登革2型病毒ZS01/01株E蛋白在真核细胞中的分泌表达研究

目的 对登革2型病毒(DENV-2)ZS01/01株E蛋白在哺乳动物细胞及昆虫细胞中的分泌表达进行研究.方法 RT-PCR扩增DENV-2 prM/E基因,通过融合PCR在prM基因前添加来自乙型脑炎病毒的信号肽序列,并将E基因羧基末端20%区域缺失或替换为乙型脑炎病毒SA14-14-2株E基因相应序列,将上述基因元件分别克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA5/FRT及昆虫细胞表达载体pAcUW51-M中,将重组质粒转染293T细胞或S19细胞,利用间接免疫荧光(Immunofluoreseence assay,IFA)及Western Blot检测E蛋白的表达与分泌.结果 各重组质粒分别转染293T细胞或Sf9细胞后,E蛋白在细胞内均有效表达,而仅有携带乙脑信号肽且缺失或替换E基因羧基末端20%区域的重组质粒转染293T细胞后,上清中可检测到明显的E蛋白分泌.结论 信号肽及E基因羧基末端20%区域对登革病毒E蛋白的分泌至关重要,宿主细胞对其亦有一定影响.     

宫颈透明细胞癌中人乳头瘤病毒的检测

目的 探讨宫颈透明细胞癌中高危型HPV感染情况.方法 提取1例37岁宫颈透明细胞癌患者手术切除组织蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况.结果 该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性.结论 利用巢式PCR方法分型检测宫颈透明细胞癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高.     

人乳头瘤病毒与食管癌病原学关系的Meta分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(Human papiuomavirus,HPV)与我国食管癌发生的相关性.方法 汇总了国内有关HPV与食管癌相关的论文,选择采用PCR方法检测的论文对发表的数据进行Meta分析.结果 我们以检测方法为PCR、标本为石蜡包埋标本、论文中列出或提示了引物序列的15篇论文作为入选论文.15篇文献涉及蜡块标本共980份,按照只要检出一个HPV型别即为HPV阳性进行计算,检出阳性例数为460例,各地HPV检出率为8.3%～69.8%,HPV平均检出率为46.9%(95%CI:43.8%～50.0%).在以上980份样品中,检测范围包括了HPV16型的样品有556份,阳性份数为139份,各地检出率为4.4%～63.4%,平均检出率为25.0%(95%CI:21.4%～28.6%);检测范围包括HPV18型的样本有485份,阳性份数为33份,各地检出率为0%～19.0%,HPV18型的平均检出率为6.8%(95%CI:4.6%～9.0%).以上15篇论文中,使用同一引物的文献只有4篇,共检测406份石蜡包埋标本,HPV阳性率为20.3%～67.6%,平均检出率为40.2%(95%17 CI:36.0%～45.4%).结论 我国食管癌组织中有HPV存在,并且HPV感染可能食管癌发生的重要病因.     

反向遗传学在登革病毒研究中的应用

关于登革病毒及其感染的研究迄今还有很多尚未解决的问题,利用反向遗传学技术(reverse genetic8 approache8)对登革病毒进行研究是目前的热点.本文将就近年来反向遗传技术在登革病毒研究中的研究进展进行综述.     

登革Ⅰ型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达

目的 分泌表达登革Ⅰ型病毒prM/E基因,为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础.方法 用RT-PCR法获得登革Ⅰ型病毒广州分离株全长prM/E基因,在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20%为乙脑病毒E基因相应的部分,分别将其克隆入真核表达载体pcDNAS/FRT中,获得三种重组质粒DlprME-pc5,D1JsprME-pc5,D1JsprM80E20JE-pc5.用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞,通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达.结果 用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革Ⅰ型病毒蛋白的表达.Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带,转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革Ⅰ型病毒的特异蛋白条带.结论 转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革Ⅰ型病毒prM/E蛋白,只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达.     

