CD14抗原的结构与功能

ＣＤ１４ 主要存在于巨噬细胞、单核细胞和中性白细胞表面，它是一种分子量为５３－５５ＫＤ的糖蛋白，以糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）的形式锚在细胞膜上，为脂多糖／脂多糖结合蛋白复合物的受体。ＣＤ１４ 与配体结合后可触发机体的一系列免疫应答和免疫病理过程，在由革兰氏阴性菌引起的疾病的发生、发展和转归方面起着重要的作用。     

旋毛虫ES抗原特异性蛋白两个结构基因的序列分析及重组质粒的构建

目的：获取旋毛虫ＥＳ抗原的结构基因，对其鉴定和克隆，并研制旋毛虫基因重组抗原。方法：先用反转录ＰＣＲ技术获取目的基因，经序列测定和酶切分析后，再用重组ＤＮＡ技术分别将目的基因与融合表达载体ｐＥＸ３１Ｃ、ｐＥＸ３１Ｂ及表达载体ｐＢＶ２２０连接，评价在大肠杆菌中的表达效果和鉴定表达产物的特异性。结果：获得了编码ＥＳ抗原特异性蛋白成分的两个结构基因（０．７ｋｂ和０．９５ｋｂ），其序列与文献报道的稍有差异。共构建３个重组质粒并在大肠杆菌中表达出相应分子量大小的重组蛋白，均能被猪旋毛虫病阳性血清所识别，但非融合蛋白的特异性强于融合蛋白。在相同条件下，融合蛋白的表达量高于非融合蛋白，而表达蛋白的分子量大小与表达水平呈负相关性。结论：在大肠杆菌中表达的３种重组蛋白是研制旋毛虫基因重组抗原的良好候选抗原蛋白。     

牛胚胎玻璃化冷冻及一步解冻试验

本试验简化了牛胚胎冷冻保存方法的操作程序，为胚胎冷冻技术实用化打下了良好基础，试验选用１５％丙三醇＋４％丙二醇＋６％乙二醇作为细胞内液冷冻保护剂，用２５％丙三醇＋２５％丙二醇作为细胞外液冷冻保护剂，对黄牛胚胎进行冷冰保存试验，共冷冻优质桑椹胚和早期囊胚４６枚，通过液氮保存５－２０８天后解冻，有２７枚胚胎完好，置ＣＯ２培养箱中培养２４小时，有５５．６％（１５／２７）的胚胎继续发育，移植受体后，６０天     

在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

为深入研究人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ—１）衣壳蛋白ｐ２４的结构与功能,制备抗Ｐ２４单克隆抗体及其诊断抗原,将编码ＨＩＶ－１ｐ２４蛋白的ｐ２４ｇａｇ基因片段,克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游,构建成了重组表达质粒ｐＥＴ２４,并使ｐ２４ｇａｇ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达,其产物为３０ｋＤａ的ｓ１０－ｐ２４融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的３８．４％。重组Ｐ２４蛋白均抗ｐ２４单克隆抗体及ＨＩＶ—１阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原性,对研究开发ＡＩＤＳ诊断试剂和基因工程疫苗具有重要意义。     

在大肠杆菌中高效表达人I型免疫缺陷病毒p24蛋白

目的 表达人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）衣壳蛋白ｐ２４，为制备抗ｐ２４单克隆抗体及其诊断抗原奠定基础。方法 将编码ＨＩＶ－１ｐ２４蛋白的ｐ２４＾ｇａｇ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建重组表达质粒，转化大肠肝菌ＢＬ２（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导表达，表达产物以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及点免疫印迹分析，结果 构建成功重组表达质粒ｐＥＴ２４经Ｉ     

在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

In order to study the capsid protein (p24) of human immunodeficiency virus type 1(HIV-1),a plasmid vector pET24,containing the p24^gaq gene fragment encoding the p24 protein under the control of the bacteriophage T7 promoter ,was constructed.The pET24 plasmid-highly expressed a 30kDa protein of s10-p24 spanning 284 amino acid residues.The total amount of the fusion protein was approximately 38.4% of the total celluar protein in Escherchia coli BL21(DE3).Westein blotting and,immunodot blotting indicated that the recombinain protein could be relognized by anti-p24 monoclonal antibody and HIV-1 positive sera respectively.It is significance for preparing specific antibody,and diagnostic usage.     

用标记磁微粒技术克隆牛CD14基因

为获得牛ＣＤ１４ 的全长编码基因，以探讨牛ＣＤ１４ 基因结构与功能的关系，进一步阐明其作用机理，我们用抗牛ＣＤ１４ 的单克隆抗体（ｍＡｂ）ＣＣＧ３３ 标记的磁微粒作为探针，从转染有牛肺泡巨噬细胞ｃＤＮＡ文库的ＣＯＳ７细胞中进行筛选。并对获得的牛ＣＤ１４ ｃＤＮＡ进行了克隆和序列分析。结果表明，牛ＣＤ１４ 基因全长为１１２２ ｂｐ，共编码３７３ 个氨基酸，其中含有信号肽序列和３ 个可识别的Ｎ连接糖基化位点，但缺少穿膜结构域及细胞内区。证实牛ＣＤ１４ 以糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ） 锚定在靶细胞膜上；其氨基酸序列与人和小鼠ＣＤ１４ 的同源性分别为７３－５ ％ 和６１－４ ％ ，三者共有的保守序列约为５５％ 。     

小鼠FcγRⅢ原核表达、纯化及鉴定

目的: 制备纯化重组蛋白mFcγRⅢ,并鉴定其生物学活性.方法: 从克隆载体mRⅢ-T中扩增mFcγRⅢ胞外区,构建原核表达载体pETmRⅢ,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot对重组表达蛋白进行鉴定;表达产物通过包涵体纯化后用稀释方法复性;ELISA检测复性蛋白活性.结果: 成功构建了重组表达质粒pETmRⅢ,纯化和复性了重组蛋白mFcγRⅢ;复性的重组蛋白mFcγRⅢ具有较强的体外活性.结论: 原核重组蛋白mFcγRⅢ复性后具有较强的体外结合配体特性,为探索重组蛋白治疗自身免疫病奠定了基础.     

H—FABP基因多态性及其与肌内脂肪关联的研究进展

对H—FABP（Heart Fat Acid Binding Protein,心脏型脂肪酸结合蛋白）基因的多态性及其作为肌内脂肪沉积候选基因的现状做一综述．内容包括H—FABP的生理特性、基因结构以及其与肌内脂肪的关系和研究前景。     

牛IgG Fc受体Ⅲ的分子克隆和序列分析

目的 研究牛ＩｇＧＦｃ受体的结构与功能的关系。方法 在构建了牛肺巨噬细胞ＣＤＮＡ文库的基础上,用ＰＣＲ方法获得了码牛ＩｇＧＦｃ受体Ⅲ的全长编码基因。结果 通过分子克隆和序列分析,发现其编码基因为５０７ｂｐ,共编码１６８个氨基酸,其中含有信号肽序列,穿膜区和胞内结构域以及３个Ｎ－连接糖基化位点。与ＣＯＬＬＩＮＳ等克隆的ｂｏＦｃγＲⅢ相比,在它的胞外区中缺失了８２个氨基酸,仅有一个胞外结构域。结论 我