产气肠杆菌中发现碳青霉烯酶KPC-2型

肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,KPC),属A类β-内酰胺酶.2010年3月25日我们从一家三等甲等医院老年患者的痰液中分离到1株碳青霉烯类耐药的产气肠杆菌(标本编号:20100323BAA049,经gyrA和parC基因扩增与测序,GenBank比对确认).为了解该菌株的β-内酰胺类耐药机制,我们采用E-test法检测了该菌对26种抗菌药物敏感性,并进行了A类、B类、C类、D类等4类41种β-内酰胺酶基因检测,用改良的三维试验法检测AmpC酶、ESBLs和金属β-内酰胺酶活性,用改良Hodge试验法检测碳青霉烯酶活性.     

老年患者鲍氏不动杆菌分离株耐药性与AmpC酶、β-内酰胺酶基因研究

目的 了解老年患者鲍氏不动杆菌(ABA)分离株耐药性、AmpC酶和β-内酰胺酶基因存在状况.方法 对20株ABA进行药敏、AmpC酶和β-内酰胺酶基因检测.结果 20株老年患者ABA分离株呈多药耐药性,其中AmpC(染色体型)基因阳性17株(85%);TEM基因阳性11株(55%)、PER基因阳性5株(25%),其余基因均阴性.结论 该20株菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产AmpC酶和β-内酰胺酶密切相关.     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺类耐药机制研究

目的 调查多药耐药肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶基因的存在情况.方法 收集2010年3-5月浙江大学附属第一医院住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌共15株,先做β-内酰胺酶分型,再做改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶表型,然后采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析40种β-内酰胺酶基因.结果 15株多药耐药肺炎克雷伯菌共检出TEM-1 12株、KPC-2 9株、KPC-2-like 2株、OXA- 30 1株,检出率分别为80.00％、60.00％、13.33％、6.67％,2号株与6号株KPC基因为KPC新的变异型(KPC-2-like,GenBank登录号:HQ258934);其他基因均未检出.结论 该组15株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物与细菌产4种β-内酰胺基因相关.     

多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因研究

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因的存在与变异情况.方法 收集杭州市余杭区中医院2008年11月-2009年12月住院患者送检标本中分离的鲍氏不动杆菌共30株,先用改良三维试验同时检测头孢菌素酶(AmpC)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和金属β-内酰胺酶(MBL)3类β-内酰胺酶活性,再用聚合酶链反应的方法分析24种β-内酰胺酶基因与膜孔蛋白carO基因.结果 30株多药耐药鲍氏不动杆菌共检出TEM、ADC、OXA-23群等3种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为100.0％、60.0％、80.0％,30号株ADC基因为新亚型;膜孔蛋白carO基因突变率达100.0％.结论 鲍氏不动杆菌对多种β-内酰胺类药物耐药与产TEM、ADC、OXA-23群等3种β-内酰胺酶基因相关外,还与膜孔蛋白编码基因carO突变有关.     

多药耐药肺炎克雷伯菌噬菌体原/噬菌体、整合子、转座子、插入序列及质粒遗传标记分析

目的 调查多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)中噬菌体原/噬菌体、整合子、转座子、插入序列和质粒等可移动遗传元件遗传标记的存在情况.方法 收集2008年8月-2010年5月6所医院共47株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法,分析12种噬菌体原/噬菌体、3种整合子、7种转座子插入序列和两种质粒共24种可移动遗传元件遗传标记.结果 该组MDRKP共检出1种噬菌体原/噬菌体、1种整合子、6种转座子和插入序列、两种质粒遗传标记.结论 携带Ⅰ类整合子(intⅠ 1)、插入序列(IS26、IS903、ISEcp1、ISKpn6)、耐药质粒(trbC)是该组MDRKP耐药的一个重要原因,MDRKP同时作噬菌体原/噬菌体、整合子、转座子、插入序列和质粒等遗传标记检测为国内首次.     

