缺氧调节肺腺癌小鼠MDSCs来源外泌体携带的miRNA及其免疫抑制功能

目的 观察正常(21%O₂)和缺氧(1%O₂)条件下,髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)来源外泌体(exosomes derived from MDSCs, MDSCs-EX)的免疫抑制功能,探究缺氧对MDSCs-EX携带miRNA成分以及免疫抑制能力的影响。方法 构建肺腺癌小鼠移植瘤模型,磁珠分选脾脏中的MDSCs,分别在21%O₂和1%O₂条件下培养MDSCs,提取上清中的外泌体。通过透射电子显微镜观察形态、流式检测颗粒直径、Western bolt检测特异性蛋白鉴定制备的外泌体。观察正常和缺氧条件下MDSCs-EX对CD3⁺T细胞增殖的影响。对正常和缺氧条件下MDSCs-EX进行miRNA测序分析,观察2者在miRNA表达上的差异,将差异表达前十位的miRNA作为待筛选miRNA。运用siRNA特异性敲减待筛选miRNA,观察缺氧条件下MDSCs-EX携带的miRNA对其免疫抑制功能的影响。结果 成功分选出肺腺...     

HPLC法同时测定小鼠血浆中3种银杏酸单体的浓度

目的: 建立小鼠血浆中银杏酸（ginkgolic acid,GA) 3种主要单体GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法: 以制备的GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1单体为标准品,采用外标法建立标准曲线。采用乙腈预处理样品以沉淀其中蛋白质。采用SinoChrom ODS AP C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm),甲醇-3%醋酸(92∶8)为流动相,流速1.0 mL· min^-1,检测波长为310 nm。结果： GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1标准曲线分别在0.135～20μg·mL^-1,0.129 ～20μg·mL^-1和0.211～22μg·mL^-1范围内线性关系良好（r均＞0.999 0）;回收率均＞70.2% (n=5),测定准确度为95.2%~101.5%;日内相对标准偏差≤6.2%,日间相对标准偏差≤9.5%。结论：成功建立测定GA 13∶0,GA 15∶1和GA 17∶1单体的HPLC方法,其灵敏度高,重现性、精密度和准确性好。