畲药小香勾香豆素类成分RP-HPLC含量测定及抗炎靶点预测

[目的] 以反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography，RP-HPLC)法测定畲药小香勾香豆素类成分补骨脂素和佛手柑内酯的含量，并结合网络药理学和动物实验验证小香勾的抗炎作用。[方法] 色谱柱为Waters C18柱(4.6 mm×250 mm，5.0 μm)，流动相A为乙腈，流动相B为0.1%甲酸溶液(体积比)，梯度洗脱，流速为0.8 mL·min-1，补骨脂素检测波长245 nm，佛手柑内酯320 nm，柱温25 ℃。利用网络药理学平台收集小香勾香豆素类成分及抗炎相关靶点，利用 Cytoscape 3.8.2软件建立成分-靶点网络，借助网络拓扑分析插件(Cytoscape network centrality analysis，CytoNCA)筛选抗炎核心靶点，进一步采用Metascape软件进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomics，KEGG)通路富集分析。通过二甲苯致小鼠耳肿胀法进一步验证小香勾的抗炎作用。[结果] 补骨脂素和佛手柑内酯的质量浓度分别在0.51～102.00 μg·mL-1(r=0.9996)和0.24～48.00 μg·mL-1(r=0.9998)时与峰面积呈良好的线性关系。通过筛选获得小香勾补骨脂素和佛手柑内酯的相关基因57个，抗炎靶点2 148个，交集靶点31个。KEGG 通路富集分析发现，这些靶点主要涉及化学致癌作用-活性氧、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号通路、癌症途径、催乳素信号通路和叶酸生物合成等信号通路。与模型对照组比较，小香勾高剂量组(400 mg·kg-1)能显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P<0.01)，显示小香勾具有良好的抗炎作用。[结论] 建立的RP-HPLC法操作简单，灵敏度高，可用于小香勾质量控制。小香勾香豆素类成分通过多靶点多通路表现出良好的抗炎作用，为后续深入探讨小香勾抗炎机制提供了有利的科学依据。