乌帕替尼对氧糖剥夺/复氧后BV2细胞极化的影响

目的 研究乌帕替尼对氧糖剥夺再复氧(OGD/R)后BV2小胶质细胞极化及炎症的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分对照组、OGD组和乌帕替尼组3组.BV2细胞经OGD/R处理后,噻唑蓝试剂(MTT)检测细胞生存率,划痕实验观察细胞迁移能力,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测BV2细胞M1型极化标志物(CD1...     

巨噬源性泡沫细胞中p62蛋白上调作用和机制的研究

目的 探讨巨噬源性泡沫细胞中p62蛋白对脂质代谢相关的自噬以及炎症因子表达的影响,为p62在抗动脉粥样硬化中的应用提供参考。方法 利用Ox-LDL刺激RAW264.7细胞的方法模拟巨噬源性泡沫细胞的形成,通过Western blot及实时荧光定量PCR检测巨噬源性泡沫细胞中p62蛋白和mRNA水平。通过Western blot比较p62 siRNA组和对照组中Ox-LDL诱导的LC3剪切、脂滴相关蛋白Plin2和过氧化物酶体相关蛋白PEX2的蛋白水平,通过实时荧光定量PCR比较TNFα和IL-6 mRNA表达水平。结果 Ox-LDL对RAW264.7细胞中p62蛋白以及mRNA水平均有上调作用。干扰p62的表达之后,LC3-Ⅱ蛋白水平降低,Plin2的蛋白水平并无明显变化,PEX2的蛋白水平升高,TNFα和IL-6 mRNA表达升高。进一步研究发现,干扰Nrf2后能明显抑制Ox-LDL对p62的上调作用。结论 巨噬源性泡沫细胞中Ox-LDL通过Nrf2介导p62蛋白的上调,p62可能具有抗动脉粥样硬化的作用。     

利用CRISPR/Cas9系统建立叉头框G1基因敲除的人胚胎干细胞系

目的 采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9（CRISPR/Cas9）基因编辑技术构建叉头框G1（FOXG1）基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个向导RNA（gRNA）诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除,经单克隆筛选、测序分析和蛋白质印迹分析验证获得FOXG1基因敲除的人胚胎干细胞;通过细胞免疫荧光染色、qRT-PCR检测FOXG1基因敲除前后细胞在早期神经诱导过程中关键标志物配对框基因6（PAX6）、性别决定区Y框蛋白2（SOX2）和正小齿同源物2（OTX2）的表达。结果 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得FOXG1基因大片段缺失的人胚胎干细胞,细胞免疫荧光染色、qRT-PCR结果均显示人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的关键标志物PAX6、SOX2和OTX2的表达并未受FOXG1缺失的影响。结论 通过2个gRNA共转染可以快捷地诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除。FOXG1基因缺失并不影响人胚胎干细胞的早期神经诱导。     

小鼠心梗模型的建立与早期心电图评价

目的 构建并优化小鼠心肌梗死模型,联合使用冠脉结扎术后即刻和术后4 h的两次肢体导联心电图对心梗发生情况进行早期评价。方法 C57BL/6J雄性小鼠29只,异氟烷吸入麻醉后,经左侧第3/4肋间进入胸腔,结扎冠状动脉左前降支建立模型,施行术后即刻和术后4 h肢体导联心电图评价心梗发生情况。术后24 h打开胸腔观察梗死情况,留取心脏标本进行TTC染色确定梗死区域并计算梗死面积。结果 小鼠行冠状动脉结扎术,术中死亡率为6.8%(2/29),术后早期(<4 h)死亡率为10.3%(3/29),24 h存活率为82.8%(24/29);术后24 h TTC染色明确梗死发生,则心梗模型建立,造模成功率为79.3%(23/29),平均梗死区域大小（梗死心肌重量/全心室重量）为（28±6）%;成功建立模型的小鼠在术后4 h心电图可见明显ST-T改变,提示心梗已发生。结论 成功建立小鼠心肌梗死模型,且联合使用术后即刻和术后4 h两次心电图可以作为小鼠心肌梗死模型快速无创的评价方法。     

