2016年4月—2022年3月深圳市和济南市流感病原学监测及流行特征

目的 分析在新型冠状病毒肺炎流行背景下,2016年4月—2022年3月国内深圳市和济南市流感流行特点,了解我国南北方地区流感流行差异。 方法 使用深圳市和济南市国家级哨点医院2016—2022监测年度流感样病例(ILI)和流感病原学监测资料,分析流感流行特征和趋势。 结果 2016—2022监测年度深圳市和济南市国家级哨点医院的门急诊病例中流感样病例百分比(ILI%)分别为2.25%、3.45%。两地区ILI%最高的年份均为2021—2022监测年度。ILl年龄构成均以0~4岁为主(分别占40%、46%)。按月分析两地区流感病毒分离阳性率与ILI%变化的相关性,两者趋势均存在正相关(r=0.238,P<0.05;r=0.425,P<0.001)。两地区不同监测年度流感优势毒株型别均不相同,呈交替变化,但每年流行的型别及高峰期的优势毒株型别基本一致。 结论 2020—2021监测年度即新型冠状病毒肺炎流行初期,深圳市和济南市流感活跃程度明显低于往年平均水平且流行毒株型别单一,其余监测年度基本符合我国南、北方地区流感流行特征。     

高效液相色谱法检测食品中氨基酸的方法研究

目的应用高效液相色谱法测定食品中氨基酸。方法使用带自动衍生功能的自动进样器进行在线衍生，梯度分离，利用二极管阵列一荧光检测器串联分析。器联用技术能有效提高定性的可靠性和定量的准确性。确，结果满意。结果在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差，双检测结论研究的方法测定重复性好，灵敏度高，定性定量准     

深圳市首例人禽流感病例的实验室检测分析

目的对深圳市首例人禽流感病例进行实验室确诊，并研究其携带病毒关键基因的遗传特性。方法采用实时荧光RT-PCR方法检测高致病性禽流感病毒（H5N1）核酸，采用血凝抑制方法检测患者血清抗高致病性禽流感病毒的抗体滴度变化，利用MEGA3．1软件分析患者携带病毒HA、NA基因的进化关系。结果成功确认了深圳市首例人禽流感病例，患者携带病毒为H5N1高致病性禽流感病毒，HA、NA基因进化关系比较特殊。结论深圳地区禽鸟中可能携带高致病性禽流感病毒，具有潜在感染人类的可能。     

SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达

目的构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达载体（EGFP）的融合表达质粒pEGFP—N2-SET并获得表达。方法根据人SET基因序列。设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、HindⅢ和KpnI酶切位点的引物。从人L-02肝细胞提取总RNA，以逆转录后cDNA为模板，PCR扩增获得SET基因片段，经双酶切后回收得到有以上两个酶切位点的SET基因片段，将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pEGFP—N2载体中，获得重组质粒pEGFP—N2-SET。以Lipofectamine^TM2000为载体，将构建好的真核表达质粒转染到L-02肝细胞中进行瞬时表达。结果。经DNA测序鉴定证实，pEGFP—N2-SET重组质粒构建成功，经荧光倒置显微镜观察，证实能在细胞内进行蛋白表达。结论SET表达质粒的成功构建及表达为其进一步结构和功能研究奠定了基础。     

分支杆菌医院感染株与消毒标准株对消毒剂的抗性研究

目的探讨分支杆菌戊二醛抗性株的抗性机制。方法采用PCR扩增分支杆菌热休克蛋白(HSP65)基因的一个约440bp片段,分析医院感染株与消毒标准株的HSP65基因有无改变。结果医院感染株与消毒标准株的PCR-RFLP图谱基本相同。结论分支杆菌医院感染株与消毒标准株对2%强化中性戊二醛的抗性差异与分支杆菌hsp65基因无相关关系。     

