热疗诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制的研究

目的探讨不同温度热疗对人肝癌细胞Hep G2的凋亡作用。方法人肝癌Hep G2细胞常规方法培养,采用水浴加热法对实验组(41℃,42℃,43℃)和对照组(37℃)细胞进行加温(0.5 h)处理,处理后继续培养24 h。采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫组织化学技术检测细胞凋亡相关蛋白P53的水平,实时荧光定量PCR法检测热疗作用后生存素(Survivin),caspase-9基因mRNA的表达变化。应用SPSS16.0软件进行统计学分析。凋亡率、P53蛋白值、caspase-9 mRNA表达水平等计量资料采用均数±标准差表示,组间比较采用t检验或方差分析。P0.05差异有统计学意义。结果在37℃,41℃,42℃,43℃,细胞凋亡率分别为(9.58±1.22)%、(16.47±3.41)%、(20.07±1.85)%和(23.42±1.93)%;P53蛋白表达OD值分别为(0.083±0.015)、(0.145±0.024)、(0.267±0.031)、(0.389±0.019)。与对照组比较,survivin基因mRNA的表达量下降(P0.05),caspase-9基因mRNA的表达显著增加(P0.05)。不同温度热疗后,随着加热温度的增高,细胞凋亡率增加,促进了基因p53及caspase-9的表达,凋亡抑制基因survivin的表达量下降。结论通过热疗可以增加p53及caspase-9基因的表达,抑制survivin基因的表达,从而诱导肝癌Hep G2细胞凋亡。     

survivin和p53表达水平对直肠癌分级和预后影响分析

目的探讨survivin和p53表达水平对直肠癌分级和预后影响分析。方法选取2010年1月到2015年10月住院治疗的经组织病理确诊的直肠癌患者83例,比较患者不同病理分化程度、TNM分期、DUKEs临床分期的survivin和p53阳性表达率的差异;以及不同survivin和p53表达结果的生存时间分析。用SPSS16.0软件进行统计分析数据,survivin和p53阳性表达率用(%)表示,采用卡方检验;二者阳性表达率与直肠癌不同分期的相关性分析用Spearman法;不同survivin和p53表达结果的生存时间分析用kaplan-Meier法,P0.05表示差异具有统计学意义。结果 83例患者中survivin表达阳性49例,阴性34例,阳性率为59.04%;p53表达阳性57例,阴性26例,阳性率为68.67%。survivin和p53在病理分化程度高、TNM分期高的患者中阳性表达率较高,病理分化程度、TNM分期与survivin和p53表达阳性率呈正相关。survivin阳性表达的患者5年随访期中位生存时间44个月显著的低于survivin阴性表达的患者的48个月(log-rankχ~2=10.955,P=0.001);p53阳性表达的患者5年随访期中位生存时间42个月显著低于p53阴性表达的患者的46个月(log-rankχ~2=6.128,P=0.013)。结论 survivin和p53的阳性表达与直肠癌分级和生存时间密切相关。     

微小RNA let-7基因表达在膀胱癌生物学行为中的作用

目的 探讨膀胱癌组织中微小RNA(miRNA)表达在膀胱癌发生发展中的作用. 方法 Trizol法抽提9例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常膀胱组织标本总RNA,分离与富集miRNA,随机选取2组miRNA标本与miRNA表达谱芯片杂交,采用LuxScan 3.0和SAM 2.1软件对芯片结果 进行图像数据分析.在差异性表达的miRNA中筛选出感兴趣的let-7基因,采用印迹杂交技术对9组miRNA标本中let-7基因进行验证. 结果 膀胱癌组织和正常膀胱组织标本中差异性表达有显著性意义的miRNA 71个,其中表达上调33个,表达下调38个;差异性表达有极显著性意义的miRNA(上调或下调≥4倍)26个,其中显著上调12个,显著下调14个.let-7基因验证结果 与芯片表达结果 一致,癌组织let-7基因表达吸光度值为479.6±228.2,正常膀胱组织为694.6±152.9,组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 膀胱癌组织和正常膀胱组织中存在差异表达的miRNA,let-7基因在膀胱癌的发生中可能起着抑癌基因的作用.     

