淫羊藿苷对精神分裂症模型大鼠认知及海马组织NRG1/ErbB信号通路的影响

背景:淫羊藿苷是补肾助阳中药淫羊藿的有效活性成分之一,除了可促进生殖系统功能外,还能明显改善精神分裂症,但其具体作用机制仍处于研究与探索阶段。目的:探究淫羊藿苷对精神分裂症大鼠认知功能的影响及机制。方法:采用随机数字表法将48只SD大鼠分4组,每组12只:正常组不造模;模型组、淫羊藿苷低、高剂量组通过腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(1次/d)诱导精神分裂症模型,连续注射14 d。确认造模成功后,淫羊藿苷低、高剂量组分别灌胃给予25,50 mg/(kg·d)的淫羊藿苷,对照组、模型组灌胃生理盐水,连续给药28 d。给药结束后,进行行为学检测及海马组织尼氏染色和FJB染色、氧化应激水平、炎症因子水平、NRG1/ErbB4信号通路蛋白表达。结果与结论:(1)与模型组比较,给药两组刻板行为评分、自发活动总路程和逃避潜伏期明显减少(P <0.05),穿台次数明显增加(P <0.05);淫羊藿苷高剂量组刻板行为评分、逃避潜伏期(第3-5天)明显低于淫羊藿苷低剂量组(P <0.05);(2)与模型组比较,给药两组海马组织线粒体膜电位、超氧化物歧化酶活性升高(P...     

首乌丸调节肠道菌群延缓D-半乳糖模型大鼠脑衰老作用及机制研究

目的 探讨首乌丸延缓脑衰老的可能作用机制。方法 将SPF级SD雄性大鼠50只任意分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸组及首乌丸2倍剂量组。除正常组外，其余4组均用D-半乳糖(120 mg/kg)复制衰老模型，同时首乌丸组和首乌丸2倍剂量组分别予首乌丸1.08、2.16 g/kg灌胃，维生素E组予维生素E 0.018 g/kg灌胃。6周造模结束后，各组任意选取6只小鼠进行16S rRNA测序分析肠道菌群多样性和物种丰度的变化，检测海马β-半乳糖苷酶活力，苏木素-伊红(HE)染色观察空肠组织病理形态学变化，用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清及海马的氧化三甲胺(TMAO)含量。Spearman相关性分析基于属水平的差异菌群与血清TMAO的相关性。结果 与正常组相比，模型组海马β-半乳糖苷酶活性上升(P<0.01);与模型组相比，首乌丸组和首乌丸2倍剂量组海马β-半乳糖苷酶活性下降(P<0.01)。与模型组相比，首乌丸组和首乌丸2倍剂量组回肠纹状缘比较整齐，黏膜上皮细胞脱落减少。与正常组相比，模型组Chao1指数、Faith指数、Observed＿otus指数下降(P...     

参苓白术散调节Nrf2/ARE通路改善高尿酸血症型少弱精子症小鼠的生精功能

目的 探讨参苓白术散对高尿酸血症（HUA）型少弱精子症异病同治的作用及机制。方法 将32只雄性昆明种（KM）小鼠随机分为空白组（n=6）、模型组（n=6）、参苓白术散高剂量组（n=7）、参苓白术散低剂量组（n=7）和非布司他组（n=6）。除空白组外，其余各组连续腹腔注射氧嗪酸钾悬液（600 mg·kg^-1）7 d。造模完成后，参苓白术散高、低剂量组分别给予参苓白术散20.14、10.07 g·kg^-1灌胃，非布司他组给予非布司他0.25 g·kg^-1灌胃，空白组和模型组给予同体积生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续14 d后取材。生化法检测血清尿酸（UA），睾丸组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；苏木素-伊红（HE）染色法观察睾丸组织病理学变化并进行生精功能评分；全自动精子分析仪检测精子密度和活动率；单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA完整性；原位末端标记法（TUNEL）检测睾丸细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测睾丸组织Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠血清UA显著升高（P<0.01），睾丸生精功能、精子密度和活动率均显著下降（P<0.01），精子拖尾率、睾丸细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，参苓白术散高剂量组小鼠上述指标均有明显改善（P<0.05， P<0.01），且睾丸组织Keap1、Bax、Caspase-3表达量明显降低，Nrf2、HO-1、Bcl-2表达量明显升高（P<0.05， P<0.01），Keap1 mRNA水平明显降低（P<0.05， P<0.01），Nrf2、HO-1 mRNA水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 参苓白术散能明显改善HUA型少弱精子症，其机制可能与Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路有关。     