病例定义改变对流感监测系统的影响

目的评价新修订的流感样病例定义在流感监测中的适用性和灵敏性，为科学制定流感样病例定义提供参考依据。方法通过对深圳市四区2005～2007年流感样病例暴发疫情中的流感样病例个案进行回顾性分析，重点比较各种流感样症状的频率、病例定义的范围和疫情规模，使用SPSS（11．0）和EPIINFO进行统计分析。结果深圳市流感样病例暴发疫情资料真实可靠，1529例（83．6％）符合流感样病例定义，68例（3．7％）未符合流感样病例定义，未有详细流行病学调查个案232例（12．7％）。流感样病例症状前3位顺位分别为咳嗽（70．2％），头痛（46．6％）、咽痛（41．9％）。新修订的流感样病例定义与原病例定义对流感样病例的一致率为83．4％，增加“头痛”（OR=0．37，adjOR=0．29～0．48）或“流涕”（OR=0．48，adjOR=0．38～0．60）症状，能有效扩大流感样病例定义的涵盖范围。另新修订的流感样病例定义，0-4人组段的疫情规模起数明显上升（Χ^2=10．6，P〈0．01），整体上降低了流感样病例暴发疫情规模的判断。结论我国新修订的流感样病例定义清晰明确，易于操作，但涵盖范围缩小，降低对流感样病例暴发疫情规模的判断。在新修订的病例定义基础上增加“头痛”或“流涕”一项或两项症状，均能较大程度扩大病例定义的适用范围，提高代表性和灵敏性。     

荧光定量RT—PCR快速检测手足口病病原研究

目的建立荧光定量RT—PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术，设计一对共引物及探针，建立、优化反应体系后，构建质粒标准品，利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线，根据TCID。倍比稀释，建立灵敏度曲线。特异性检验后利用临床标本与传统的RT—PCR法进行比较。结果定量标准曲线的灵敏度为10^5／μl（R^2=0．999），PCR扩增效率为94％。灵敏度曲线显示检测到的最低浓度值为5．0TCID50／ml（R^2=0．99），PCR扩增效率为97．6％。荧光RT—PCR检出率为80．9％，显著高于RT—PCR（检出率为62．92％）。结论研究建立的荧光定量RT—PCR方法检测肠道病毒敏感性高、特异性好、效率高，可以作为肠道病毒的快速检测方法。     

乙型脑炎病毒TaqMan逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

目的采用TaqMan技术，研究建立实时荧光逆转录聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis，JEV）的效果。方法根据JEV非结构蛋白基因NS3基因序列（GenBank序列号，U15763），结合生物学软件序列比对分析，设计1对特异性引物和TaqMan寡核苷酸探针，优化荧光RT～PCR反应条件后，以模板梯度稀释法及相关毒株对比扩增检验测定方法的敏感度和特异性。结果引物和探针最佳浓度均为0．20uM，复性温度为55℃。方法至少检测出1 copy／止病毒RNA，与流感、麻疹、腮腺炎、风疹、水痘等病毒均无交叉反应。从病毒核酸提取至完成检测仅需3hr左右。结论所建立的JEV病毒TaqMan荧光RT—PCR方法敏感特异，有助于JEV感染的实验室早期快速诊断。     

带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统的初步构建

目的构建带TAP标签流感病毒8质粒反向遗传包装系统，以期应用于流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理的研究。方法两步RT—PCR方法扩增流感病毒8基因，人工合成TAP基因序列，并采用3次PCR的方法融合TAP基因和NP基因。将流感病毒8基因和NP—TAP基因克隆于反向遗传载体PIVVⅡ-1，阳性克隆用PCR和序列测定进行鉴定。结果经PCR和序列分析鉴定，筛选到了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传阳性克隆。结论成功构建了带TAP标签的流感病毒8质粒反向遗传包装系统，为进一步研究流感病毒感染宿主细胞的蛋白分子机理奠定了基础。     

碰撞池ICP-MS技术在血中铅、砷、镉快速测定中的应用

目的建立八极杆碰撞池电感耦合等离子体质谱（ORS-ICP-MS）快速测定血中铅、砷、镉的测定方法。方法血样经HNO，聚四氟乙烯压力罐消解体系消解后，用八级杆碰撞池电感耦合等离子体发射质谱法同时测定血样中铅、砷、镉含量。结果灵敏度高，各元素检出限在0．13-0．52μg／L之间；线性良好，线性相关系数均≥0．999；重现性好，变异系统RSD〈5％；准确度高，与标准检验方法原子吸收光谱法比对结果相对偏差〈10％，用美国威斯康星州立卫生实验室PT（Proficiency testing progam）项目组提供的标准牛血样品（编号：02Pb38）作为标样质控，分析结果与标准值合。结论本方法快速灵敏，精密度及准确度均符合要求，结果令人满意。