2011-2015年神经外科患者下呼吸道感染病原菌分布及耐药性分析

目的 研究神经外科患者下呼吸道感染病原菌分布规律及其耐药性,进而为临床抗菌感染经验治疗提供依据.方法 收集2011-2015年神经外科住院下呼吸道感染患者的痰标本送检,采用MicroScan WalkAway-96 plus全自动微生物分析系统及其相关配套试剂进行细菌鉴定及药敏试验.采用WHONET 5.6软件统计分离出的非重复性感染细菌种类并进行耐药性分析.结果 自神经外科下呼吸道感染住院患者中共检出1880株病原菌,其中革兰阴性细菌1308株,占69.57％,占比前4位的分别为肺炎克雷伯菌(19.26％)、鲍曼不动杆菌(14.68％)、铜绿假单胞菌(13.56％)和黏质沙雷菌(5.37％);革兰阳性细菌496株,占26.38％,占比前3位的分别为金黄色葡萄球菌(10.90％)、凝固酶阴性葡萄球菌(13.62％)和肠球菌(1.01％);真菌占4.04％,以假丝酵母为主(3.88％).肺炎克雷伯菌对氨苄西林、替卡西林耐药率较高,对替加环素、阿米卡星耐药率相对较低.鲍曼不动杆菌对加替沙星、哌拉西林/三唑巴坦等耐药率较高,对多黏菌素E较敏感.铜绿假单胞菌耐药率相对居中.黏质沙雷菌对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛等耐药率极高,而对替卡西林/克拉维酸、阿米卡星、亚胺培南较敏感.葡萄球菌对青霉素G耐药率极高,金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林的耐药率分别为46.34％、95.31％,未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌.结论 神经外科下呼吸道感染以革兰阴性菌为主,各种细菌对临床常用抗菌药物的耐药程度不同;主要病原菌的耐药率较高.     

多药耐药鲍氏不动杆菌可移动遗传元件研究

目的了解临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)可移动遗传元件的存在状况。方法收集住院患者中分离的62株MDR-ABA,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测接合性质粒遗传标记(traA、trbC),插入序列(ISaba1、IS1133、ISEcp1),转座子遗传标记(merA、tnsA),整合子遗传标记(intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3)等可移动遗传元件,并将先前报道的转座子遗传标记新型转座酶基因tnpU、tnp513合并总结分析。结果62株MDR-ABA中,4种可移动遗传元件基因ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1阳性株数分别为55株(88.7%)、34株(54.8%)、35株(56.5%)和34株(54.8%),其余8种基因均阴性;55株(88.7%)至少检出1种基因,33株(53.2%)同时4种基因阳性。结论MDR-ABA存在严重的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等多药耐药状况可能与ISaba1、tnpU、tnp513和intⅠ1等可移动遗传元件标记携带率高有关,在MDR-ABA中检出ISaba1、tnpU、tnp513等3种基因插入序列和转座酶基因为国内首次。     

多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组耐药基因检测

目的检测1株多耐药大肠埃希菌NB8株的遗传学背景。方法病原分离自2012年4月宁波市第一医院住院患者尿液,作16S rDNA和gyrA基因测序、BLASTn比对确认为大肠埃希菌,采用Illumina HiSeq与Ion Torrent PGM两种大规模并行测序仪进行全基因组分析,再行人工测序。最后NB8株和9株已完成全基因组测序的大肠埃希菌耐药基因的比较基因组学研究。结果多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组测序得到一条推定的染色体序列,长4 550 369 bp (内含14个缺口),得到一条推定的质粒序列,长635 377 bp(内含33个缺口)。从NB8株全基因组数据中挖掘出了β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、四环素类、多粘菌素的耐药基因,并挖掘出接合性质粒、转座子、插入序列、整合子的遗传标记,以及5大类外排泵基因。结论多耐药大肠埃希菌NB8株遗传学背景明确,主动外排机制增强也会导致或者增强NB8株的耐药性。质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件可以使细菌的耐药性得以快速传播,使受体菌表现为多重耐药。     

221株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌qacA/qacB基因检测及临床意义

目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)qacA/qacB(qacA/B)消毒剂耐药基因存在状况,并讨论其临床意义.方法 收集221株临床分离的MRSA进行qacA/B基因检测.结果 221株MRSA中qacA/B检出101株(45.7%),其中71株并作qacA基因特异性聚合酶链反应(PCR)检测,检出qacA基因20株(28.2%),而该71株qacA/B基因检出27株(38.0%),提示有7株为qacB基因.结论 MRSA已出现高频度的qacA/B消毒剂耐药基因,用氯己定等消毒剂预防术后医院感染必须重新评估;现行的消毒剂或消毒方法的有效性,应引起我国医院消毒界的广泛重视;消毒剂耐药基因检测技术为细菌耐消毒剂的临床应用研究和分子流行病学研究等提供了具有实际应用价值的技术手段.     

多药耐药鲍氏不动杆菌Ⅰ类整合子遗传标记研究

目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因)存在状况.方法 采用PCR检测62株MDR-ABA Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因).结果 62株MDR-ABAqacE△1-sull基因阳性36株,阳性率58.1%;任取1个qacE△1-sull基因PCR阳性产物进行DNA测序,经BLASTn比对,与美国GenBank已登录的136条相同.结论 MDR-ABA存在严重的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等多药耐药状况与Ⅰ类整合子遗传标记携带率高有关;氯己定等消毒剂预防术后医院感染需要重新评估.