基于脂质与动脉粥样硬化通路探讨菟丝子防治卵巢早衰的作用机制

目的 通过网络药理学及分子对接技术初步预测菟丝子防治卵巢早衰的活性成分、作用靶点及信号通路，并构建卵巢早衰动物模型，基于脂质与动脉粥样硬化信号通路探讨其作用机制。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、Swiss Target Prediction、Pharmmapper等数据库中获取药物的有效成分及对应靶点；使用GeneCards数据库收集疾病的相关靶点；利用Venny2.1.0在线工具筛选出药物与疾病的交集靶点，用STRING数据库及Cytoscape v3.7.2软件构建“药物-成分-靶点”与蛋白质-蛋白质互作网络（PPI）网络图；通过运行R语言脚本对交集靶点进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，利用分子对接技术将药物成分与靶点进行对接，并对其部分对接结果进行可视化；将小鼠随机分为正常组、模型组、菟丝子组与戊酸雌二醇组，采用慢性应激制备卵巢早衰模型，正常组与模型组给予等量生理盐水灌胃，菟丝子组给予菟丝子水煎剂2.6 g·kg^-1·d^-1，戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇溶液0.13 mg·kg^-1·d^-1，4周后取材，苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢的组织形态学改变，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E₂）、缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素（AMH）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞外调节蛋白激酶（ERK）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、核转录因子-κB抑制因子α（IκBα）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等表达水平。结果 共筛选菟丝子防治卵巢早衰靶点171个，主要包括细胞肿瘤抗原（TP53）、蛋白激酶B1（Akt1）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶（SRC）、肿瘤坏死因子（TNF）、表皮生长因子受体（EGFR）等，KEGG通路富集分析预测菟丝子防治卵巢早衰主要涉及脂质与动脉粥样硬化、TNF信号通路、TP53信号通路等。动物实验表明，与卵巢早衰模型组比较，菟丝子组可明显上调AMH、E₂、HDL-C（P<0.05，P<0.01），显著下调LH、TC、LDL-C（P<0.01），显著降低IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平与ERK、NF-κB p65及其磷酸化水平（P<0.01）。结论 菟丝子可通过“多成分-多靶点-多通路”方式，调节激素水平改善卵巢功能，其机制可能与调控脂质与动脉粥样硬化信号通路有关。     

基于mTOR信号通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元突触可塑性的影响

目的 探讨首乌丸基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元突触可塑性的影响。方法 将50只SPF级SD雄性大随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸低剂量组及首乌丸高剂量组，除正常组外，其余4组均用D-半乳糖（120 mg·kg^-1）制造衰老模型，同时给予维生素E（0.018 g·kg^-1），首乌丸低、高剂量（1.08、2.16 g·kg^-1）灌胃。造模6周后Morris水迷宫检测行为学变化，取全脑、海马组织，免疫组化检测海马突触后密度蛋白-95（PSD-95）、突触素（SYN）的表达，高尔基染色观察大鼠神经元形态及功能的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织中mTOR、磷酸化（p）-mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）、磷酸化（p）-p70S6K、真核翻译起始因子4E结合蛋白2（4EBP2）、磷酸化（p）-4EBP2蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马mTOR、p70S6K、4EBP2 mRNA表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠平均游泳速度减慢（P<0.01），游泳总路程延长（P<0.05），上平台潜伏期延长（P<0.01），穿越平台次数明显减少（P<0.01），海马CA1区PSD-95、SYN蛋白表达下降（P<0.01），染色效果最淡，区域最小，在同心圆距胞体100、140、180、200 μm时，海马神经元树突与同心圆交点数量减少（P<0.01），树突棘长度及密度均下降（P<0.01），p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达升高（P<0.01），4EBP2、p-4EBP2蛋白表达显著下降（P<0.01），mTOR、p70S6K mRNA表达上升（P<0.01），4EBP2 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较，首乌丸低、高剂量组大鼠的平均游泳速度加快（P<0.01），上平台潜伏期缩短（P<0.01），穿越平台次数增加（P<0.01），海马CA1区PSD-95、SYN蛋白表达升高（P<0.01），在同心圆距胞体100、140、180、200 μm时，海马神经元树突与同心圆交点数量增加（P<0.01），首乌丸低、高剂量组大鼠的树突棘数量、长度、密度均升高（P<0.01），p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达下降（P<0.01），4EBP2、p-4EBP2蛋白表达升高（P<0.05，P<0.01），mTOR、p70S6K mRNA表达降低（P<0.01），4EBP2 mRNA表达显著升高（P<0.01）。结论 首乌丸能够改善D-半乳糖模型大鼠的学习记忆能力，增强突触可塑性相关蛋白表达，改善神经元形态，修复神经功能，减少神经元凋亡，抑制mTOR信号通路，延缓脑衰老。