三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞株的抑制作用

目的:考察三叶青水提物及其含药血清对人胃腺癌细胞AGS体外增殖的影响.方法:清洁级小鼠随机分为5组:三叶青水提物高、中、低(20,10,5 g ·kg-1)剂量组、环磷酰胺阳性对照( CTX,5 g·kg-1)组及阴性对照组(蒸馏水).各组均ig给药,每次20 mL· kg-1,每天2次,连续给药3d,最后1次给药后1h断头取血,4℃静置4h,3 000 r ·min-1离心20 min,分离血清,56℃灭活30 min后,用0.22 μm的滤膜过滤除菌,-20℃保存备用.对数生长期的AGS细胞经0.25％胰蛋白酶消化后,配成2.5×104/L的细胞悬液接种于96孔培养板,培养24 h后,加入不同浓度的三叶青水提物溶液及其含药血清,作用48 h后,采用MTT比色法在570 nm波长下测定A,观察不同浓度三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞的抑制作用.结果:1 ～40 g·L-1三叶青水提物对AGS细胞有显著的抑制作用(P＜0.01),IC50为13.15 g·L-1;三叶青水提物含药血清高、中、低(20,10,5 g·kg-1)剂量组也可显著地抑制AGS肿瘤细胞的增殖(P＜0.01),IC50为70.06 g·L-1.二者均呈现出剂量依赖性.结论:三叶青水提物及其含药血清对AGS细胞均有较强抑制作用.     

三叶青松散型和致密型愈伤组织悬浮培养及黄酮积累的比较研究

目的比较三叶青松散型和致密型愈伤组织悬浮培养细胞生长及其次生代谢产物黄酮的积累情况。方法将三叶青叶诱导的愈伤组织在不同外源植物激素种类和配比的培养基上多次继代培养,筛选获得松散型和致密型愈伤组织,分别建立相应悬浮细胞体系,研究了两种悬浮培养细胞生长和总黄酮积累的动态。结果三叶青松散型愈伤组织悬浮培养的继代周期为8 d,增加质量倍数最高达到3.68倍,黄酮积累的最大值11.7 mg/g,较最初接种时的浓度增加34.5%,该悬浮系继代4～5次后生命力衰退且褐化加重;而致密型愈伤组织悬浮培养的继代周期为20 d,增加质量倍数最高达到2.65倍,黄酮积累的最大值40.9 mg/g,较最初接种时的浓度增加212.2%,该悬浮系继代多次细胞无明显变化。结论与松散型愈伤组织悬浮培养相比,致密型愈伤组织悬浮培养更有利于继代培养和次生代谢产物的积累。     

三叶青调节Th17/Treg平衡抗类风湿性关节炎的作用及机制研究

目的:探讨三叶青治疗类风湿性关节炎的可能机制。方法:采用大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂制备类风湿性关节炎模型大鼠，灌胃给予不同剂量三叶青提取物连续3周。检测大鼠关节肿胀度、关节炎指数、关节热度、抓力；ELISA检测血浆中白介素(IL)-6、IL-17、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及类风湿因子(RF)水平；全自动血液流变仪检测血液流变学指标；流式细胞术测定全血中辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)比例；HE染色观察踝关节组织形态学；Western blot法检测关节滑膜组织中IL-6、RORγt、Foxp3、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果:三叶青能有效降低类风湿性关节炎模型大鼠关节肿胀度、关节炎指数及关节热度，升高抓力；降低Th17/Treg比例及血浆IL-6、IL-17、TNF-α、RF水平，升高IL-10水平；下调关节滑膜组织中IL-6、STAT3、p-STAT3、RORγt蛋白表达，上调Foxp3蛋白表达，改善踝关节组织形态学改变。结论:三叶青具有明显的抗类风湿性关节炎作用，其机制可能与调控IL-6/STAT3/IL-17轴调节Th17/T...     

