依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内Nestin表达的影响

目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性细胞主要分布于缺血侧侧脑室的室管膜下区(SVZ)、梗死灶周围大脑皮质和纹状体。细胞呈星状多突起,形似星形胶质细胞,且脑缺血后的大部分Nestin阳性细胞与星形胶质细胞标记物GFAP有共表达。缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数和免疫阳性表达强度于脑缺血后3 d达到高峰;梗死灶周围大脑皮质和纹状体区阳性细胞数和阳性表达强度分别于缺血后3 d和1周达到高峰;部分细胞聚集于梗死灶边缘,形成一个明显的梗死灶边缘带。经依达拉奉干预后,Nestin阳性细胞计数和表达强度与盐水组比较均升高(P<0.05),尤其在缺血治疗后3 d和1周(P<0.01)。结论脑缺血后,SVZ以及梗塞灶周围大脑皮质和纹状体区域大鼠Nestin阳性细胞数量增多、表达增强;经依达拉奉干预治疗后,Nestin阳性细胞的表达进一步增强,提示依达拉奉治疗可能促进脑缺血后神经干细胞的增生和分化,促进损伤组织的修复,发挥神经保护作用。     

胰腺成体干细胞的体外培养和鉴定

目的:用目前常用的干细胞分离方法对正常SD大鼠的胰腺成体干细胞进行分离、培养和鉴定,为胰腺癌干细胞的进一步研究奠定基础.方法:选取正常SD大鼠胰腺用胶原酶P消化分离,并用低血清无糖培养基纯化胰腺细胞,以RT-PCR,免疫组化和Western blot方法鉴定胰腺成体干细胞标志物巢蛋白(nestin)并通过RT-PCR证明细胞中存在ABCG2(ATP-binding cassette superfamily G member 2).结果:成功分离到所需胰腺成体干细胞,并通过以上3种方法证明分离所得细胞表达巢蛋白.结论:以胶原酶P作为消化液,低血清无糖培养作为分离方法能够成功的从正常胰腺中分离得胰腺成体干细胞.     

神经节苷脂对脑瘫大鼠大脑皮质区Nestin、NGF表达的影响

目的观察神经节苷脂（GM1）对脑瘫大鼠大脑皮质区神经巢蛋白（Nestin）、神经生长因子（NGF）表达的影响,探讨GM1促进脑瘫神经修复的可能机制。方法选择出生10周雄性SD大鼠200只,随机分为3组：假手术组60只,脑瘫模型140只,再分为模型组70只,腹腔注射生理盐水;GM1组70只,腹腔注射GM1。分别在术后0~24 h的7个时间点利用酶联免疫法检测大鼠大脑皮质区Nestin、NGF表达情况,并在实验前和后1~4 d观察大鼠的体质量变化情况。结果 （1）大鼠大脑皮质区Nestin表达GM1组0~24 h、模型组0~12 h明显高于假手术组（P〈0.01）;GM1组16~24 h明显高于模型组（P〈0.01）。（2）GM1组大鼠大脑皮质区NGF表达0~24 h明显高于模型组（P〈0.05）和假手术组（P〈0.01）。模型组NGF表达仅0、4、8 h高于假手术组（P〈0.05）。（3）GM1组术后第1、2天体质量缓慢增加,至第3、4天明显高于模型组（P〈0.05）,接近假手术组（P〉0.05）,模型组体质量增加不明显。结论预防性使用GM1是通过增强大脑皮质的Nestin和NGF表达并延长表达时间来发挥其对实验性脑瘫大鼠的神经保护作用。     

Hsp70和Nestin与脑缺血时间的研究进展

脑缺血（Brainischemia）是指脑的短暂性血液供应不足,并出现精神障碍等症状,长时间缺血可导致脑组织坏死,严重者可导致死亡,是一种最为常见的脑血管疾病。脑缺血可导致神经元的变性和坏死,长时间脑缺血会给患者带来不可逆性的神经功能缺损旧]。因此,脑缺血时间的准确推断对实施有效救治与脑缺血后神经功能的恢复具有十分重要的意义。脑缺血的时间推断有赖于多种分子生物指标的分析判断,探索与脑缺血时间有较好相关性的指标是当前临床医学研究的主要任务之一。     

