桂附地黄丸中多糖指纹图谱的建立

目的 以桂附地黄丸中多糖为研究对象,初步探索中药多糖质量控制的新方法.方法 对桂附地黄丸多糖部位进行控制条件下的部分水解,HPLC检测水解产物,得到指纹图谱.以中药指纹图谱评价软件和Microsoft Excel 2002图表处理图谱信息.结果 在不同来源共10个批号的桂附地黄丸多糖部位指纹图谱中,8个批号的峰面积相似度>0.99,2个批号相似性分别为0.92和0.94.结论 初步确定可采用"多糖水解-HPLC指纹图谱"的方法对桂附地黄丸中的多糖进行质量控制.     

防风中1个新多糖的结构及免疫调节活性研究

目的 对防风Saposhnikovia divaricata中分离得到均一多糖的结构及其免疫调节活性进行研究。方法 采用DEAE-纤维素、Sephadex G-75等柱色谱法,对防风多糖进行系统分离纯化,采用ESI-MSⁿ、GC-MS、NMR等谱学技术,对分离得到的防风多糖SP800203的相对分子质量分布、单糖组成、寡糖片段、糖残基类型和糖苷键连接方式等进行分析,确定其结构。采用细胞实验和斑马鱼实验,研究防风多糖SP800203的免疫调节活性。结果 从防风中分离得到防风多糖SP800203,糖醛酸质量分数为75.73%,相对分子质量约为7.14×10⁴,由鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸组成,单糖物质的量比为2.8∶6.7∶6∶84.5。主链由半乳糖醛酸聚合而成,2条支链分别由阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖、鼠李糖,以及阿拉伯糖、半乳糖醛酸、半乳糖聚合而成,二者分别通过β、α糖苷键与主链相连。防风多糖SP800203可以促进巨噬细胞一氧化氮、肿瘤坏死因子-α、白介素-1β和白介素-6的释放,增加斑马鱼的免疫细胞密度和巨噬细胞数量。结论 防风多糖SP800203为从防风中分离得到的新的均一多糖,具有良好的免疫调节活性;研究结果为阐明防风免疫调节作用机制奠定了基础,为防风临床应用及进一步研究与开发提供科学依据。     

蝙蝠草多糖的提取和分离及其活性测定

目的提取和分离纯化蝙蝠草多糖,并进行结构分析与活性测定。方法对蝙蝠草多糖进行提取和分离纯化,得到均一组分蝙蝠草多糖02-2(christia vespertilionis polysaccharides 02-2,CP 02-2)。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH]自由基清除、小鼠巨噬细胞增殖、吞噬能力和产生NO等试验方法对CP 02-2的活性进行研究。结果 CP 02-2对浓度0.1 mmol·L~(-1)DPPH溶液的自由基清除率为28.99%,对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖、吞噬能力和产生NO的能力均具有促进作用,与空白对照组有显著性差异(P<0.01),且当质量浓度为1 500 mg·L~(-1)时,活性最大。结论蝙蝠草多糖CP 02-2具有一定的药理活性。     

基于“药辅合一”制备紫黄乳膏及其对大鼠Ⅱ度烫伤的修复作用

目的基于“药辅合一”制备紫黄乳膏,研究其对大鼠Ⅱ度烫伤的修复作用,并探讨主要作用机制。方法优化紫黄乳膏的制备工艺,建立大鼠浅、深Ⅱ度皮肤烫伤模型,计算烫伤面积、愈合率、组织含水量并做皮肤组织病理观察,测定表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果紫黄乳膏最优基质配比为硬脂酸1.1 g、单硬脂酸甘油脂0.3 g、尼泊金乙酯0.02 g、麻油0.7 g、促透剂0.5 ml、十二烷基硫酸钠0.2 g、甘油0.5 g,去离子水5 ml。药效实验中,与模型组相比,紫黄乳膏组烫伤面愈合显著(P<0.05),炎细胞明显减少、胶原纤维明显增多、肉芽组织增生明显,EGF、bFGF在各烫伤面皮肤全层组织中表达均有显著性增加(P<0.05)。结论基于“药辅合一”筛选所得紫黄乳膏合理稳定,生产工艺简便,可缩短烫伤面愈合时间,对烫伤修复有积极的治疗作用,其促进烫伤面愈合的机理可能与烫伤面组织中的EGF、bFGF有关。     

槐耳蛋白聚糖TPG-1抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长的机制

目的:蛋白聚糖TPG-1具有良好的抗肝癌活性,本研究进一步探究蛋白聚糖TPG-1抗肝癌的分子作用机制。方法:用槐耳蛋白聚糖TPG-1(0,0.05,0.1,0.25,0.5,1 g·L^-1)处理人肝癌SK-HEP-1细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测槐耳蛋白聚糖TPG-1对SK-HEP-1细胞增殖的影响,采用流式细胞术检测TPG-1对SK-HEP-1细胞凋亡的影响。对经TPG-1处理过的人肝癌SK-HEP-1细胞进行基因芯片检测分析,探讨TPG-1抗肝癌的分子作用机制。结果:与空白组比较,槐耳蛋白聚糖TPG-1能够显著抑制人肝癌SK-HEP-1细胞的增殖能力(P<0.01)。TPG-1(1 g·L^-1)作用于SK-HEP-1细胞48 h,SK-HEP-1细胞凋亡率显著增加(P<0.01),且TPG-1给药能够显著促进细胞凋亡重要执行者含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3和Caspase-7的剪切水平(P<0.01)。与空白组比较,TPG-1(0.1 g·L^-1)能够抑制SK-HEP-1细胞的迁移能力(P<0.05)。基因芯片检测分析结果显示,TPG-1处理后,SK-HEP-1细胞中差异表达基因有971个,其中表达上调基因486个,表达下调基因485个。基因本体(GO)和通路(Pathway)分析结果显示表达差异基因的功能主要涉及白细胞介素-6(IL-6)生物合成、抗原加工与呈递、超氧化物歧化酶活性、丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)级联反应的正调控、自然杀伤(NK)细胞趋化、趋化因子生物合成等。此外,表达差异基因所涉及的信号通路主要包括核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体信号通路,凋亡,Toll样受体信号通路,维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体信号通路,T细胞受体信号通路及趋化因子信号通路等。蛋白免疫印迹法结果显示,TPG-1(1 g·L^-1)能够显著激活SK-HEP-1细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路(P<0.01)。结论:槐耳蛋白聚糖TPG-1能够抑制人肝癌SK-HEP-1细胞增殖及迁移能力并促进其发生凋亡,MAPK信号通路的激活可能与TPG-1发挥抑制人肝癌SK-HEP-1细胞生长作用有关。     

高速逆流色谱法提取分离天然产物中生物碱的应用

生物碱类化合物在植物中广泛存在，具有一系列药理活性，并已被广泛用于治疗各种疾病。由于生物碱通常存在于多组分混合物中且含量较低，较难通过传统方法进行提取分离。高速逆流色谱法是一种不存在固态支撑相的液-液色谱技术，具有进样量大、成本低、不存在不可逆吸附等优势。相比于传统的生物碱提取分离方法，高速逆流色谱法可选的溶剂体系和洗脱模式可以保证一次性分离多种不同极性生物碱，可实现生物碱类化合物的高回收及大量制备。该研究通过借鉴相关文献，讨论了高速逆流色谱(HSCCC)相比于传统分离手段的优缺点，并对近年来采用高速逆流色谱法分离生物碱类化合物所用的溶剂系统和洗脱模式进行了总结，旨在为生物碱类化合物的高速逆流色谱分离提供一些参考。