瑞芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡相关基因和炎性相关基因表达的影响

目的 探讨瑞芬太尼预先给药对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡相关基因及炎性相关基因表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重280～320 g,采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注45 min的方法 建立心肌缺血再灌注模型,随机分为3组(n=8):假手术组(S组)动脉下仅穿线,不结扎;缺血再灌注组(IR组)行心肌缺血再灌注;瑞芬太尼预先给药组(R组)以6 μg·kg-1·min-1的速率经股静脉输注瑞芬太尼,15 min后行心肌缺血再灌注.于再灌注45 min时处死大鼠,取左心室心尖部缺血区心肌组织,应用信号转导基因芯片技术检测心肌细胞凋亡相关基因及炎性相关基因的表达.结果 与S组比较,IR组Bax基因,Bcl-2基因、Bcl-2L1基因和Birclb基因表达下调;肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因、细胞间粘附分子1(ICAM-1)基因表达上调,Birc3基因、白细胞介素2(IL-2)基因、IL-2rα基因、IL-4基因表达正常.与IR组比较,R组Bar基因、Bcl-2基因、Bcl-2L1基因Birclb和Bitc3基因表达上调,ICAM-1基因表达下调,IL-2基因、IL-2rα基因、IL-4基因、TNF-α基因表达正常.与S组和R组比较,IR组Bcl-2/Bax基因比降低(P<0.05).结论 瑞芬太尼预先给药可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与上调抗心肌细胞凋亡相关基因表达和下调促炎性相关基因表达有关.     

雌、孕激素受体和Her-2阴性乳腺癌的临床病理特征

目的 评价雌、孕激素受体和Her-2表达均阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)的临床病理特征及其对预后的影响.方法 500例乳腺癌采用免疫组化筛选TNBC,观察TNBC的临床病理特征,并对其中243例乳腺癌进行临床随访. 结果 500例乳腺癌中TNBC占17.6%(88/500).组织学类型主要为浸润性导管癌(NOS)、化生性癌和髓样癌.组织分级Ⅲ级占72.7%(64/88),高于激素受体阳性组和Her-2高表达组(P=0.000).TNBC中CK5/6阳性率30.7%(27/88),EGFR阳性率34.1%(30/88).TNBC中ERCC1和KIT阳性率分别为28.4%(25/88)和34.1%(30/88),均分别高于激素受体阳性组和Her-2高表达组(P=0.032和P=0.026).TNBC 3年累积生存率为71.5%,低于激素受体阳性组(P=0.021),与Her-2高表达组差异无统计学意义(P=0.474). 结论 TNBC是一类具有高侵袭性病理特征和预后不良的乳腺癌;部分病例表达EGFR和ERCC1.     

强直性脊柱炎异位骨化机制研究进展

强直性脊柱炎是一种发病机制不明的慢性炎性脊柱关节病,主要侵犯骶髂关节、脊柱关节等,严重者可发生脊柱、关节的畸形和强直。临床表现为炎性腰背痛,夜间及休息后加重,活动后减轻。该病发病率男性高于女性,且男性主要表现为中轴关节改变,而女性大多首发于外周关节。目前生物制剂肿瘤坏死因子抑制剂通过控制炎症,从而改善病情发展,被认为是最前沿的药物,但其在阻断新骨形成方面尚未经循证医学证实有效。本文着眼于新骨形成角度,从基因及细胞因子层面探讨强直性脊柱炎的病因。目前相关研究发现LRP5、ANTXR2、PTGER4、ANKH等基因的异常表达激活骨形成信号通路,在多种细胞因子及相关蛋白(如Noggin蛋白、DKK、转化生长因子-β、骨形态发生蛋白、碳酸酐酶1等)直接或间接作用下将骨形成信号传至靶细胞表面,进而传入细胞核,改变靶细胞正常生理代谢过程,导致过度骨形成,造成异位骨化。近年的临床影像学病例分析也提示了骨赘形成的分布特点,进而推断机械应力是促进其形成的外部因素。本文对强直性脊柱炎异位骨化方面进行了文献综述,以期待能进一步加深对本病的认识,为临床治疗研究提供新的思路。     

