“病-方（效）-证”的研究实践与创新发展（二）——一贯煎治疗肝硬化的方证病理学基础探析

基于肝炎后肝硬化气虚血瘀的核心病机及肝肾阴虚、湿热内蕴的主要证候病机，采用不同功效中医古典方剂进行肝硬化多模型的疗效比较研究，明确滋肾养肝的一贯煎对肝细胞损伤为主的肝硬化模型有突出的作用。临床研究证实，一贯煎可显著改善失代偿期乙肝肝硬化肝肾阴虚为主证患者的Child-Pugh评分；深入研究表明，一贯煎治疗肝硬化主要机制在于改善肝实质细胞衰减，调控干细胞分化促进肝再生，改善肝组织缺氧状态，抑制肝窦内皮细胞损伤，血管新生以及改善炎症微环境等。基于“病-方（效）-证”相关理论，认为肝硬化肝肾阴虚证的关键病理学基础与肝实质细胞衰减、肝再生障碍、肝组织缺氧、肝窦内皮损伤和血管新生，以及与巨噬细胞为主的炎症微环境病变有关。提示着力加强方证病理生物学基础研究可能成为中医药治疗慢性难治性疾病的突破口。     

445例药物性肝损伤的临床分析

目的描述性分析药物性肝损伤(DILI)的临床特征。方法回顾性收集2012年1月-2016年12月在上海中医药大学附属曙光医院、上海中医药大学附属普陀医院、上海交通大学医学院附属同仁医院诊断为DILI的445例患者的病史、症状体征、检查结果、治疗与转归等临床资料,分析DILI的临床特征。计量资料以中位数和四分位数间距[M(P25~P75)]表示,组间比较采用Kruskal-Wallis H检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果 445例患者中,男136例(30.56%),女309例(69.44%),以40~69岁的人群居多。194例(43.6%)应用西药导致,140例(31.46%)应用中药导致,中西药联用者92例(20.67%),服用保健品者19例(4.27%)。引起肝损伤的中药主要有何首乌及其制剂、仙灵骨葆胶囊、癃闭舒胶囊等;导致肝损伤的西药主要有心血管用药、抗微生物用药、解热镇痛药、抗肿瘤用药、抗结核药等。临床症状主要有乏力、纳差、黄疸、恶心等,其中以乏力(65.17%)最常见。临床分型主要为肝细胞损伤型,占70.11%。不同分型之间的ALT、AST、ALP、TBil和INR峰值比较,差异均有统计学意义(t值分别153.584、97.366、27.781、24.177、6.236,P值均<0.05);中药导致肝损伤患者的ALT、AST及TBil峰值水平明显高于西药(P值均<0.05)。不同分型之间的肝损伤评分差异有统计学意义(χ~2=26.848,P<0.001)。98.65%的患者好转,中药与西药引起的肝损伤患者的预后没有明显差异(χ~2=3.663,P>0.05)。结论 DILI以女性及中老年多见;与西药相比,中药导致的肝损伤生化指标异常更明显;多数DILI患者预后良好。     

实验性肝纤维化血管新生评价方法的比较

目的 探索实验性肝纤维化血管新生的评价方法. 方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组和模型组,每组6只,以体积分数10％ CCl4橄榄油溶液腹腔注射4周制作肝纤维化模型.分别以MRI、CT、同步辐射X线二维成像及vWF免疫荧光染色方法在不同层面观察肝脏血管;HE及天狼猩红染色观察肝组织炎症及纤维化程度.两组比较采用t检验;MRI信号强度、CT值、微血管相对长度与微血管密度(MVD)的相关性采用Pearson相关分析. 结果 与正常组比较,模型组小鼠肝组织炎症和纤维化明显;MR示T2WI上两组增强前后信号强度均减低,且增强后两组之间信号强度差异有统计学意义(386.67±69.04对比492.67±112.50,t=-2.456,P=0.026);CT示模型组增强后肝脏CT值及增强前后差值均较正常组显著降低;同步辐射X线二维成像后,模型组纤维化肝脏血管纹理增多、紊乱,可见小血管数量较多;MR在T2W增强的信号值(439.67±104.80,Pearson相关系数为0.714,P=0.009)、微血管相对长度(676.53±122.75,Pearson相关系数为0.791,P=0.002)与vWF标记MVD (14.50±5.95)呈正相关,CT增强前后的差值(132.60±57.02,Pearson相关系数为-0.612,P=0.034)与MVD呈负相关.结论 采用纳米对比剂的MR、CT检测及同步辐射X线二维成像可用于纤维化血管新生的评价,与传统的MVD法具有相关性;其中同步辐射X线二维成像更直观、清晰,是评价肝血管新生的良好方法.     

