Progression of subcellular changes during chemical hypoxia to cultured rat hepatocytes: A laser scanning confocal microscopic study

The aim of this study was to evaluate changes in the subcellular organelles of cultured hepatocytes by laser scanning confocal microscopy during chemical hypoxia with cyanide and iodoacetate, inhibitors of mitochondrial respiration and glycolysis, respectively. Parameter-specific fluorophores used were calcein for cell topography and membrane permeability, rhodaminedextran for lysosomes, rhodamine 123 and tetramethylrhodamine methylester (TMRM) for mitochondrial membrane potential (ΓΨ) and propidium iodide for loss of cell viability. During the first 30 to 40 minutes of chemical hypoxia to cultured hepatocytes, numerous surface blebs formed and cell volume increased, but ΓΨ decreased relatively little. Subsequently, the nonspecific permeability of mitochondrial membranes increased, and mitochondria depolarized. These events were followed a few minutes later by disintegration of individual lysosomes. After a few more minutes, viability was lost as indicated by bleb rupture, gross plasma membrane permeability to calcein, and nuclear labeling with propidium iodide. Thus, the following sequence of intracellular events occurred during chemical hypoxia: adenosine triphosphate (ATP) depletion, bleb formation with cellular swelling, onset of a mitochondrial permeability transition, disintegration of lysosomes, plasma membrane failure from bleb rupture, and cell death. Any explanation of the pathophysiology of hypoxic injury must take into account this unique sequence of events.     

当归六黄汤质量标志物的发现及其作用机制解析研究

目的：基于中药质量标志物（Q-marker）“五原则”和网络药理学，为当归六黄汤的质量控制研究提供参考，并为其临床应用提供科学依据。方法：根据Q-marker“五原则”对当归六黄汤的质量标志物进行筛选，再利用中药系统药理学数据库（TCMSP）、ChEMBL与Swiss Target Prediction平台获取功效标志物的潜在作用靶点，构建当归六黄汤质量标志物的蛋白互作网络。利用拓扑、GO、KEGG富集分析构建“关键靶点-信号通路-生物过程”网络，进而阐释当归六黄汤质量标志物的作用机制。结果：根据“五原则”和网络药理学综合分析，筛选阿魏酸、黄芪甲苷、梓醇、汉黄芩素、地黄苷D、黄芩苷、黄柏碱、汉黄芩苷、小檗碱作为当归六黄汤的质量标志物，这些标志物可能通过作用于MAPK、雌激素、PI3K-Akt等通路从而调节MAPK级联、基因表达、一氧化氮生物合成过程抑制炎症。结论：本研究初步探究当归六黄汤的质量标志物及其作用机制，为当归六黄汤的机制研究和临床应用提供更有利的科学依据与理论基础。     

砂仁及其伪品鉴别方法研究进展

砂仁是常用中药，也是我国“四大南药”之一，市场需求量巨大，而在云南、广东等地的种植量不能满足市场需求，仍需大量进口。由于进口国家豆蔻属植物种类丰富，进口砂仁中掺杂大量近缘种，药材鉴别困难，导致如今砂仁药材市场掺伪现象严重。通过查阅了近40年的文献，对目前市场上主要砂仁伪品进行总结，分析了鉴别砂仁真伪品的主要方法。随着砂仁伪品不断变化，传统性状鉴别、显微鉴别、色谱方法等很难实现砂仁的真伪鉴别，分子鉴别方法能够基本实现砂仁真伪鉴别，市场推广应用不足。若要规范砂仁药材市场，需在药材源头控制的基础上，开发更为简易、普适的鉴别方法，同时也为砂仁临床用药安全提供保障。     

槲寄生中黄酮类成分指纹图谱的建立及高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素的定量检测

目的 建立槲寄生黄酮类成分的特征指纹图谱，同时测定槲寄生中高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素的含量，结合化学计量法分析，为其质量控制提供参考。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，体积流量1.0 mL·min^-1，检测波长为285 nm，柱温30℃。建立14批槲寄生药材的黄酮类成分指纹图谱，结合化学计量学软件进行聚类分析（CA）、主成分分析（PCA）、偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）。在同一色谱条件下，经方法学验证，HPLC法同时测定14批槲寄生药材中高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素。结果 建立了槲寄生药材黄酮类成分的指纹图谱，标定了7个共有特征峰，指认了其中2个峰：峰4 （高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷）、峰6（高圣草素）；其中12批槲寄生药材相似度达到0.9以上，聚类分析将14批样品分为2类；PCA分析共得到2个主成分，主成分1主要反映了特征峰2～7的信息，主成分2主要反映特征峰1的信息，峰4与峰6的峰面积较大，且对第1主成分的贡献也较大；PLS-DA结果表明，3个共有特征峰的变量重要性投影（VIP）值＞1，依次为峰7、峰6、峰4。高圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、高圣草素2个指标成分在一定质量浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为103.17%、101.47%，RSD分别为2.0%、0.7%，方法学考察结果均符合相关要求，14批样品中2种成分总质量分数为2.32～5.17 mg·g^-1。结论 建立的方法准确、简便、重现性好，可为槲寄生药材的质量控制提供参考。