血液检验实习带教PBL案例教学法的应用与思考

临床血液学检验是一门基础理论与实验技能及临床实践紧密结合的综合性临床学科,是医学检验专业的主干课程,也是联系临床医学的桥梁学科.在临床检验实习阶段,根据专业特点采用PBL病案教学法,能弥补课程前期的教与学缺陷,促进高素质、合格临床检验人员的转型培养.     

HSV1-TK、HSV1-SR39TK及GCV、ACV对小鼠T淋巴细胞的杀伤作用研究

 目的 观察慢病毒载体携带的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶（HSV1-TK）和突变型单纯疱疹病毒1型胸苷激酶（HSV1-SR39TK）基因在小鼠T淋巴细胞的表达及前体药物丙氧鸟苷（GCV）、无环鸟苷（ACV）对小鼠T淋巴细胞的杀伤效应。方法 用亚克隆技术将PCR扩增的HSV1-TK、HSV1-SR39TK基因分别连接至慢病毒载体,在TK、SR39TK基因后以内部核糖体进入位点（IRES）连接绿色荧光蛋白（GFP）基因,采用三质粒包装系统包装病毒,将病毒感染刀豆蛋白A激活的小鼠T淋巴细胞,然后通过CCK-8方法观察其对前体药物GCV、ACV的敏感性。结果 慢病毒载体携带的HSV1-TK 及HSV1-SR39TK 基因均可在小鼠T淋巴细胞内高效表达,GCV和ACV对转导TK基因的淋巴细胞均有杀伤作用,含突变型TK基因的淋巴细胞对前体药物敏感性更高,后者对GCV的IC50值比野生型小2.5倍,对ACV的IC50值比野生型小17.4倍。结论 表达HSV1-SR39TK基因的T细胞对GCV有更高的敏感性,对ACV也较敏感,应用HSV1- SR39TK基因进行防治GVHD的研究是更好的选择。     

南瓜蛋白联合常用化疗药对NB4细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨南瓜蛋白（CUS）与全反式维甲酸（ATRA）或亚砷酸（ATO）联用对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响。以MTF比色法检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞凋亡的影响,用金氏公式判断两药联用的协同效果。结果表明,CUS与ATRA或ATO联合应用的抑制率均大于各药相应浓度单用的抑制率,其协同指数q值均〉0．85,并且两药均在低浓度范围内联用的协同效果明显。CUS与ATRA或ATO联合应用时NB4细胞的凋亡率均大于各药相应浓度单用时的凋亡率,其协同指数q值均〉1．15。结论：CUS与ATRA或ATO联用对NB4细胞增殖和诱导凋亡均有较好的协同作用。     

靶向CXC趋化因子受体1/2联合Ara-C对急性髓系白血病U937细胞恶性生物学行为的影响与调控机制

目的:探讨CXC趋化因子受体1/2 (CXCR1/2)靶向抑制剂Reparixin联合Ara-C对急性髓系白血病(AML)细胞恶性生物学行为的作用及对CXCR家族表达的影响，并探究其间存在的分子机制，为AML新型分子标记物和靶向治疗提供科学依据与参考。方法:不同浓度Reparixin、Ara-C单药或联合干预AML U937细胞，倒置显微镜下观察细胞形态; Wright-Giemsa法检测细胞形态学改变; CCK-8法检测细胞增殖; Transwell小室法检测细胞侵袭能力;集落形成实验检测细胞克隆形成能力; Hoechst 33258法、Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;单丹黄酰尸胺(MDC)荧光示踪染色法检测细胞自噬; Western blot检测凋亡、自噬及相关信号通路蛋白的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CXCR家族的表达变化。结果:Reparixin可抑制U937细胞增殖、侵袭、迁移及克隆形成能力并促发其凋亡。与单药组相比，Reparixin联合Ara-C干预U937细胞时，增殖、侵袭、集落形成等恶性生物学行为能力显著下降，凋亡和自...     

AS_2O_3逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(As2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制。以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象。采用SRB法检测As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨As2O3对恶性淋巴瘤细胞周期的影响。结果表明:①As2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,As2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p0.01);③与未处理组相比,As2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMT1表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加。结论:As2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长。     

iRNA:一种新兴的肿瘤治疗方法

干扰RNA不仅是基因功能研究的一种工具,同时也成为一种通过特异调控基因达到减轻病理的手段。基于前期的体内外实验研究,干扰RNA将用于阐明肿瘤发病机制和开发治疗手段等方面。通过特异下调相关基因达到治疗的作用。然后一些重大问题,诸如体内导入,目的基因的不完全抑制,非特异免疫应答,旁观者效应等,仍将是干扰RNA成功应用于临床之前面对和必需克服的障碍。