应用分子生物学方法对黑线姬鼠体内恙虫病东方体基因型分析

从野外优势鼠种黑线姬鼠分离到的恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)与恙虫病人Ot分离株血清型别相同。为进一步从分子水平了解黑线姬鼠的宿主作用 ,采用Nested PCR结合限制性内切酶片段长度多态分析 (RFLP)技术对Ot Sta5 6基因型进行分析。Gilliam、Karp、Kato 3株国际参考株由北京军事医学科学院流行病与微生物学研究所提供。 4株Ot(FXS1、FXS2、FXS4、ZPS1株 )分离自山东费县、邹平县农田黑线姬鼠。上述毒株均于 30℃冰箱冻存。根据Ot Sta5 6外膜蛋白基因部分序列设计引物 ,由上海生工生物公司合成。Ot DNA的提取 ,…     

兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用

目的:获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用。方法:应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽,经C18的RP-HPLC纯化后,通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔,加强免疫得到抗血清,应用蛋白G纯化获得多克隆抗体。对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用。结果:分别化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽,纯化后多肽纯度分别为98%、88.54%及80%,达到免疫用抗原标准。多肽与KLH交联,用于免疫动物。经纯化后的抗体效价分别为1∶32000(0.1mg/L),1∶4000(3mg/L)和1∶1000(10mg/L)。3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子,相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞。结论:所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验,为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具。目的:获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽的多克隆抗体,并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用。方法:应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽,经C18的RP-HPLC纯化后,通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔,加强免疫得到抗血清,应用蛋白G纯化获得多克隆抗体。对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用。结果:分别化学合成CXCR3-B分子N端第1~19、第17~35及第33~51个氨基酸多肽,纯化后多肽纯度分别为98%、88.54%及80%,达到免疫用抗原标准。多肽与KLH交联,用于免疫动物。经纯化后的抗体效价分别为1∶32000(0.1mg/L),1∶4000(3mg/L)和1∶1000(10mg/L)。3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量(Mr)约为50的CXCR3-B分子,相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞。结论:所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验,为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具。     

应用PCR/RFLP对山东地区恙虫病东方体的基因型分析

目的　鉴定山东地区恙虫病东方体的基因型。方法　采用聚合酶链反应 /限制性片段长度多态性分析 (PCR/RFLP)技术对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病病人全血中提取的DNASta5 6基因进行分析研究 ,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果　山东地区 35份标本 ( 2 3株恙虫病东方体山东分离株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及 10份恙虫病人全血 )提取的DNA群引物扩增产物经HinfⅠ、HhaⅠ、SnaBⅠ酶切后呈现 2种不同的RFLP图谱 ,经与已知序列的Ot内切酶图谱相比 :33份Ot内切酶图谱与文献报告的日本地方株—Kawasaki株具有相似的酶切图谱 ,但缺乏HhaⅠ的酶切位点 ;另 2份与Karp参考株具有相同的酶切图谱。该结果与NestedPCR基因分型的结果相一致。结论　山东地区恙虫病东方体流行株主要基因型与日本地方株Kawasaki型类似 ,但与日本地方株存在遗传差异 ;同时还有Karp型Ot存在。采用PCR/RFLP方法可以准确对Ot-Sta5 6基因分型。     

血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)的研究进展

血小板内皮细胞黏附分子 1(platelet endothelialcelladhe sionmolecule 1, PECAM 1)又名CD31, 是相对分子质量 (Mr)为 130 000的I型跨膜糖蛋白, 属于免疫球蛋白超家族成员,可在内皮细胞、循环的血小板、单核细胞、中性细胞及某些T细胞亚群表面表达, 最近也有PECAM 1在造血干细胞的整个发育过程中均有表达的报道 [1]。由于在发育和成熟个体的所有血管内皮细胞都有高度表达PECAM 1, 因此PECAM 1常常被用来作为血管内皮细胞的标志物。PECAM 1可介导细胞的黏连, 对整合素的功能具上调作用, 同时PECAM 1在白细胞跨内皮细胞迁…     

济南某部队人群甲型肝炎前瞻性调查

甲型肝炎 (甲肝 )是严重危害部队指战员健康的疾病之一 ,为了查明部队病毒性肝炎尤其甲肝实际发病率及其特点 ,于 1993年 1月开始在某部进行甲肝前瞻性调查 ,结果报道如下。1.对象与方法 :以整群抽样方式在山东地区野战部队中 ,抽取两个有代表性的部队 (甲、乙部队 )为观察对象 ,收集1993年 1月至 2 0 0 0年 12月肝炎疫情 ,并深入部队医院与基层团队核实疫情以及收集相关资料 ,计算发病率和漏报率。患者按诊断标准确诊 ,每例患者用统一的个案调查表由专人负责进行临床和流行病学调查 ,同时抽取急性肝炎病人血清 ,- 2 0℃贮存备检。血清学检…     

山东省部队驻地流行性出血热流行病学调查与预防对策的研究

目的 了解山东省部队驻地（驻地）流行性出血热（ＥＨＦ）自然疫源地流行病学特征及其危险因素。方法 采用病原学、血清学与病便对照和病家对照研究方法,检测标本和收集资料,进行事理分析。结果 驻地存在家鼠型（９１．４８％）、野鼠型（７．２１％）、未定型（１．３１％）病人。两型病人在性别、职业和年龄分布无明显差异。全年各月均有发病,家鼠型发病高峰为３￣６月份,野鼠型为１１月至翌年２月;鼠肺ＥＨＦ病毒９ＥＨＦ     