肠道腺病毒的研究进展

肠道腺病毒（enteric adenovirus,EAdv）是导致儿童腹泻的重要病原体,发病率仅次于轮状病毒、诺如病毒.研究表明在免疫缺陷患者中EAdv易引起并发症的发生,甚至导致死亡.国内外有EAdv暴发或流行的报道[1].虽然近年来的研究发现A、C、D、G等其他亚型的腺病毒均可引起婴幼儿急性腹泻[2],但EAdv仍以F亚群的40型和41型最为常见,其代表株分别为原型株Dugan-Hovix病毒和Tak病毒.自1995年程绪杰等在我国从儿童粪便中分离到EAdv以来,我国对EAdv的研究越来越重视.本文就肠道腺病毒及其相关研究进展进行综述.     

RNAi抑制XJ-160病毒复制的研究

目的通过建立RNA干扰(RNA interference，RNAi)抑制XJ-160病毒复制的模型，在序列特异性、位置效应和量效关系等方面，探讨RNAi对XJ-160病毒复制的影响，为进一步研究RNAi的抗病毒作用和机制奠定基础。方法按照siRNA(short interferencing RNA)的设计要求合成XJ-160病毒特异siRNA，脂质体法转染BHK-21细胞后感染XJ-160病毒，通过测定病毒滴度、蛋白表达量及XJ-160病毒：RNA合成研究siRNA对XJ-160病毒复制的抑制。结果成功建立了RNAi抑制XJ-160病毒复制的模型，探讨了RNAi抑制该病毒复制作用的特点。结论外源导入的siRNA能够抑制XJ-160病毒的复制，并且这种抑制作用具有明显的序列特异性、位置效应和存在量效关系等特点；siRNA是通过降解病毒RNA实现抑制病毒复制作用的。     

甘肃省SARS抗体血清流行病学调查

目的 了解甘肃省严重急性呼吸综合征(SARS)患者、密切接触者和正常人群血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平。方法 利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测SARS病毒IgG抗体水平。检测对象包括甘肃省9例SARS患者的急性期和(或)恢复期系列血清，l109例直接护理SARS患者的医生、护士、实验室检测人员、疾控人员和曾与患者有接触的人员以及978例正常人血清。结果 9例临床诊断病例SARS冠状病毒特异性IgG抗体中6例为阳性，疾病恢复后12个月血清抗体仍为阳性；密切接触者1例特异性IgG抗体阳性；正常人3例特异性IgG抗体阳性。结论 病例抗体阳性符合临床诊断，密切接触者和正常人的抗体阳性数较低，提示可能不存在隐性感染。     

狂犬/丙型肝炎嵌合病毒的构建和拯救

目的 以狂犬病病毒为载体,构建表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙型肝炎嵌合病毒,为发展新型丙肝载体疫苗奠定基础.方法 在狂犬病病毒反向遗传系统CTN-GFP的基础上,通过传统分子克隆方法,将HCV E1E2基因分别克隆人复制型和复制缺陷型狂犬病病毒载体,构建狂犬/丙肝嵌合病毒CTN-HCV E1E2和CTNΔG-HCV E1E2.结果 免疫荧光（DFA）和反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）结果 显示嵌合病毒拯救成功,嵌合病毒能够再次感染正常细胞并且能够在mRNA水平检测到HCV E1E2基因的表达.结论 本研究成功构建了表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙肝嵌合病毒,提示以狂犬病病毒为载体发展新型丙肝载体疫苗在理论和技术上都是可行的.     

中药心康口服液抗柯萨奇B3病毒RNA复制作用的研究

目的研究探讨中药心康口服液对感染心肌中柯萨奇B3病毒RNA复制的影响。方法小鼠感染柯萨奇病毒B3(CVB3)诱发急性病毒性心肌炎,于急性期治疗后提取鼠心肌总RNA,用逆转录-聚合酶链反应技术检测心肌CVB3RNA含量,经琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像系统下观察。结果中药心康口服液能明显降低心肌CVB3-RNA的含量,与病毒对照组比较差异有统计学意义,P<0.01;感染期不同阶段心肌病毒RNA含量的检测显示,心康口服液2个治疗组的病毒含量的检出,并没有随着用药时间的延长而显著降低。结论中药心康口服液能有效地影响心肌CVB3RNA的复制,其对病毒的作用是抑制复制而非杀灭。