噬菌体展示技术筛选HBV前-前-S抗原基因启动子结合蛋白基因

目的:筛选乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S抗原基因启动子的结合蛋白. 方法:应用噬菌体表面展示技术,以HBV前-前-S抗原基因启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行4轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选过程,经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,并对所筛选克隆进行DNA测序和生物信息学分析. 结果:噬菌体经富集后,从随机筛选的43个克隆中得到20 个与HBV前-前-S抗原基因启动子特异结合的阳性克隆, 包括人类SMG-1的磷脂酰肌醇3相关激酶激酶、28 S核糖体、单倍型As2A线粒体、组氨酰-tRNA合成酶、脂肪醛脱氢酶、桥粒相关蛋白、MAX相互作用蛋白1等17个已知功能基因及3个未知功能基因. 结论:用噬菌体人肝细胞cDNA文库筛选得到HBV前-前- S抗原基因启动子的结合蛋白基因,为进一步研究HBV发病机制创造了新的途径.     

酵母双杂交技术筛选HCV E1蛋白结合的肝细胞蛋白基因

目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与HCV E1蛋白结合蛋白的编码基因. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HCV E1基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序, 进行生物信息学分析. 结果:获得了19个与E1蛋白特异陛结合的阳性克隆,其中16个克隆为已知蛋白基因和3个克隆为未知功能蛋白基因. 结论:成功克隆出与丙型肝炎病毒E1蛋白结合的肝细胞蛋白,为进一步研究HCV E1在HCV致病中的作用提供了新线索.     

恩替卡韦治疗失败的慢性乙型肝炎患者耐药分析20例

目的: 检出恩替卡韦(ETV)治疗失败的慢性乙型肝炎(CHB)患者的耐药.方法: 收集ETV治疗失败的患者血清20份,根据应答情况分为非完全病毒学应答组和病毒学突破组.PCR产物直接测序法检测ETV耐药,NCBI HBV基因型分析软件确定HBV基因型.结果: 20例患者中,检出ETV耐药11例,其变异类型以rtM204V+rtL180M+rtT184L为主.非完全病毒学应答组6例患者中未检出ETV耐药,病毒学突破组14例患者中检出ETV耐药11例,二者之间有统计学差异( P = 0.0022).B基因型6例患者中检出ETV耐药3例,C基因型14例患者中检出ETV耐药8例,二者之间无统计学差异.结论: rtM204V+rtL180M+rtT184L变异类型在B和C基因型的ETV耐药患者中较为常见;ETV耐药多见于病毒学突破患者;ETV治疗失败患者的耐药检出率在B和C基因型中无显著差异.     

肝细胞cDNA文库中乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合蛋白基因筛选

目的:筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白相互作用蛋白的基因,探讨前-前- S在HBV致病中的作用. 方法:构建前-前-S的酵母细胞表达载体,采用酵母双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库,利用核苷酸数据库及生物信息学技术,对于筛选结果进行分析. 结果:获得了54个与前-前-S蛋白特异性结合的阳性克隆,其中包括30种已知蛋白基因和8个未知功能基因. 结论:克隆出与乙型肝炎病毒前-前-S蛋白结合的肝细胞蛋白基因,为进一步研究前-前-S在HBV致病中的作用奠定了基础.     

酵母双杂交系统的原理及应用

0 引言蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础。随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题。酵母双杂交(yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白。     

急性病毒性肝炎所致的暴发性肝衰竭

暴发性肝衰竭是一种严重的临床综合症.它可以由大块肝坏死所致,但也可以发生于各种原因所致的突然且严重的肝功能损害之后。Tygstrup(1981)报导,80%暴发性肝衰竭患者是由肝炎病     

乙肝病毒表面抗原基因启动子Ⅱ的结构及调节研究

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)为含有一段单股区的双链环状DNA病毒,属嗜肝DNA病毒科,其基因组结构紧密,可分为结构基因序列和调节基因序列两部分,二者可具有相互重叠的特点.HBV基因的负链核苷酸序列中,至少有4个开放读码框(open reading frame,ORF),包括编码外膜蛋白的S基因区,编码核衣壳蛋白的C基因区,编码聚合酶的P基因区和调节病毒基因转录水平的X基因区,4种ORF分别有各自的启动子.HBV的外膜蛋白能使病毒由感染的细胞分泌,并能附着和侵入新的细胞;同时其也是引起宿主保护性应答的免疫原表位[1-6].因此,作为指导S基因组RNA转录的SP启动子序列,在HBV的生活周期中,具有较为重要的作用.     

北京地区使用HBIG和乙型肝炎疫苗联合阻断母婴传播的效果观察

乙型肝炎病毒(HBV)的母婴传播国内、外已有不少报导,日本曾作调查HBsAg 阳性母亲所生婴儿有26%变为 HBs-Ag 携带者,母亲 HBsAg 滴度高合并 HBeAg阳性者,其婴儿HBV 感染率可高达88.2%～94.7%;北医人民医院肝病研究室也曾调查,母亲 HBsAg 滴度高、HBeAg 阳性及 DNAP 活性增高者,其婴儿100%在出