三叶青地上部分化学成分分析

目的分离分析三叶青地上部分的化学成分。方法用系统预试法,对三叶青地上部分乙醇提取物进行分段萃取,用薄层色谱法对各部位进行分离、分析、鉴别。结果三叶青地上部分含有黄酮类、氨基酸类、萜类、强心苷类、甾体类、油脂成分。结论三叶青地上部分含有黄酮类、萜类成分。     

“蛇年”话“蛇药”——清热解毒蛇附子

蛇附子又名三叶青、小扁藤,为葡萄科植物三叶崖爬藤的根,分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、四川等地区,全年均可采挖,每年的冬至到惊蛰期间采摘的质量最好, 这时采挖的根,淀粉含量在70％以上,药用效果最佳。把根挖出,除去杂质,洗净,润软,切厚片,干燥后即可入药,亦可鲜用。     

三叶青提取物对人肺癌H1299细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨三叶青提取物对人肺癌H1299细胞增殖抑制、凋亡作用及其机制。方法采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测三叶青提取物对H1299细胞增殖的抑制作用;采用倒置显微镜观察三叶青提取物对H1299细胞形态的影响;荧光显微镜观察三叶青提取物作用细胞后经Hoechst 33258染色的凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;蛋白印迹法（Western blot）检测pro-caspase-3、9,cle-caspase-3、9,poly-ADP-ribose polymerase（PARP）蛋白表达变化。结果与对照组比较,浓度为0.5、1、5、10 mg/m L三叶青提取物作用H1299细胞后抑制率升高（P〈0.05,P〈0.01）;同时作用时间越长,抑制率越高（P〈0.01）。倒置显微镜下观察给药后细胞形态明显改变,细胞减少;荧光显微镜下观察荧光染色后细胞核浓染和凋亡小体形成。流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率呈明显的量-效关系。Western blot结果表明：与对照组比较,浓度为5、10 mg/m L三叶青提取物明显抑制H1299细胞中pro-caspase-3、9和PARP蛋白表达,增加cle-caspase-3、9,cle-PARP蛋白的表达,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三叶青提取物对人肺癌H1299细胞具有明显抑制其增殖,促进细胞凋亡作用,且其机制可能与激活caspase蛋白表达有关。     

不同工艺三叶青制剂对人肺癌A549裸鼠移植瘤生长抑制作用比较研究

目的:观察不同工艺加工的三叶青制剂抗人肺癌A549裸鼠移植瘤的作用.方法:将相同生药剂量的三叶青冻干粉、水煎剂和饮片粉灌胃人肺癌A549移植瘤裸鼠,测定其肿瘤生长动态体积和抑瘤率.结果:三种不同工艺制备的三叶青对人肺癌A549裸鼠移植瘤均有一定的抑制作用,抑瘤率在10.5％～28.0％之间,其中三叶青冻干粉和饮片粉高、中剂量均可明显抑制人肺癌A549裸鼠移植瘤的生长(P＜0.05),但肿瘤体积的动态测定表明三叶青冻干粉发挥抑瘤作用的时间要早于饮片粉.水煎剂的抑瘤作用不显著(P＞0.05).结论:三叶青冻干粉和饮片粉抗人肺癌A549裸鼠移植瘤的作用强于水煎剂,而冻干粉发挥抑瘤效果的时间要早于饮片粉.     

HPLC法同时测定三叶青块根中6个黄酮类成分的含量

目的:建立同时测定三叶青块根中芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮素和山柰酚含量的方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法。色谱柱为Alliance SilGreen C18,流动相为0.2%磷酸水溶液-乙腈溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL/min,柱温为35℃,检测波长为360 nm,进样量为15μL。结果:芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮素和山柰酚的检测质量浓度线性范围分别为21.77～217.77、12.37～123.75、13.23～132.31、4.63～46.30、5.75～57.50、3.36～33.66μg/mL(r均=0.999 9);检测限分别为0.217 8、0.123 8、0.066 2、0.046 3、0.191 7、0.112 3μg/mL;定量限分别为0.435 6、0.247 5、0.165 4、0.154 3、0.575 0、0.421 2μg/mL;精密度(n=6)、稳定性(24 h,n=7)、重复性(n=6)试验的RSD均≤3.20%;平均加样回收率分别为96.23%、86.88%、97.51%、97.67%、97.50%、87.46%,RSD分别为1.85%、1.90%、1.84%、1.87%、1.25%、2.01%(n=9)。结论:该方法快速、简便,可用于同时测定三叶青块根中芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷、槲皮素和山柰酚的含量。     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系PKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响

目的 观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞VEGF和HIF-1α蛋白表达的影响,初步探讨其可能的机制.方法 采用体外细胞培养技术,用西部印迹法和免疫组化法观察三叶青提取物对RKO细胞的VEGF和HIF-1α蛋白表达改变.结果 三叶青提取物能在CoCl2(150μM)模拟低氧时显著上调RKO细胞HIF-1α蛋白表达,并上调HIF-1的主要靶基因VEGF的蛋白表达水平.结论 三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞有抑制肿瘤血管形成的抗增殖作用.