内镜结扎联合中医辨证论治对肝硬化食管静脉曲张破裂出血的二级预防效果

目的 观察内镜下结扎联合中医辨证论治防治肝硬化食管静脉曲张破裂出血（EVB）二级预防的疗效。方法 选取2015年4月—2021年2月上海中医药大学附属曙光医院肝硬化科收治的行内镜下结扎治疗的EVB患者108例,对同时服用中药治疗的患者定义为中西医组（n=59）,对未服用中药治疗的患者定义西医组（n=49）。比较两组患者的再出血发生率、病死率以及门静脉高压性胃病的改善率等。计量资料符合正态分布者采用t检验;不符合正态分布者采用Mann-Whitney U秩和检验;计数资料2组间对比采用χ²检验或Fisher确切概率法;并采用Cox回归分析评估影响再出血的危险因素。结果 中西医组内镜结扎后13～24个月的再出血率显著低于西医组（2%vs 12%,P=0.045）;中西医组再出血病死率显著低于西医组（2%vs 12%,P=0.045）,且门静脉高压性胃病的总有效率显著高于西医组（90%vs 77%,P=0.04）。基础疾病（主要包括糖尿病、高血压、心脏病）及肝功能Child-Pugh分级是影响再出血的显著危险因素（P值均<0.05）。结论 内镜结扎联合中医辨证论治...     

黄芪汤组分抑制胆汁淤积性肝纤维化大鼠胆管上皮细胞增殖及其转分化的效应

目的 探讨胆管上皮细胞增殖及其转分化在肝纤维化形成过程中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应和机制.方法 30只SD雄性大鼠采用胆总管结扎制备胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术对照组仅对胆总管作分离,不结扎.胆管结扎术后l周随机分为模型对照组和药物干预组(经灌胃给予黄芪汤组分4周),5周后麻醉下处死大鼠,获取肝组织与血清标本.检测肝功能、肝组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织角蛋白-7(CK7)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共定位,Western blot检测CK7、α-SMA蛋白表达.计量资料比较采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析,计数资料采用Radit检验,CK7与α-SMA蛋白表达间关系采用直线回归与相关分析.结果 与假手术对照组比较,模型对照组大鼠病死率33.3%,腹水出现率90%,肝功能显著异常,肝组织肝细胞显著减少,胆管上皮细胞及纤维组织大量增生,肝组织Hyp含量、CK7及α-SMA蛋白表达显著增加(P值均<0.01),并有大量的CK7及α-SMA共定位阳性细胞表达.与模型对照组比较,药物干预组大鼠病死率、腹水出现率及脾脏质量均显著降低(P值均<0.05),肝功能显著改善,肝组织肝细胞减少及胆管上皮细胞与纤维增生程度轻,CK7与α-SMA共定位阳性细胞显著减少.药物干预组与模型对照组大鼠肝Hyp含量分别为(1026.8±132.47)μg/g和(887.4±95.56)μg/g,CK7表达量分别为0.812±0.298和0.318±0.143,α-SMA蛋白表达量分别为0.787±0.277和0.341±0.119,差异均有统计学意义(JD值均<0.01).结论 黄芪汤组分可有效抑制胆管结扎大鼠胆管上皮细胞增生及胆管上皮细胞向α-SMA阳性的肌成纤维细胞的转分化.     

矢志方治疗痰浊瘀阻型高尿酸血症肾病33例

目的观察活血通络、利湿祛痰的矢志方治疗高尿酸血症肾病的临床疗效。方法将66例痰浊瘀阻型高尿酸血症肾病患者随机分为治疗组和对照组（各33例）,治疗组口服中药矢志方治疗,对照组口服别嘌醇片治疗。两组疗程均为8周。观察两组临床疗效及血尿酸、血肌酐、24h尿蛋白定量、血红蛋白等变化情况。结果治疗组、对照组总有效率分别为84．75％、66．67％,治疗组疗效优于对照组（P〈0．05）;治疗后两组血尿酸均明显下降（P〈0．05）,组间比较无显著差异（P〉0．05）;治疗组24h尿蛋白定量、血肌酐和血红蛋白均明显改善,且优于对照组（P〈0．05）;而对照组仅血尿酸、血红蛋白水平较治疗前明显改善（P〈0．05）,其他指标变化无统计学意义（P〉0．05）。结论矢志方对高尿酸血症肾病有确切治疗作用。     

