中医辨证治疗重症妊娠恶阻115例

按肝胃不和、脾胃虚弱、痰湿内阻、气阴两虚4类辨证施治,呕吐严重者配合中药浓煎取汁雾气吸入。经2～3周治疗,本组115例中痊愈78例,显效30例,有效7例。总有效率100％。其中肝胃不和型疗效最佳,气阴两虚型痊愈率较低。     

新疆南部地区蜱传虫媒病毒分子生物学调查

目的了解新疆南部地区蜱传虫媒病毒的种类和分布情况。方法在新疆南部地区的23个采集地36个采集点,采集蜱标本5045只,分别建立蜱标本cDNA文库,用PCR方法检测标本可能携带的病毒。结果黄病毒属引物、加利福尼亚血清组病毒引物对34份cDNA文库检测结果均为阴性;内罗毕病毒属引物和新疆出血热病毒巢式引物在巴楚县蜱标本中检测到新疆出血热(XHF)病毒核酸序列,对检测到的XHF病毒L和S片段进行系统进化分析。结论对新疆南部地区5045只蜱进行四种六对引物的PCR检测,未检出黄病毒属和加利福尼亚血清组病毒核酸序列,获得新疆出血热病毒L和S片段的核酸序列,研究了其分子流行特征。     

2004年中国甲3亚型流感病毒(H3N2)抗原性及基因特性研究

目的阐明2004年中国流行的甲3亚型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况。方法对2004年分离的甲3亚型毒株先进行单向血凝抑制试验及交叉血凝抑制试验;在此基础上选取不同时间、地点的甲3亚型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析。结果单向血凝抑制实验结果表明,2004年共有52.3%毒株与A/Fujian/411/2002(H3N2)(20042005毒株)有4倍或以上的血凝抑制滴度差异,交叉血凝抑制实验结果表明,它们间的抗原比为4。HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,我国从2004年2月分离的甲3亚型毒株开始出现了与A/Fujian/411/2002(H3N2)和A/Wellington/1/2004(H3N2)(2005年国际代表株)相比较,在其HA1蛋白分子上存在有4个氨基酸位点(159位Y>F,189位S>N,145位K>N,226位V>I)发生了替换。此类毒株首发于我国南方,然后到我国北方。结论我国2004年2月份以后所分离的甲3亚型流感毒株已经发生抗原性及基因特性的改变。     

我国猪群中H9N2亚型毒株HA和NA基因特性的研究

目的 了解我国内地从猪中分离到H9N2亚型毒株HA和NA基因来源及它们使猪致病的原因。方法 用PCR扩增目的基因，与P^GEM-T Easy Vector4℃过夜连接，重组质粒转化DH-10β细菌，筛选阳性菌落，酶切鉴定，测序。然后，进行进化树分析。结果 两株猪H9N2毒株HA蛋白分子上第226位上氨基酸为L，这与从人和猪所分离出的H9N2毒株相同，其连接肽属对禽致病的毒株，但它们的序列为R-L-S-R，而不是R-S-S-R；其NA蛋白茎区第62～64位存在掉失，这与A／Shaoguarn/408／98，A／Swine／Hong Kong／9／98及A／Duck／Hong Kong／y280／97(H9N2)毒株相同；HA与NA基因进化树分析表明，两株猪H9N2毒株的HA基因接近于A／Chicken／Hong Kong／G23／97和A／Chicken／Hong Kong／G9／97．而NA基因接近于A／Shaoguan／408／98毒株。结论 两株猪H9N2亚型毒株的HA和NA基因可能性最大来自禽H9N2毒株。由于其HA蛋白分子上连接肽氨基酸序列发生替换，可能造成了它们对猪具有致病性。禽H9N2毒株NA蛋白茎区氨基酸掉失，造成了它们能直接感染猪。     

超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrP^Sc聚集状态的影响，寻找产生PrP^Sc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物，用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物；以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测PrP^Sc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理(15s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrP^Sc含量1．29～1．58倍；同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量，而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大；对经常规高速离心获得的PrP^Sc的超声处理显示约90％的PrP^Sc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrP^Sc的提取量，利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrP^Sc聚集物，产生小的相对分子质量的PrP^Sc产物。     

