静脉注射丙种球蛋白无反应型川崎病56例临床分析

目的:分析静脉注射丙种球蛋白(IVIG)无反应型川崎病患儿的临床特点.方法:对2007-01至2008-06期间在我院住院治疗的332例川崎病患儿进行病例回顾性分析.结果:IVIG无反应型川崎病共56例(占16.9%).IVIG无反应型川崎病中男女性别比为4.09:1,明显高于IVIG敏感川崎病1.38:1(P<0.05).IVIG无反应型川崎病中有较严重冠状动脉扩张或冠状动脉瘤者11例(19.6%),明显高于IVIG敏感川崎病(2.5%)(P<0.05).川崎病患儿发生IVIG耐药的可能危险因素有外周血白细胞、中性粒细胞比例、血红蛋白、红细胞压积、血小板、C反应蛋白、血沉、血浆白蛋白、乳酸脱氢酶等.IVIG无反应型川崎病患儿中33例通过复用IVIG后临床症状得以缓解,仅11例在复用IVIG后症状仍不能控制而加用激素治疗.结论:IVIG无反应型川崎病较IVIG敏感川崎病更易发生冠状动脉病变.复用IVIG及必要时加用激素对IVIG无反应型川崎病治疗有较好疗效.     

川崎病患儿血管内皮细胞抗体检测临床意义分析

探讨血管内皮细胞抗体（AECA）检测对川崎病（KD）患儿诊断及预后评价。方法　2007年8月至2008年5月在广州市儿童医院住院的5岁以下KD患儿55例,采用以人脐静脉内皮细胞和猴骨骼肌为基质的间接免疫荧光技术检测55例急性期KD患儿和43例对照组（发热对照23例,健康对照20名）血清中AECA,并通过比较AECA阴性和阳性组相应的实验室、临床指标,初步评估AECA对KD早期诊断、预后转归的临床应用价值。 结果　KD患儿中AECA阳性率为40.0%,明显高于健康对照组（5.0%, P = 0.004）,但与发热对照组差异无统计学意义（17.4%,P = 0.053）;AECA对KD诊断的灵敏度为40.0%,特异性为88.4%,阳性预测值与阴性预测值则分别为80.0%、53.5%,准确率为60.4%。抗中性粒细胞浆抗体（ANCA）、蛋白酶3抗体（抗-PR3）阳性KD患儿中AECA阳性率显著高于阴性者（P值分别为0.013、0.034）。AECA阳性组与阴性患儿组临床指标、实验室指标差异无统计学意义。AECA阳性组冠状动脉瘤发生率高于阴性组（P < 0.05）,发生动脉瘤的相对危险度为6.67（95% CI 1.2～36.1）。结论　AECA检测对KD的早期诊断价值有限,但对冠状动脉瘤的发生具有预警意义。AECA可能与抗-PR3相互协同在KD冠状动脉损伤、进展至动脉瘤过程中起一定的作用。     

川崎病冠脉瘤远期血管改变与冠脉粥样硬化关系研究

摘要：目的　探讨川崎病（KD）冠脉瘤远期血管改变及其与冠脉粥样硬化的关系。方法　选择首都医科大学附属北京儿童医院2008年6月至2009年6月病程大于1年且合并中型以上冠脉瘤的KD患儿31例为研究对象（KD冠脉瘤组）,以CD34/CD133/KDR+为血管内皮祖细胞（EPC）表面分子标记,用流式细胞仪测定血周血EPC数量;采用酶联免疫法测定血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）;全自动生化分析仪测定血脂及载脂蛋白。选取年龄、性别匹配的21名健康体检儿童作对照（对照组）。结果　KD冠脉瘤组患儿病程1.0～12.5年,中位病程2.5年;中型冠脉瘤9例,巨大瘤22例,12例存在心肌缺血证据。KD冠脉瘤组血清hs-CRP为（2.77±1.06） mg/L,对照组为（1.60±1.53） mg/L,KD冠脉瘤组显著升高（P < 0.01）。外周血EPC及血脂两组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论　KD冠脉瘤组恢复期血清hs-CRP显著升高,提示仍有慢性炎症反应,可能与KD成年后早发动脉粥样硬化有关。     

血小板参数对川崎病诊断的临床意义

目的探讨小儿川崎病发病第1周、第2~3周血小板参数的变化和临床意义。方法对78例川崎病患儿(病例组)及78例同期体检健康儿童(对照组)取静脉全血用ADVIA2120全自动血液细胞分析仪测定血小板数(PLT)、血小板压积(PCT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)。对疾病组和对照组血小板参数分别进行比较,并对血小板各参数进行相关性分析。结果川崎病患儿发病第1周PLT、PCT明显高于对照组(P0.05),PDW低于对照组(P0.05),MPV与对照组比较差异无统计学意义;川崎病患儿发病第2~3周PLT、PCT明显高于对照组(P0.05),MPV、PDW均低于对照组(P0.05);川崎病发病第2~3周PLT、PCT高于川崎病发病第1周,川崎病发病第2~3周MPV、PDW低于川崎病发病第1周。川崎病患儿PLT与MPV、PDW呈负相关(r=-0.391;r=-0.362);PLT与PCT呈正相关(r=0.969);PCT与PDW呈负相关(r=-0.356);MPV与PCT、PDW无相关性(r=-0.207;r=0.226)。结论血小板参数变化对川崎病诊断有非常重要意义,并可作为判断患儿病情及指导临床治疗用药的指标。     