转染病毒白细胞介素10基因对同种小鼠心脏移植生存的影响

目的了解病毒白细胞介素10(vIL10)基因对同种小鼠移植心脏的影响。方法用小鼠干细胞病毒(MSCVneo)逆转录病毒表达系统和vIL10cDNA构建MSCVneovIL10重组体,在体外转导CBA(H2K)小鼠的造血干细胞,输入经致死量照射(900rad)的同基因CBA(H2K)小鼠体内,8周后以vIL10表达阳性的CBA(H2K)小鼠(12只,实验组)作为受体,C57BL/6(H2b)小鼠为供体,进行同种腹部异位心脏移植,以未处理、移植无病毒转染的造血干细胞(HSCs)、移植空MSCVneo转染的HSCs鼠(均为10只)为对照组。在移植后第8天,每组受体动物各杀死5只,取出移植心脏行组织病理学、CD+4与CD+8T淋巴细胞浸润(免疫荧光抗体法)检查,IL2、IL4、IL6、小鼠IL10(mIL10)、γ干扰素(IFNγ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、B71、B72mRNA表达的测定[逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法],余下的动物观察移植心脏存活时间。结果(1)实验组移植心脏存活时间(800±333)d,其他对照组分别为(104±10),(116±11)与(112±17)d(P<001);(2)实验组心肌炎性细胞浸润稀少、心肌结构完整、无明显血管炎,急性排斥反应Ⅰ级,而其他对照组则出现严重的炎性细胞浸润、心肌灶性坏死、心内膜炎、血管炎和心肌出血,急性排斥反应均为Ⅲ级;(3)实验组移植物内IL2、IFNγ、B71、和B72和iNOS的mRNA表达明显下调,而其     

SSX2基因mRNA在泌尿系统肿瘤组织中的表达

目的探讨肿瘤特异性SSX2基因mRNA在肾细胞癌及尿路移行细胞癌组织中的表达.方法采用逆转录聚合酶链反应方法,检测26例肾细胞癌患者、27例尿路移行细胞癌患者的癌组织,及15例患者相应的癌旁组织中SSX2基因mRNA的表达.结果 26例肾癌患者癌组织中,18例(69%)SSX2 基因mRNA表达阳性;27例尿路移行细胞癌组织中,22例(81%)SSX2 基因mRNA表达阳性.癌旁组织均不表达.在肿瘤不同分期之间及不同分级之间SSX2 基因mRNA的表达差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 SSX2基因mRNA在肾癌及尿路移行细胞癌组织中高表达.     

趋化因子受体CXCR4在结肠直肠癌中的表达及意义

目的：研究趋化因子受体CXCR4在结肠直肠癌中的表达及其临床意义。方法：采用RT-PCR法检测8种结肠直肠癌细胞株中CXCR4mRNA表达,应用蛋白印迹法检测细胞株中CXCR4蛋白表达。应用免疫组化染色法、结合组织芯片检测正常结肠直肠黏膜组织54例、结肠直肠癌组织49例中之CXCR4蛋白表达情况,并探讨其与结肠直肠癌临床病理特征的关系。结果：在8种结肠直肠癌细胞株中,CXCR4基因在HT29中表达水平最高。COL0205及SW480次之,HCTll6最低。CXCR4蛋白在结肠直肠癌组织中的表达高于结肠直肠正常黏膜组织,差异具有统计学意义（P=0．000）;在伴发转移的结肠直肠癌组织中,其表达比未发生转移者增强,差异具有统计学意义（P=0．024）。结论：CXCR4表达与结肠直肠癌转移存在密切关系,可能成为结肠直肠癌转移潜在治疗靶点。     

青少年特发性脊柱侧凸患者血浆matrilin-1蛋白水平及其临床意义

目的 探讨青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者外周血中matrilin-1蛋白水平的变化及其在AIS发病机制中的作用.方法 将2006年6月至2007年3月诊治的25例AIS患者作为AIS组,25名性别、年龄相匹配的健康体检青少年作为对照组.所有入选对象符合以下标准:无骨骼疾病、代谢疾病、生长发育异常;无影响骨代谢的系统疾病及其他情况;近期未服用激素;无先天性心脏病手术史.AIS组记录末次随访或术前最大Cobb角、侧凸弯型,并分为进展型及非进展型两组.进展型侧凸(侧凸进展成为严重脊柱侧凸)定义为骨骼发育未成熟时,Cobb角＞40°或骨骼发育成熟时,Cobb角＞50°.采用PCR-RFLP基因分型方法 对所有对象进行基因分型,运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测AIS组与对照组外周血浆中matrilin-1蛋白浓度并比较其差异,并对不同基因型之间matrilin-1蛋白的表达进行比较.分析血浆matrilin-1蛋白浓度与脊柱侧凸进展的关系.结果 AIS组血浆matrilin-1蛋白浓度显著低于对照组(P=0.002).AIS组及对照组的基因型GG个体血浆matrilin-1蛋白浓度均低于基因型AA或AG个体,而对于相同基因型的个体AIS组血浆matrilin-1蛋白水平更低.进展型AIS患者血浆matrilin-1蛋白水平明显较非进展型AIS患者低.结论 AIS患者外周血matrilin-1蛋白水平与脊柱侧凸的进展相关.对外周血matrilin-1蛋白浓度的检测,有助于AIS的早期筛查及诊断,可作为预测脊柱侧凸进展的一个独立指标.