HIV DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫效果的研究

目的 构建含HIV-1B亚型中国株gagV3基因的DNA疫苗及重组腺病毒伴随病毒(rAAV)疫苗，并研究DNA疫苗和rAAV联合免疫的免疫效果。方法 将HIV-1B亚型中国株gagV3基因克隆入真核表达载体pCI-neo上，构建了含HIV-1 gagV3基因的DNA疫苗pCI-gagV3。采用电击法将pCI-gagV3质粒转染p815细胞，用G418压力筛选，得到转入重组质粒的细胞系p815-gagV3，用免疫酶法检测细胞系中HIV-1基因的表达。用该DNA疫苗进行小鼠免疫实验，检测免疫效果；用该DNA疫苗初次免疫，含同样gagV3基因的重组腺病毒伴随病毒rAAV-gagV3加强免疫，采用免疫酶法检测免疫小鼠血清中HIV-1特异性的抗体水平，用乳酸脱氢酶法检测免疫小鼠的HIV-1特异性CTL水平。结果 pCI-gagV3可以在p815细胞中表达HIV-1的基因，免疫BALB／c小鼠后可以在小鼠体内诱发HIV-1特异性的细胞和体液免疫反应。HIV-1特异性抗体滴度为1：20；效靶比为50：1时，CTL平均杀伤率为41．7％。pCI-gagV3与rAAV-gagV3联合免疫并不能明显提高抗体水平，但可以提高CTL反应，效靶比为50：1时，CTL平均杀伤率为61.3％，高于单独用DNA疫苗或重组AAV疫苗免疫后产生的CTL活性。结论 DNA疫苗与重组腺病毒伴随病毒联合免疫可以提高免疫小鼠产生的HIV-1特异性CTL反应。     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白特异性单克隆抗体(McAb)，为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株，用Western blot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性，并将N蛋白分3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和3轮克隆化，筛选出分泌抗N蛋白的6个杂交瘤细胞株。Western blot及免疫荧光显示，获得的McAb可与SARS-CoVN蛋白及SARS-CoV发生特异性反应，有4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端，2个位于C端。结论 获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位，可用于SARS的早期诊断及致病机制研究。     

我国诺如病毒SZ9711株P粒子制备及唾液HBGAs受体亲和性分析

目的 了解SZ9711株P粒子与唾液组织血型抗原受体（HBGAs）的结合模式.方法 从诺如病毒SZ9711株基因组中克隆P区基因片段并构建pGEX-4T-1原核表达质粒,在原核细胞中表达目的 重组蛋白并纯化,经溶血酶酶切后释放目的 蛋白.用EIA方法测定SZ9711株和VA387株P粒子与唾液HBGAs的结合情况.结果 SDS-PAGE电泳分析确定重组融合蛋白的表达,经纯化和凝血酶切后获得约38×10^3的目的 蛋白P蛋白.根据EIA分析表明,SZ9711株P粒子与先前报道的VA387株P粒子与唾液HBGAs模式相同,与A、B和O^secretor有亲和力,但与O^non-secretor亲和力非常低.同时,SZ9711与A抗原的亲和力较VA387与A抗原的亲和力低.结论 本研究利用我国分离到的SZ9711株制备的P粒子进行唾液HBGAs受体结合分析,表明与同源性较高的先前报道的VA387 P粒子结合模式相似,为今后研究诺如病毒与宿主受体之间的关系奠定实验基础.     

冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位

目的冰冻切片染色法观察重组狂犬病病毒对乳鼠脑的感染和定位。方法将本实验室构建并拯救成功的人用狂犬病疫苗株重组病毒（CTN—GFP）脑内接种1日龄乳鼠和4周龄成年鼠,待感染乳鼠发病后至濒死期,通过心内灌流方法固定并制作脑组织冰冻切片,观察重组病毒在感染鼠的大脑海马组织中的绿色荧光蛋白的表达及分布。结果DAPI将所制作的冰冻切片中脑组织内细胞的胞核染成蓝色,在共聚焦显微镜下观察到受感染乳鼠的脑组织海马回位置有大量绿色荧光蛋白的表达。结论通过制作脑组织冰冻切片的方法可以清楚的观察到病毒的感染及其在海马回中的位置,同时为追踪病毒在体内的移行过程提供了一种新方法。     

狂犬病抗血清WHO标准品和国家标准品用于RFFIT方法的比较

目的比较狂犬病快速荧光灶抑制试验（RFFIT）方法中狂犬病免疫球蛋白WHO标准品和狂犬患者免疫球蛋白国家标准品为参照所得结果的差异。方法在同一次RFFIT试验中同时设置WHO标准品参照和国家标准品参照,同时测定12份待测人血清,比较两种标准品所产生荧光灶的百分比;按照中和抗体滴度计算公式计算不同标准品参照所得12份待测血清抗体滴度,比较其差异。结果结果显示WHO标准品和国家标准品的50％感染量均出现在第5孔和第6孔之间,但国家标准品荧光灶百分比低于WHO标准品;以WHO标准品做参照所得到的同一份血清滴度略高于国家标准品。结论WHO标准品和国家标准品在RFFIT方法中存在差异,但不影响结果判定。