幽门螺杆菌相关抗原及宿主免疫应答的研究进展

幽门螺杆菌与多种胃肠道疾病诸如慢性胃炎,胃肠溃疡,胃腺瘤及胃癌等密切相关的结论已得到证实,预防和治疗幽门螺杆菌感染是控制其广泛传播的有效途径,此项工作虽早已开始,但至今未找到可行的方案.近来对幽门螺杆菌相关毒素的研究越来越多,这可作为研究幽门螺杆菌菌苗的重要依据;幽门螺杆菌诱发的宿主免疫应答以TH1反应为主,幽门螺杆菌感染者可出现系统和局部的抗体反应,这些抗体反应对机体不具保护作用且自身抗体对宿主上皮细胞还可能带来不良影响,阐明宿主免疫应答的机制对预防和治疗幽门螺杆菌感染具特殊意义.因此,本文主要介绍了脲素酶、空泡细胞毒素、cag相关基因蛋白,中性粒细胞蛋白等几种毒素及宿主免疫应答的研究现状,并对幽门螺杆菌的研究前景进行综述.     

山东地区秋冬型恙虫病传播媒介的调查研究

目的：探讨山东地区恙虫病传播媒介。方法：1995年5月～2002年4月在山东恙虫病疫区捕鼠。观察鼠体外恙螨季节消长，分离恙虫病东方体(Ot)。结果：室内外共捕捉到的527只活鼠(黑线姬鼠335只，大仓鼠119只，黑线仓鼠6只，小麝鼩2只，褐家鼠63只，小家鼠2只)，从活鼠体外共检获15467只恙螨，其中太平洋无前恙螨最多5720只，其它螨数量依次为小盾纤恙螨4175只，临淮岗纤恙螨3090只，须纤恙螨1687只，泰山纤恙螨466只，脆弱无前恙螨329只。恙螨季节变化：小盾纤恙螨主要出现在9～12月，高峰在11月，是秋季鼠体外绝对优势种；须纤恙螨出现在10～翌年4月，高峰在12月，为冬季优势螨种，临淮岗纤恙螨5月出现，11月消失，高峰在8月，为夏季优势种；泰山纤恙螨主要出现在6～10月，数量较少，且起伏较大；太平洋无前恙螨、脆弱无前恙螨全部采自仓鼠，主要出现在4～12月，高峰期在7月。Ot分离：小盾纤恙螨共接种11批，分离到5株Ot；须纤恙螨、临淮岗纤恙螨和太平洋无前恙螨分别接种4批，分离到4株、2株和2株Ot。小盾纤恙螨是恙虫病发病季节疫区鼠体外优势螨种，季节消长与当地人群恙虫病季节分布基本一致；能自然感染、叮刺传播和经卵传递恙虫病东方体；被恙螨叮刺或悬液接种的小白鼠血清中能检测到特异性抗体，以上结果证明小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的传播媒介。血清学分型：除从临淮纤恙螨分离到的1株为Karp型外，其余分离株均为Gilliam型。从不同材料中分离到的Ot毒力相差不大，均属弱毒株，分离株与标准株间有交叉免疫保护能力。现场和实验室杀螨实验表明，小盾纤恙螨对敌敌畏和以二氯苯醚菊酯为主的杀虫剂均很敏感，且防治效果至少可维持1个月以上。结论：小盾纤恙螨为当地秋冬型恙虫病的主要传播媒介，同时其它螨种也有充当恙虫媒介的可能。     

山东省秋冬型恙虫病自然疫源地调查

目的：摸清驻地恙虫病的本底资料,指导军民做好本病防治工作。方法：采用病原学、血清学技术和流行病学调查方法,对山东地区进行秋冬型恙虫病自然疫源地调查。结果 结果表明山东地区恙虫病流行高峰为１０月份约占发病数的８０％,属秋冬型、以黑线姬鼠、褐家、大仓鼠为主要储存宿主,分别占８２．８７％、８５．４７％和１３．０４％;当地小盾纤恙螨,须纤恙螨,临淮岗纤恙螨、太平洋无前恙螨均存在自然感染或分离到恙虫病立克次     

山东地区恙虫病东方体Sta56基因片段扩增与分型研究

目的 鉴定山东地区恙虫病东方体(Ot)基因型别。方法 采用巢式聚合酶链反应技术对23株恙虫病东方体山东株、2份采自黑线姬鼠体外的小盾纤恙螨匀浆及10份恙虫病患者全血中提取的Ot目的基因进行分析研究,并与Gilliam、Karp、Kato国际参考株进行比较。将群引物扩增产物用双向测序法进行序列测定。结果 35份标本中33份属于Kawasaki型,2份(FXS4 and LHGM2株)属于Karp型。从这33份中选出B-16、FXS2株进行碱基序列测定,结果B-16、FXS2株Sta56基因片段序列与Kawasaki型同源性最高,分别为94.22％、95.21％,而与其他6株Ot同源性均<75.87％.应属于Kawasaki型;FXS4和HGM2株Sta56基因片段序列与Karp型同源性最高,分别为83.03％、96.45％,应属于Karp型。结论 山东地区恙虫病东方体流行株以Kawasaki型为主,但同时存在Karp型。