D-半乳糖致认知障碍整体及离体模型的建立和评估

目的 通过构建D-半乳糖［D-（+）galactose,D-gal］致认知障碍的整体及离体模型,并检测两种模型的相关指标,探索两种模型的建立方法,并评估联合应用D-gal整体及离体模型的应用价值和前景。方法 采用连续腹腔注射D-gal生理盐水溶液8周制备D-gal致认知障碍整体动物模型,并采用Morris水迷宫评价小鼠的学习和记忆功能,之后检测脑组织中相关的分子指标评估模型效果;采用外源性给予体外培养的幼鼠海马区神经元细胞D-gal制备D-gal细胞模型,并检测细胞损伤的相关分子指标,评估离体模型效果和应用价值。结果 在D-gal模型下的Morris水迷宫实验结果显示,模型组动物的学习和记忆功能显著低于对照组动物,与此同时,模型组动物的神经元凋亡和氧化应激水平明显高于对照组动物;D-gal海马区神经元细胞模型中显示,随着D-gal剂量的增加,神经元细胞出现功能和形态学改变,其凋亡和氧化应激水平明显高于对照组神经元细胞。结论 D-gal致认知障碍整体模型及在离体状态下给予海马区神经元细胞D-gal均可以诱发细胞凋亡和氧化应激损伤,并导致动物学习和记忆功能下降;联合应用D-gal致认知障碍整体及离体模型可以成为今后研究认知障碍机制和药效学评价的有效模型之一。     

肥胖2型糖尿病药物研究进展

肥胖与糖尿病发病率密切相关，是糖尿病发病率上升的重要原因。如今上市的大部分降糖药物如胰岛素及其类似物、胰岛素促泌剂、胰岛素增敏剂等都会不同程度的增加患者体重，从而加重胰岛素抵抗，增加降糖药物剂量，形成恶性循环，降糖兼具减肥是当今糖尿病新药研发重要趋势。本文概述了肥胖2型糖尿病的流行病学以及目前上市的降糖药物对体重发展的影响，并重点概述了兼具减肥效应的降糖药物的最新靶点，为肥胖2型糖尿病患者的治疗提供潜在新方法。     

基于16S rDNA测序研究新西兰兔腹腔镜探查术后腹腔微生物群落多态性改变

目的 利用细菌16S核糖体DNA（16S rDNA）测序技术,研究使用便携式腹腔镜进行腹腔探查术后腹腔中微生物群落多态性的变化情况。方法 将新西兰兔分为模型组及对照组。模型组兔使用便携式腹腔镜进行探查手术,对照组兔不做任何处理。一周后,取模型组和对照组的腹腔积液,进行16S rDNA测序,分析微生物群落多态性,探究腹腔积液的微生物群落变化情况。结果 针对测序结果,采用生物信息学和组间差异分析,发现两组的微生物群落相似度良好。OTU分类学分析及物种组成成分分析（丰度-均匀度曲线和Venn图）发现,模型组相对于对照组,在微生物群落水平上有显著升高。α多样性分析（Sobs、Ace、Shannon、Simpson）显示,模型组在微生物群落丰富度和多样性方面均高于对照组。微生物组成成份分析显示,模型组较对照组杂菌数量占比增加约30%。对两组样本物种差异进行显著性检验,发现巴斯德菌、奈瑟菌、冢村菌的比例有显著升高。结论 新西兰兔在腹腔镜行腹腔探查术后,腹腔积液中微生物群落数量上升,且以 巴斯德菌、奈瑟菌、冢村菌升高最为明显。     

炎症小体介导的细胞焦亡在非酒精性脂肪肝病中的作用及机制

非酒精性脂肪肝病包含单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪肝炎和肝硬化等一系列病变,是造成肝硬化、肝细胞癌症的主要因素和肝脏器官移植的重要诱因。非酒精性脂肪肝的发病机制尚不明确,除了加强运动、改善饮食习惯外,目前尚无公认有效的药物治疗方式。细胞焦亡是一种新发现的程序性细胞死亡方式,依赖于天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）或caspase-11等介导的炎性小体的激活。细胞焦亡过程中常伴有炎症反应的发生,而炎症小体则是细胞产生焦亡和炎症反应所必需的多聚体蛋白复合物,其主要功能是活化caspase-1,从而间接调控炎症因子白介素1（IL-1）和IL-18的表达和分泌。最近的研究表明,细胞焦亡和炎症小体在非酒精性脂肪肝病的发生发展中起重要作用。针对该领域的最新研究进行综述,以期为非酒精性脂肪肝的防治提供新的科学认识和信息。     

二氯乙酸钠对氧糖剥夺损伤的BV2细胞的保护作用及其机制研究

目的 研究二氯乙酸钠（dichloroacetate,DCA）对氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤模型中小鼠小胶质细胞（BV2细胞）的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将BV2细胞分为3组：对照组、OGD组、DCA治疗组,通过OGD 4 h建立损伤模型。CCK-8和流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS和NO的表达,Western blot检测NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果 CCK-8及流式细胞检测结果表明,DCA可显著降低OGD诱导的BV2细胞凋亡,并且减少OGD后细胞中活性氧（ROS）和一氧化氮（NO）的表达（P<0.05）。Western blot结果显示,DCA可显著影响OGD损伤介导的BV2细胞JNK、I-κB和NF-κB蛋白表达水平（P<0.05）。结论 DCA对OGD损伤的BV2细胞具有保护作用,其机制与抗凋亡、抗氧化和抗炎作用有关。