二烯丙基二硫上调miR-22通过Wnt-1通路抑制人胃癌细胞增殖与迁移侵袭

目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)上调miR-22是否通过Wnt-1通路抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭。方法 MTT、细胞划痕实验、侵袭实验分别检测DADS与miR-22对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响。在线预测软件寻找miR-22调控的靶基因,荧光素酶报告基因检测miR-22对Wnt-1 3'UTR荧光酶活性的影响。qRT-PCR检测Wnt-1mRNA表达变化。Western blot检测Wnt-1、β-catenin与TCF-4蛋白表达。结果MTT显示,DADS与miR-22可明显抑制MGC803细胞增殖(P<0.05)。划痕实验显示,DADS与miR-22可明显抑制MGC803细胞迁移,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。侵袭实验显示,miR-22可抑制人胃癌MGC803细胞侵袭,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。在线预测软件寻找miR-22调控的靶基因显示,Wnt-1可能是miR-22的靶基因,荧光素报告基因检测证实Wnt-1是miR-22直接调控的靶基因;qRT-PCR显示,DADS与miR-22能下调Wnt-1 mRNA表达,而miR-22+DADS更为明显(P<0.05)。Western blot显示,DADS与miR-22能下调Wnt-1、β-catenin与TCF-4蛋白表达,而miR-22+DADS尤为明显(P<0.05)。结论 DADS可上调miR-22通过Wnt-1通路明显抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

硫化氢在呼吸系统疾病中的作用研究进展

呼吸系统疾病的发生率位于各系统疾病之首,随着其发病率的逐年攀升,呼吸系统疾病的预防、诊断和治疗也日益被重视。除一氧化氮和一氧化碳之外,硫化氢(H₂S)是第3种重要的气体信号分子,具有典型的恶臭气味。越来越多的研究发现其与肺部炎症、慢性阻塞性肺疾病、肺癌等多种呼吸系统疾病的发生发展有着密切联系,在呼吸系统中兼具保护与损伤两种相互矛盾的作用,研究H₂S在呼吸系统疾病中的作用及其相应的病理生理学机制对呼吸系统疾病的诊治具有重要意义。因此,本文对H₂S的产生过程、H₂S在呼吸系统中的双向作用以及在常见呼吸系统疾病中的具体作用进行了简要概述,为其临床应用提供理论依据。     

二烯丙基二硫诱导恶性胶质瘤U251细胞凋亡的作用及机制北大核心CSCD

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人恶性胶质瘤U251细胞凋亡的作用及其分子机制。方法光学显微镜观察DADS作用后U251细胞凋亡形态学改变;流式细胞术检测DADS对U251细胞凋亡率的影响;Western blot和免疫细胞化学分别检测凋亡相关蛋白的表达。结果光学显微镜下,DADS处理U251细胞后,细胞呈现凋亡形态改变。MTT法显示,15、30、45、60 mg/L DADS处理U251细胞48 h后,生长抑制率分别为22.01%、38.82%、49.23%、55.27%,与未处理组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示,15、30、45 mg/L DADS处理后,细胞凋亡率分别为(5.36±0.87)%、(28.36±3.15)%和(44.58±3.95)%,显著高于对照组(2.14±0.45)%(P<0.05)。免疫细胞化学显示,45 mg/L DADS处理48 h后,Bcl-2表达平均吸光度值(0.34±0.03)较未处理细胞(0.75±0.06)明显下降(P<0.05);Bax表达平均吸光度值(0.63±0.04)高于未处理组(0.26±0.03)(P<0.05);Caspase 3表达平均吸光度值(0.41±0.05)明显高于未处理组(0.19±0.02)(P<0.05)。Western blot检测显示,15、30与45mg/L DADS处理48 h后,Bcl-2蛋白灰度值比分别为(1.21±0.18)、(0.89±0.14)与(0.41±0.09),较未处理组(2.24±0.26)显著降低(P<0.05);Bax和Caspase 3蛋白分别为(1.12±0.19)、(1.54±0.22)与(2.08±0.27)和(0.72±0.15)、(1.39±0.21)与(2.28±0.29),明显高于未处理组(0.33±0.08)和(0.14±0.06)(P<0.05)。结论 DADS可诱导恶性胶质瘤U251细胞凋亡,机制与下调Bcl-2,上调Bax、Caspase 3有关。     

