健腰密骨片对成骨细胞增殖分化和BMP信号通路报导基因活性的影响

目的:探讨健腰密骨片对成骨细胞的影响及作用机制。方法:常规培养转染12×SBE-OC-Luc报导基因的成骨细胞株OCT-1细胞(以下简称12×SBE-OC-Luc-OCT1细胞),采用健腰密骨片含药血清进行干预48 h,并以骨形态发生蛋白(BMP)2纯化蛋白(50 ng/ml)为阳性对照。用MTT法检测成骨细胞增殖率,实时荧光定量RT-PCR法检测成骨细胞中Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen)、骨钙素(osteocalcin)和BMP2mRNA的表达以及荧光素酶活性检测法检测成骨细胞12×SBE-OC-Luc的活性。结果:与正常对照组比较,健腰密骨片能明显促进成骨细胞的增殖(P0.05);显著增加成骨细胞中typeⅠcollagen、osteocalcin和BMP2的mRNA表达量(P0.05);能明显促进成骨细胞中BMP报导基因12×SBE-OC-Luc的荧光素酶活性(P0.05)。结论:健腰密骨片可通过促进BMP2、typeⅠcollagen和osteocalcin的表达及BMP信号通路报导基因12×SBE-OC-Luc的活性,从而促进成骨细胞的增殖与分化。     

复方芪麝片对双前肢去势大鼠直立模型退变椎间盘的影响

目的：研究复方复方芪麝片对双前肢去势大鼠直立模型退变椎间盘形态及细胞外基质的影响。方法：1月龄SD大鼠双前肢90只（雌雄各半），随机分为模型组、复方芪麝片组、空白对照组，每组30只（雌雄各半），分别在术后4、6、8月随机提取10只复方芪麝片组大鼠进行灌胃给药一个月，并于术后5、7、9月处死三组大鼠，取下腰部椎间盘，并进行藏红和天狼猩红形态学染色、免疫组化分析以及实时定量Realtime．PCR检测。结果：形态学藏红染色显示复方芪麝片增加椎间盘高度，防止纤维环撕裂和板层紊乱情况，增加软骨终板非钙化层胶原基质，防止其排列紊乱；免疫组化染色见到，复方芪麝片可以明显增加椎间盘髓核细胞外基质中Ⅱ型胶原的蛋白表达，降低软骨终板x型胶原表达；实时定量Realtime．PCR分析发现复方芪麝片在各时间点可以均显著增加Col2almRNA的表达，在术后7月和9月降低Colloal，MMP3，MMP13和IL．1betamRNA表达。结论：本研究证实复方芪麝片可以改善直立造成的腰椎间盘的退变情况。     

DOT1L对骨肉瘤MG63细胞生物学行为的影响及其作用机制

目的 探讨抑制组蛋白H3赖氨酸79（H3K79）甲基转移酶DOT1L基因对骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、DNA损伤的影响及可能的作用机制。方法将hDOT1L-shRNA质粒转染至骨肉瘤MG63细胞（hDOT1L-shRNA组）,同时设置shRNA阴性对照组（Scramble组）。采用实时荧光定量PCR检测DOT1L mRNA的表达水平,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,TUNEL法和彗星实验检测细胞DNA损伤。Western blot检测MG63细胞中DOT1L、H3K79me2、Histone H3、Sirt1、XPA蛋白的表达水平。结果转染后,与Scramble组相比,hDOT1L-shRNA组MG63细胞中DOT1L mRNA及蛋白表达水平下调（P<0.05）,细胞增殖能力降低（P<0.05）,细胞迁移率降低（P<0.05）,DNA损伤程度加剧（P<0.05）。Western blot检测结果显示,与Scramble组相比,hDOT1L-shRNA组MG63细胞中细胞Histone H3总量差异无统计学意义(P>0.05),其他DOT1L、H3K79me2、Sirt1、XPA蛋白表达水平均降低。结论DOT1L可能通过DOT1L/H3K79me2-SIRT1-XPA信号通路抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移并诱导其DNA损伤。     

癌症放化疗等治疗引起骨量丢失的研究现状

国际癌症研究机构2012年发布的癌症状况报告指出,全球每年新增癌症病例为1400万,而且这数字在持续增加。虽然美国等发达国家的癌症患病率呈下降趋势（AACRCancerProgressReport,2013）,但是并发症已经成为重要的死亡原因[1]。