伤害性感受器可塑性在慢性疼痛中的研究进展

伤害性感受器可塑性变化是急性疼痛向慢性疼痛转变的关键。急性疼痛处置不当或损伤性因素持续性存在,会导致伤害性感受器持续性可塑性的改变,出现外周敏化和中枢敏化,表现为自发性疼痛、痛觉过敏和痛觉超敏。此时,轻微的刺激甚至是阈下刺激就能发生更强烈、更持久的痛觉过敏,该现象称为"痛觉过敏引发"。在慢性疼痛的产生和发展过程中,痛觉过敏引发的伤害性感受器可塑性改变发挥着重要的作用,是疼痛外周敏化的重要机制之一。     

双调蛋白对大鼠局灶性脑缺血-再灌注的影响

目的观察双调蛋白(Areg)经侧脑室注射对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(I/R)损伤的影响,并探讨其可能机制。方法取3个月龄健康雄性清洁级SD大鼠共96只,采用随机数字表法分为6组,每组16只。假手术组:只暴露颈总动脉及分叉处;I/R组:制作I/R模型;溶剂对照组:侧脑室注射标准蛋白质溶液(5μl);Areg组:侧脑室注射Areg(2μg/5μl);AG1478组[AG1478,Areg的受体表皮生长因子受体(EGFR)的阻断剂]:侧脑室注射AG1478(2.5μg/5μl);Areg复合AG1478(AAG)组:侧脑室给予AG1478(2.5μg/5μl),30 min后,再给予Areg(2μg/5μl)。上述后4组在给药30 min后制备局灶性脑I/R损伤模型。再灌注24 h后,比较各组之间脑梗死体积、神经行为学评分及脑组织凋亡细胞数量变化;再灌注6 h后检测缺血脑组织内EGFR及蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果与假手术组比较,I/R组的脑梗死体积、脑组织凋亡细胞数量明显增加,神经行为学评分降低(均P0.05)。与I/R组比较,Areg组的脑梗死体积、脑组织凋亡细胞数显著降低,神经行为学评分明显增加,EGFR和Akt的磷酸化水平明显增高(均P0.05)。与I/R组比较,AG1478组的脑梗死体积、细胞凋亡数量增加,EGFR和Akt的磷酸化水平降低(均P0.05);与Areg组比较,AG1478组和AAG组的脑梗死体积、细胞凋亡数明显增加,EGFR和Akt的磷酸化水平、神经行为学评分明显降低(均P0.05)。结论 Areg通过激活EGFR-Akt信号通路减少缺血脑组织的梗死体积、改善神经功能、抑制细胞凋亡,对I/R脑损伤具有一定的保护作用。     

新型组织工程化改性胶原-壳聚糖复合支架制备与神经细胞的相容性北大核心

背景:周围神经缺损的治疗在再生医学领域仍然具有挑战性,支架材料的应用被认为是有前途的探索方向之一,理想的支架材料应是安全、耐用和缺乏抗原性的。目的:探讨制备一种新型的组织工程化改性胶原-壳聚糖支架,并探索其在大鼠横断坐骨神经模型中用作桥梁修复神经损伤的可能。方法:先制备出胶原-壳聚糖复合支架,然后用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺,N-羟基琥珀酰亚胺对支架进行化学改性即交联。接着将神经干细胞种植于支架上,之后连同支架-种子细胞在体内植入坐骨神经缺损部位。结果与结论:制得的变性交联胶原-壳聚糖复合支架具有三维立体网状结构。将支架-种子细胞移植4周后,可在损伤的坐骨神经中发现S-100神经丝蛋白200表达。结果表明这种组织工程化改性交联胶原-壳聚糖复合支架具有良好的细胞相容性。     

七氟醚暴露致新生大鼠未成熟脑损伤的研究

目的探讨七氟醚早期暴露对新生大鼠脑发育的影响。方法选取新生6日龄SD大鼠80只,随机分为四组,每组20只,分别为空白对照组(C组),1%七氟醚暴露2 h组(Sev1组),2%七氟醚暴露2 h组(Sev2组),4%七氟醚暴露2 h组(Sev3组);七氟醚暴露组分别置于1%、2%、4%七氟醚中每天暴露2 h,连续3 d;出生后第9天采用0.5%戊巴比妥钠麻醉后处死新生大鼠取出脑组织;采用电子天平秤检测各组大鼠在出生后6、9、15、28 d体重和脑重的变化;采用荧光定量PCR法(RT-PCR)检测Cx30、IL-6及BDNF基因mRNA表达量;采用免疫荧光法检测GFP蛋白含量;出生后28 d Morris水迷宫评价新生大鼠学习记忆能力。结果与C组比较,Sev1、Sev2和Sev3组新生大鼠体质量和脑质量均有所减轻,且随着日期延长这种减轻更为明显,Cx30 mRNA和BDNF mRNA表达量明显降低,IL-6mRNA表达量明显升高(P0.05),GFP细胞数量明显减少(P0.05);与Sev1组比较,Sev2和Sev3组新生大鼠体质量和脑质量均明显减轻,GFP数量明显减少(P0.05);与C组比较,Sev1、Sev2和Sev3组逃避潜伏期和游动距离均明显延长(P0.05),目标象限停留时间明显缩短(P0.05),穿越虚拟平台次数明显减少(P0.05)。结论新生大鼠接受七氟醚暴露可致未成熟脑损伤及远期学习记忆能力下降,且这种脑损伤程度与七氟醚浓度呈正相关;其机制可能与其脑内Cx30、BDNF基因表达水平改变有关。     