LMP1经Wnt1/β-catenin途径促进鼻咽癌干细胞SP18增殖

目的 探讨LMP1羧基端功能活性区促进鼻咽癌干细胞SP18增殖作用机制。方法 采用生长曲线、平皿克隆形成实验与软琼脂集落实验分析LMP1TRADD对SP18细胞增殖的作用;运用Western-blot检测SP18细胞中Wnt1、β-catenin与p-β-catenin蛋白的表达。结果 SP18-LMP1TRADD细胞的增殖能力较SP18-LMP1细胞减弱（P＜0.01）;与SP18-LMP1细胞比较,SP18-LMP1TRADD细胞中Wnt1与β-catenin表达降低,而p-β-catenin蛋白表达增加（P＜0.01）。结论 LMP1经Wnt1/β-catenin途径促进鼻咽癌干细胞SP18的增殖。     

Chk1/2转基因MGC803细胞系的建立与鉴定

目的构建Chk1/2基因的真核表达载体和建立高表达Chk1/2基因人胃癌MGC803细胞,为研究Chk1/2功能奠定基础。方法参照野生型Chk1/2基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成Chk1/2 cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片断,双酶切后定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体,经氨苄青霉素筛选阳性重组质粒,菌液PCR及测序法对重组质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入MGC803细胞,经G418筛选后,RT-PCR及Western blot检测表达产物。结果菌液特异性PCR结果表明克隆的基因片断分别为1.4 kb和1.6 kb,测序分别证实为Chk1和Chk2基因,经NCBIBLAST分析与Genbank中Chk1基因的同源性为100%,编码的氨基酸同源性为100%,Chk2基因的同源性为99%,编码的氨基酸同源性为100%。G418筛选转染细胞4周后获得稳定转染空载体pcD-NA3.1(+)的细胞克隆株和稳定转染重组质粒的MGC803细胞。经RT-PCR及Western blot鉴定,Chk1/2在MGC803细胞中的表达比对照组明显增加。结论成功构建Chk1/2基因真核表达载体与Chk1/2高表达MGC803细胞,为研究二烯丙基二硫诱导MGC803细胞G2/M期阻滞的机制奠定了基础。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞G_2/M期检查点Chk1与Chk2的影响

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞G2/M期检查点Chk1与Chk2的影响。方法流式细胞术检测细胞周期改变;Northern blot、Westernblot与免疫细胞化学检测DADS处理MGC803细胞的Chk1与Chk2表达。结果流式细胞术分析显示,30 mg.L-1DADS呈时间依赖性阻滞MGC803细胞在G2/M期(P<0.05);Northern blot检测表明,DADS不同时间作用MGC803细胞后,Chk1与Chk2 mRNA表达与未处理组差异无显著性(P>0.05);免疫细胞化学发现Chk1与Chk2表达与未处理组无明显改变(P>0.05);Western blot DADS在不同时间对MGC803细胞Chk1与Chk2总蛋白表达无改变(P>0.05),而磷酸化的Chk1表达呈时间依赖性增加(P<0.05),但磷酸化的Chk2无明显改变(P>0.05)。结论 DADS阻滞MGC803细胞G2/M期与磷酸化Chk1有关。     

沉默LIMK1促进DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭

目的探讨LIMK1沉默对DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭的影响。方法 RNA干扰技术建立稳定LIMK1-miRNA/SW480细胞株;免疫组化和Western blot检测DADS对沉默LIMK1结肠癌SW480细胞LIMK1和磷酸化LIMK1蛋白表达的影响。划痕实验和侵袭实验检测LIMK1 RNA沉默与DADS对SW480细胞迁移与侵袭的影响。结果 RT-PCR与Western blot显示,LIMK1-miR/SW480细胞LIMK1mNRA与蛋白表达明显下调,表明成功构建稳定沉默LIMK1基因的SW480细胞株。免疫组化和Western blot显示,45 mg.L-1DADS处理和沉默LIMK1组较未转染组与空载体组SW480细胞LIMK1蛋白和磷酸化LIMK1明显下调(P<0.05)。划痕实验和侵袭实验发现,沉默LIMK1或DADS处理SW480细胞的迁移与侵袭能力较未转染组与空载体组明显抑制(P<0.05)。而DADS处理沉默组抑制SW480细胞迁移和侵袭能力更为明显(P<0.05)。结论沉默LIMK1基因可抑制SW480细胞迁移与侵袭,增强DADS抑制SW480细胞迁移与侵袭作用。     

