角质细胞培养基（OKM），1%双抗、5%CO₂和37 °C孵箱条件下培养不同时间（4，12，24，48 h）贴壁生长，每组中各培养时间设置5个复孔。使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）评估各组黏附细胞的数量；扫描电子显微镜（SEM）观察各组细胞在钛片表面的形态；实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测各组细胞层粘连蛋白α3（Laminin α3）、整合素蛋白β4（Integrin β4）和网蛋白（Plectin）黏附相关基因的表达情况以及Western blot观察各组细胞黏附相关蛋白表达的变化情况。结果在0~20 s内，随着NTAP作用时间的增加，细胞的黏附数量增加；但在20~60 s内，随着作用时间的增加，细胞的黏附数量逐渐减少：证明NTAP处理时间为20 s时最有利于HGECs在钛表面的黏附。CCK-8显示：在设定的培养时间下（20 s），随着培养时间延长，对照组和NTAP组细胞在钛表面的黏附数量增加。与对照组相比，在各培养时间点NTAP组细胞在钛表面的黏附数量更多（P<0.05）。SEM显示：NTAP组细胞在钛表面更明显地表现出不规则的多边形、突起与伪足较多及更大的细胞扩散面积。qRT-PCR显示：NTAP组细胞在钛表面的Lamininα3、Integrin β4和 Plectin黏附相关基因表达都高于对照组（P<0.05）。Western blot也证实：NTAP组细胞在钛表面上Laminin α3、Integrin β4和Plectin黏附相关蛋白的表达均高于对照组。结论HGECs受NTAP处理后，结果表明20 s的作用时间能最大程度增加细胞在钛表面的黏附数量和改变黏附形态，同时能够显著上调Laminin α3、Integrin β4和Plectin黏附相关基因和蛋白的表达，进而能促进HGECs对钛表面的生物封闭作用。     

术前外周血炎症指标对舌鳞状细胞癌预后预测价值的分析

目的探讨术前外周血炎症指标对舌鳞状细胞癌（TSCC）患者预后的预测价值。方法回顾性分析2010年1月至2017年12月于郑州大学第一附属医院因TSCC行根治性切除术的210例患者的临床病理资料，应用临床诊断性能曲线确定血小板/淋巴细胞比值（PLR）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）的最佳截断值。生存单因素分析应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验，多因素分析应用Cox比例风险回归模型，基于Cox回归模型筛选的独立危险因素构建Nomogram模型。结果单因素分析显示，PLR、NLR、肿瘤分化程度、T分期、N分期和TNM分期为影响TSCC预后的危险因素（P<0.05）；多因素分析显示，PLR、N分期和TNM分期为独立危险因素（P<0.05）。Nomogram模型的C指数为0.701（95%CI：0.651~0.752），校准曲线表明Nomogram模型预测无进展生存率与实际无进展生存率具有较好的一致性。结论术前外周血炎症指标对TSCC术后患者的预后可能有一定的预测作用。     

一种序列3D打印导板引导的瓷贴面分区粘接技术

获得足够的釉质粘接是保证瓷贴面固位、边缘封闭及临床使用效果的共识性建议，牙体预备后，基牙的粘接面就确定下来。由于唇面釉质厚薄不均，常常存在或多或少的牙本质暴露，而分区识别粘接面上的釉质或牙本质（简称釉本）并采用“选择性酸蚀”使其获得最大粘接力的处理方式，将有助于提高瓷贴面的整体粘接强度。不同于以往“选择性酸蚀”裸眼识别釉本分区的不确定性和经验依赖，本技术方案通过第一个目标修复体空间定深导板控制预备深度，获得准确的釉本分区；并将其映射到第二个分区粘接导板里，依靠第二个导板分别对粘接面上的釉本进行不同处理，实现了精准的、可预期的瓷贴面的分区粘接，获得了更好的粘接效果。     

IgG4-Related Lung Disease Exhibiting the Invasion into the Diaphragm: A Case Report

Immunoglobulin G4-related disease (IgG4-RD) is a fibroinflammatory condition which involves various organs. This is a very rare case of IgG4-related lung disease (IgG4-RLD) with the invasion into diaphragm. The patient was a 71-year-old man with a long-term exposure to asbestos who had a mass shadow in the left lower lung lobe, which was suspected to invade the left diaphragm on computed tomography (CT). Positron emission tomography (PET)/CT also presented an avid intake of fluorodeoxyglucose in the mass, which suspected lung cancer. Although bronchoscopic biopsy could not lead to the definite diagnosis, we performed left lower lobectomy combined with the resection of left diaphragm. The specimen showed the features of IgG4-RLD on pathology: the vein stenosis and fibrosis around the vein, the infiltration of IgG4-positive cells, and IgG cells to IgG4 cells ratio of 40%. Furthermore, there were inflammatory cells infiltrating to the diaphragm.     

实时RT-PCR与半定量RT-PCR检测胃腺癌中ING4表达的比较研究

目的探讨Real-time RT-PCR和半定量RT-PCR在检测胃腺癌中ING4 mRNA表达的特异性、敏感性和灵敏度的差别。方法本实验采用半定量RT-PCR法和Real-time RT-PCR法分别检测13例胃腺癌及癌旁组织ING4 mRNA的表达。结果两种PCR法均可验证胃腺癌组织ING4 mRNA表达量低于癌旁组织,有统计学意义。结论Real-time RT-PCR检测ING4 mRNA在胃腺癌中表达的结果更为可靠、更为灵敏。