Inhibition of matrix metalloproteinase-9 activity improves coronary outcome in an animal model of Kawasaki disease

Kawasaki disease (KD) is the leading cause of acquired heart disease of children in North America. It is characterized by a massive immune activation and multi-system vasculitis, which evolves into a site-specific inflammatory response focused at the coronary arteries. Coronary artery (CA) inflammation leads to elastin breakdown, destruction of the vessel wall and aneurysm formation. We have demonstrated recently the pivotal role of tumour necrosis factor (TNF)-α-mediated matrix metalloproteinase (MMP)-9 activity in the pathogenesis of elastin breakdown in a murine model of KD, Lactobacillus casei cell wall extract-induced coronary arteritis. Using this model, we evaluated the in vitro effects of doxycycline, an antibiotic with MMP inhibitory function, in modulating key pathogenic stages of disease leading to CA damage. Doxycycline inhibits T cell activation and TNF-α production in peripheral immune cells, as assessed by thymidine incorporation and a TNF bioassay respectively. Additionally, doxycycline inhibits directly MMP-9 enzymatic activity derived from TNF-α-stimulated vascular smooth muscle cells as assayed by zymography. More importantly, in vivo treatment of Lactobacillus casei cell wall extract (LCWE)-injected mice with doxycycline reduces significantly the incidence of CA elastin breakdown and reduces loss of elastin. Therefore, doxycycline can mitigate TNF-α-induced MMP-9-mediated coronary elastin breakdown and improve coronary outcome. Agents with the ability to inhibit both inflammation and the downstream effects of inflammation, such as MMP-9 activity, offer a promising therapeutic strategy for the management of children with KD.     

Heat shock proteins and superantigenic properties of bacteria from the gastrointestinal tract of patients with Kawasaki disease

We previously suggested that gut bacteria may be involved in the onset of Kawasaki disease (KD). In this study, we evaluated the production of heat shock proteins (hsps) and superantigens (sAgs) by microorganisms isolated from the jejunal mucosa of 19 children with KD in the acute phase and from 15 age-matched control children. We identified 13 strains of Gram-negative microbes from patients with KD; these microbes produced large amounts of hsp60 and induced pro-inflammatory cytokine production by peripheral blood mononuclear cells. The Gram-negative microbes also elicited endogenous hsp60 production, leading to the secretion of anti-inflammatory intereukin-10 (IL-10). We also identified 18 strains of Gram-positive cocci that had superantigenic properties and which induced the expansion of Vβ2 T cells in vitro. All bacteria identified in this study were antibiotic resistant. These data suggest that sAg and hsps produced by gut bacteria might be involved in KD.     

超声心动图和64层螺旋CT冠状动脉成像在川崎病冠状动脉瘤随访中的应用价值

目的探讨超声心动图和64层螺旋CT冠状动脉成像（64SCTCA）在川崎病（KD）冠状动脉瘤临床诊断和随访中的应用价值。方法选择2006年12月至2007年5月在首都医科大学附属北京儿童医院门诊随访的KD并发冠状动脉瘤患儿作为研究对象。患儿观察终点随访时依据病变程度除行超声心动图检查外,同时行64SCTCA检查,对各项检查结果进行详细描述,并分析其应用价值。结果研究期间纳入15例患儿,急性期KD超声心动图检查显示急性期累及冠状动脉48／60支（80％）。患儿观察终点随访9个月至8．6年,平均（2．8±2．0）年,超声心动图示14／48支（29．2％）冠状动脉瘤或扩张消退,其余进一步扩张或无明显变化,累及冠状动脉34／60支（56．7％）,同时检测出2处血栓,未发现狭窄及钙化。64SCTCA示累及冠状动脉30／60支（50％）,主要累及右冠状动脉和左前降支,分布部位与超声心动图检查基本一致,64SCTCA与超声心动图检查对冠状动脉瘤最大内径的测量值具有较好的相关性（r=0．837,P〈0．001）,64SCTCA发现4处血栓、5处钙化及3处狭窄。结论64SCTCA和超声心动图在KD并发冠状动脉瘤患儿的随访中具有各自的应用价值,两种方法的联合应用可增加冠状动脉病变的检出率。     

基质金属蛋白酶-9靶向RNA干扰重组载体的构建和效应检测

目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果。方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列,体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定。阳性重组质粒测序。将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9mRNA表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9 siRNA质粒进行效应检测。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合。KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05)。结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础。