AP-2γ在胃癌中表达的临床病理意义

目的研究AP-2γ表达与胃癌发生、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期的关系。方法将81例胃癌、胃黏膜癌前病变26例及正常胃黏膜组织34制成组织芯片,采用免疫组化技术检测胃癌、癌前病变及正常组织中AP-2γ表达。结果 AP-2γ表达在胃癌76.54%与癌前病变69.23%明显高于正常胃黏膜35.29%(P<0.05)。癌前病变低于胃癌(P<0.05)。高分化腺癌AP-2γ表达率40.00%明显低于中分化70.59%与低分化腺癌81.36%(P<0.05)。而低分化腺癌显著高于中分化腺癌(P<0.05)。≤3.0cm表达59.38%低于>3.0cm的87.76%(P<0.05)。淋巴结转移83.64%明显高于无转移61.54%(P<0.05)。Ⅰ+Ⅱ期表达59.38%明显低于Ⅲ+Ⅳ期87.76%(P<0.05)。结论 AP-2γ在胃癌高表达与胃癌的发生、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期密切相关,其可能是胃癌侵袭转移的重要标记。     

RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号促进人胃癌MGC803细胞上皮间质转化

目的 探讨RORα拮抗剂T0901317通过RORα/β-catenin信号对促进人胃癌MGC803细胞上皮-间质转化(epithelial–mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。Western blot与免疫荧光检测RORα/β-catenin信号相关分子,免疫共沉淀检测RORα蛋白与β-catenin蛋白结合。结果 MTT检测显示,T0901317处理组较MGC803细胞增殖能力呈时间依赖性增加(P<0.05)。细胞划痕和Transwell实验显示,T0901317处理组细胞迁移与侵袭能力较MGC803细胞明显增强(P<0.05)。Western blot检测显示,T0901317处理后较未处理组RORα蛋白明显下调(P<0.05),并且可上调MGC803细胞β-catenin总蛋白与核内β-catenin(P<0.05)。T0901317处理后较对照组RORα蛋白与β-catenin蛋白结合分别明显减少(P<0.05)。T0901317处理的细...     

Calreticulin通过诱导细胞EMT促进鼻咽癌迁移和侵袭

目的:观察钙网蛋白(calreticulin,CRT)在鼻咽癌组织中的表达并分析其临床病理学意义,揭示其对鼻咽癌CNE2细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:S-P免疫组化法检测CRT在52例鼻咽癌组织和57例鼻咽部良性病变组织中的表达情况,并分析其临床病理学意义;构建特异性干扰CRT基因的小干扰RNA干扰载体,瞬时转染鼻咽癌CNE2细胞,观察CRT低表达对CNE2细胞形态的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测CRT低表达对CNE2细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测CRT低表达对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转化生长因子-β(TGF-β)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)等EMT相关蛋白表达的影响。结果:CRT在鼻咽癌组织中的阳性表达率为82.69%(43/52),在鼻咽部良性病变组织的阳性表达率为19.29%(11/57),CRT在鼻咽癌组织中表达显著增高(P0.05);CRT的阳性表达率与鼻咽癌分期及淋巴结转移呈正相关(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,CNE2细胞由梭形演变为扁平和鹅卵石样,且细胞排列紧密,细胞的迁移侵袭能力减弱(P0.05)。敲降CRT呈低表达后,E-cadherin表达显著增高,vimentin、TGF-β以及MMP-9蛋白的表达降低(P0.05)。结论:Calreticulin在鼻咽癌组织中表达显著增高,且与鼻咽癌临床分期及淋巴结转移呈正相关。Calreticulin可诱导鼻咽癌CNE2细胞发生EMT,进而促进鼻咽癌的迁移和侵袭。