不同浓度瑞芬太尼对新生大鼠海马区神经干细胞内钙浓度及细胞凋亡的影响

目的：探讨不同浓度瑞芬太尼对新生大鼠海马区神经干细胞凋亡及细胞内钙浓度的影响。方法：采用已建立的新生SD大鼠海马区神经干细胞单细胞克隆系细胞株，将5×105个/ml活细胞的密度均匀地接种到的12孔培养板中，每孔加入1ml含有10%胎牛血清的DMEM/F12的培养基，放入温度37℃、5%浓度CO2培养箱中孵育24小时，镜下观察细胞球贴壁后，每孔分别加入生理盐水或不同浓度的瑞芬太尼（R），分为以下4组：（1）对照组，每孔加入生理盐水；（2）低浓度组，每孔加入瑞芬太尼5ng/ml，即R5组；（3）中浓度组，每孔加入瑞芬太尼10ng/ml，即R10组；（4）高浓度组，每孔加入瑞芬太尼20ng/ml，即R20组。每组重复4次。加药后培养300s、600s、900s用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）检测各组神经干细胞内游离钙浓度的动态变化，24h后流式细胞仪检测各组神经干细胞的凋亡情况。结果：(1)各组细胞内钙浓度变化情况：与对照组比较，R5组细胞内钙浓度无明显差异(P>0.05)；R10、R20组细胞内钙浓度明显升高(其中R10组P<0.05 ，R20组P<0.01)。(2)各组神经干细胞凋亡变化情况：与对照组比较，R5组神经干细胞凋亡无明显差异(P>0.05)；R10、R20组神经干细胞凋亡明显升高(其中R10组P<0.05 ，R20组P<0.01)。结论：低浓度的临床有效血药浓度的瑞芬太尼对新生大鼠海马区神经干细胞内钙浓度、细胞凋亡没有影响，中高浓度的临床有效血药浓度的瑞芬太尼应用使细胞内钙浓度显著升高，从而诱发细胞大量凋亡。     

双调蛋白对小鼠呼吸机相关性肺损伤的保护作用及机制研究

目的 研究上皮生长因子双调蛋白(Amphiregulin,Areg)对呼吸机相关性肺损伤(ventilator-associated lung injury,VALI)肺组织的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将C57BL/6小鼠根据随机数字表法随机分为8组: ①对照组(Control组),每只腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS) 200 μL,维持正常呼吸;②Areg组,腹腔注射重组小鼠Areg蛋白(rmAreg),维持正常呼吸;③PBS+VALI组,腹腔注射PBS,30min后行机械通气;④Areg+VALI组,腹腔注射rmAreg,30 min后行机械通气;⑤DMSO+VALI组;⑥DMSO+Areg+VALI组,每只腹腔注射二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)100 μL,30 min后腹腔注射PBS或rmAreg,再经30 min后行机械通气;⑦AG1478+Areg+VALI组与⑧Perifosine+Areg+VALI组,每只腹腔注射AG1478 1 mg或Perifosine 1 mg,30 min后腹腔注射rmAreg,再经30 min后行机械通气。 小鼠通过大潮气量机械通气(潮气量12 mL/kg,频率90次/分,通气4 h)制作VALI模型。机械通气24 h后行肺组织HE染色并观察病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)、肿瘤坏死因子α-(Tumor necrosis factor,TNF-α)与白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的浓度;机械通气6 h后检测肺组织中上皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)与蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果 与0 h组[(62.0±19.4) pg/mL]相比,VALI小鼠在机械通气结束3、6、12、24 h后BALF中的Areg浓度有明显升高,其中在6 h升高最为显著[(231.8±58.7) pg/mL]。与Control组相比,PBS+VALI组小鼠的肺组织肺泡壁增厚,炎症反应显著增加,而在Areg+VALI组中这些病理损伤均有明显减轻。与Control组相比,PBS+VALI组小鼠BALF中总蛋白、IgM、TNF-α与IL-6均有显著升高,而相较于PBS+VALI组,Areg+VALI组中这些指标有明显降低。rmAreg显著提高了VALI小鼠肺组织中EGFR与AKT的磷酸化水平。AG1478与Perifosine均明显抑制了rmAreg对VALI肺组织的作用效果。结论 小鼠发生VALI后肺组织中Areg的表达量显著增加。Areg通过EGFR-AKT信号通路减轻肺组织病理学变化、渗透性与炎症反应,因此在VALI中具有明显的保护作用。