二苯乙烯苷对沙鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及部分机制

目的研究二苯乙烯苷(TSG)对沙鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及部分机制。方法采用改良法建立沙鼠脑缺血/再灌注模型。沙鼠随机分为6组,假手术组、模型对照组、TSG大、中、小剂量(6、3、1.5 mg/kg),阳性对照药依达拉奉注射组(3 mg/kg)。7 d后通过Morris水迷宫测定学习记忆功能;脑组织匀浆行超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量测定;免疫组化SABC法显示Nestin蛋白在脑组织中的表达。结果与假手术组相比,模型组游出时间和游泳距离明显延长,而TSG治疗组、依达拉奉对照组较模型组明显缩短(P<0.05,P<0.01)。与假手术组相比,模型组沙鼠脑组织中SOD活性、GSH-Px酶活力单位明显降低,MDA含量明显升高。TSG(6、3 mg/kg)可显著提高血清SOD活性和GSH-Px酶活力单位,TSG(6、3、1.5 mg/kg)可明显降低MDA含量;TSG(6、3、1.5 mg/kg)Nestin蛋白的表达水平较模型组有明显增高。结论 TSG对脑缺血/再灌注损伤有明显的保护作用,其机制可能与抗自由基损伤、抑制体内脂质过氧化水平及促进神经细胞的修复有关。     

脊髓损伤后反应性星形胶质细胞的分离培养及多能性鉴定

目的探讨脊髓损伤(SCI)后反应性星形胶质细胞(RAS)的多能性,为其对SCI的临床治疗提供理论依据。方法成年大鼠SCI后,分离培养脊髓内RAS;对分离培养的细胞以及诱导分化后细胞行细胞免疫荧光鉴定;在培养RAS的培养基中添加5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),观察分离培养的细胞的增殖情况。结果分离培养的细胞可同时表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin),诱导分化细胞可表达微球相关蛋白2(MAP-2)、受体相互作用蛋白(RIP)和GFAP,培养基中添加BrdU培养一段时间后细胞球可表达BrdU。结论体内分离培养的成体大鼠SCI后的RAS具有多能性及自我更新潜能,可能作为内源性神经干细胞修复损伤脊髓。     

CD133免疫磁珠分选脑肿瘤干细胞及其生物学特性

目的:从人脑肿瘤组织中分离、培养、纯化和鉴定脑肿瘤干细胞(BTSCs),探讨CD133免疫磁珠分选方法获取BTSCs的可行性及BTSCs的生物学特性.方法:留取人脑胶质母细胞瘤新鲜标本,分离获得脑肿瘤细胞.应用CD133免疫磁珠分选方法纯化BTSCs;流式细胞仪检测分选阳性率;神经球计数法分析CD133+/-亚群细胞神...     

康复训练对脑出血大鼠室管膜下区NSCs增殖与分化的影响

目的 探讨康复训练对大鼠脑出血后室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法 75只SD大鼠随机分为康复组、制动组和假手术组(每组25只),康复组和制动组用胶原酶诱导脑出血模型,假手术组用生理盐水替代胶原酶.康复组每天予以抓握、平衡、旋转等训练,制动组置于网状笼内固定,假手术组在笼内自由活动.每组大鼠康复前后进行神经功能评分,分别于康复训练后1、4、7、14和28天处死动物.应用免疫组织化学方法检测大鼠SVZ神经细胞巢蛋白(Nestin)和5-溴脱氧尿核苷(BrdU)表达的变化.结果康复组神经功能缺损评分低于制动组(P﹤0.05).康复组大鼠SVZ BrdU阳性、Nestin阳性细胞在不同时间点均多于制动组大鼠(P<0.05),第7天康复组SVZ BrdU阳性、Nestin阳性细胞表达达到高峰,14天时表达逐渐减少(P<0.05,P<0.01).结论 康复训练可促进脑出血后大鼠NSCs增殖,并向神经元分化.     

维甲酸诱导神经管畸形发生过程中神经干细胞的变化研究

目的：了解维甲酸（Retinoic acid,RA）诱导神经管缺陷（Neural tube defect,NTD）小鼠神经发育过程中神经干细胞的变化规律。方法：分别取不同胚胎时段及新生、成年的正常及NTD小鼠的神经组织，采用神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin）间接免疫荧光抗体标记和DNA定量荧光染色，以流式细胞术检测。结果：①正常小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数目在E8．5d时呈高峰，此后逐步下降，新生期仍保持较高水平；NTD小鼠神经组织中Nestin阳性细胞数在胚胎各期均低于正常小鼠，尤以E8．5d下降显著；出生后与正常组无显著差别。②NTD小鼠胚胎期神经组织G0／G1期细胞数百分比明显高于正常组，S期细胞数百分比则明显低于正常组。结论：胚胎早期神经干细胞的数目减少及神经细胞增殖受抑制与RA致NTD的发生有密切关系。     

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

目的 探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达.方法 使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果 脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞.流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征.诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱.结论 脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志.脐血能够成为NSCs的新来源.