基于脾虚证相关基因功能鉴定的小肠上皮细胞RNA干扰转染条件研究

[目的]探索影响大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)RNA干扰效率的转染条件,为进一步以RNA干扰(RNAi)技术构建不同程度表达靶蛋白的细胞模型打下基础.[方法]以24孔培养板培养IEC-6细胞,利用阳离子脂质体转染FAM-siRNA片段进入IEC-6细胞,采用荧光显微镜和流式细胞仪检测FAM-siRNA和转染试剂Lipofectamine 2000不同剂量比例对转染效率的影响.[结果](1)采用荧光显微镜检测转染效率,以评分进行秩和检验,结果仅有转染试剂或仅有FAM-siRNA或两者均无的组别评分均为0,转染试剂加FAM-siRNA组别均有或强或弱的荧光表达.(2)采用流式细胞仪检测转染效率,以Lipofectamine 2000 1.0μL+FAM-siRNA 160 nmol/L组转染效率最高(平均76.3%),而空白对照组约为1%. [结论]FAM-siRNA 160 nmoL/L(20 μmoL/L、4.8μL,终体积为0.6 mL)+Lipofectamine 2000 1.0μL组合为IEC-6细胞RNA干扰时转染效率最高的转染条件.     

抗纤灵冲剂干预单侧输尿管梗阻模型大鼠血清胱抑素C改变的实验研究

目的观察抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻模型大鼠血清胱抑素C的影响。方法将72只SPF级SD大鼠随机分为正常组、假手术组、UUO模型组、UUO抗纤灵组。行单侧输尿管结扎术,治疗7、14、21、28d后分批腹主动脉取血检测血清胱抑素C的浓度。结果模型组大鼠血清胱抑素C显著升高,与正常组及(或)假手术组比较有统计学意义(P<0.01);抗纤灵组、科素亚组血清胱抑素C明显下降,与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。结论抗纤灵冲剂具有和科素亚同样的保护肾功能,减轻肾间质纤维化的作用。     

抗纤灵抗大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的探讨中药复方抗纤灵治疗大鼠单侧输尿管结扎（unilateral ureteral obstruction,UUO）所致肾纤维化的作用及机理。方法雄性SD大鼠18只随机分为3组,每组6只。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗2周后检测血肌酐、尿素氮含量等指标;HE染色和六胺银染色观察肾组织病变;采用RT-PCR和Western印迹分别检测转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）mRNA和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1受体（TβRⅠ及TβRⅡ）及肝细胞生长因子受体（C-Met）蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;肾小球毛细血管基底膜明显增厚;肾组织TGF-β1 mRNA及α-SMA、TβRI、TβRⅡ、C-Met蛋白袁达显著上调,而HGF mRNA水平显著下调。中药干预后,血尿素氮含量显著降低,肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚;肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达明显减少,HGF mRNA水平明显上调。结论抗纤灵可抑制肾组织α-SMA、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达并增加肾纤维化保护性因子HGF mRNA的表达,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化及肾功能。     

软骨利胶囊对骨关节炎小鼠股四头肌收缩蛋白mRNA表达的影响

背景：骨关节炎的病理改变涉及多种关节构成组织,其中骨骼肌的地位日渐引起研究者关注。 目的：通过观察骨关节炎C57小鼠骨骼肌收缩蛋白α-肌动蛋白与肌球蛋白重链基因表达状况,探讨柔肝中药软骨制剂利胶囊对收缩蛋白基因表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2004-09/2007-01在上海市中医药研究院骨伤科研究所完成。 材料：选取7周龄清洁级C57小鼠18只,雌雄各半,体质量(20±5) g。软骨利胶囊(柔肝中药制剂),由上海中医药大学中药标准化中心提供。 方法：18只C57小鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、软骨利组,每组6只。除正常组外,对小鼠进行运动负荷训练造模。软骨利组给予0.2 mL软骨利溶液(约含2 mg软骨利)灌胃5周,正常对照组和模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃5周。 主要观察指标：应用反转录-聚合酶链反应检测股四头肌肌α-actin、肌球蛋白重链4种亚型(Ⅰ,Ⅱa,Ⅱd/x,Ⅱb)mRNA表达水平。 结果：与空白组比较,模型组α-actin mRNA显著低表达(P < 0.05),肌球蛋白重链Ⅱa,肌球蛋白重链Ⅱd/x mRNA 低表达(P < 0.05)。与模型组比较,软骨利干预组α-actin与多种肌球蛋白重链亚型mRNA表达水平上调(P < 0.05)。 结论：柔肝中药制剂软骨利能够促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,提示其可改善骨关节炎动物骨骼肌肌力。