省级药检机构国内药品注册检验管理现状思考

新版《药品注册管理办法》已实施1年,各种配套注册法规文件逐步完善,省级药检机构的国内药品注册检验管理工作亦随之逐步调整。通过梳理省级药品检验机构承接国内药品注册检验任务的范畴、分类及来源,分析相关管理工作的主要变化,提出新版《药品注册管理办法》实施工作中需注意的情况,以期为相关管理工作的开展提供更加全面的思路。     

中药类保健食品中地黄生熟异用的配方规律分析

目的:分析地黄在中药类保健食品中生熟异用下的配方规律。方法:收集国家市场监督管理总局(SAMR)特殊食品信息查询平台公布的生、熟地黄保健食品数据,对其保健功能及中药组方等进行统计,运用Apriori算法和Kulc、不平衡比参数对地黄生熟异用的保健食品配方规律进行分析。结果:保健食品中,生地黄主要用于辅助降血糖,熟地黄主要用于增强免疫力、缓解体力疲劳、改善营养性贫血。在辅助降血糖类生地黄保健食品中,生地黄主要与补气药、补阴药、解表药、解热药配伍,代表性组合为生地黄-黄芪-苦瓜;在增强免疫力类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补血药、补阴药配伍,代表性组合为熟地黄-党参-阿胶;在缓解体力疲劳类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补阳药、补阴药配伍,代表性组合为熟地黄-人参-淫羊藿、熟地黄-人参-枸杞子;在改善营养性贫血类熟地黄保健食品中,熟地黄主要与补气药、补血药配伍,代表性组合为熟地黄-黄芪-阿胶、熟地黄-黄芪-当归。结论:地黄在保健食品中的使用遵循生熟异用的规律,在不同保健功能中,组方配伍基本符合中医理论和现代医学理论,可为生、熟地黄保健食品研发提供借鉴和依据。     

基于证效相关研究清利湿热方中医功效及降血尿酸作用机制

目的：建立湿热内蕴证候大鼠模型,研究具有降血尿酸作用的清利湿热方的中医功效,以证测效揭示清利湿热降血尿酸作用机制。方法：将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、四妙丸组以及清利湿热方低、中、高剂量组,每组8只。采用饲喂高脂高糖饲料,自由饮用蜂蜜水,并隔天灌胃猪油脂或酒,建立湿热内蕴证候大鼠模型,观察清利湿热方对大鼠一般状态的影响。采用酶联免疫吸附试验检测血清热激蛋白70（HSP70）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）,促胃液素（GAS）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）含量以及血浆胃动素（MTL）、肝脏组织Na+-K+-ATP酶含量,免疫组织化学法检测胃肠组织水孔蛋白3（AQP3）、水孔蛋白4（AQP4）含量,采用蛋白质印迹法检测结肠组织中TOLL样受体4(TLR4)、核因子κBp65表达量。结果：模型组体质量下降（P<0.05,P<0.01）,HSP70、TNF-α、IL-1β升高（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,胃肠组织中AQP3表达量下降（P<0.05）,AQP4表达量上升（P<0.01,P<0.001）,GAS含量下降（P<0.01）,IgM含量升高（P<0.01）,结肠组织TLR4表达量增加（P<0.01）。清利湿热方能增加大鼠体质量,降低HSP70、TNF-α、IL-1β含量（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,升高胃肠组织AQP3表达量（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,降低AQP4表达量（P<0.05）,升高GAS、Na+-K+-ATP酶含量（P<0.05,P<0.001）,降低IgM含量（P<0.05,P<0.01）。结论：饲喂高脂高糖饲料,自由饮用蜂蜜水,并隔天灌胃油脂/酒,可以成功建立高尿酸血症湿热内蕴证候模型,清利湿热方可以从大鼠一般状态、体质量、热激蛋白以及炎症介质、水孔蛋白、胃肠激素、免疫等多方面改善大鼠湿热状态,发挥清利湿热功效。清利湿热方具有降血尿酸作用,其作用机制可能与下调TLR4,核因子κBp65有关。     

以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法的确定和验证

目的 确定并验证以白细胞介素-8 （IL-8）作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法 将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h,在光照射（1.7 mW·cm^-2,50 min）或避光处理后,细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射（光照30 min,然后避光15 min）处理。用Luminex液相芯片检测技术测定细胞培养上清和细胞裂解液中IL-8和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量并统计分析,进一步确定评价光致敏的细胞因子指标,并进行方法验证。结果 与非照射组比较,13种光致敏剂均引起照射组THP-1细胞IL-8总含量显著增加（P<0.01） ,阿伏苯宗为非照射组的1 148～2 269倍,其余12种为非照射组的6.7～195.1倍;光刺激剂经光照射后也可引起细胞分泌IL-8显著增加（P<0.01） ,但经过预照射处理后,IL-8的含量相比直接照射组显著下降（P<0.01）。未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞分泌IL-8比对照组显著增加（P<0.01） ,光照后IL-8含量虽也较非照射组显著增加（P<0.01） ,但增加的幅度小于皮肤致敏剂本身引起IL-8变化的幅度。在光照条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物均可引起细胞分泌IL-8较非照射组显著性增加（P<0.05） ,但增加的幅度较小,与对照组相似。以上受试物引起光照前后细胞TNF-α变化的幅度均与对照组相近。以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是77.8%、100.0%、68.4%,并且该方法具有良好的重复性。结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞因子标志物评价指标为IL-8,判定标准为： ①UVA照射后THP-1细胞中IL-8含量比非照射组显著增加;②UVA照射组与非照射组IL-8含量比值≥6.5;③当上述两条均满足时,对受试物进行UVA预照射处理,预处理照射组IL-8的含量与直接照射组（未经预照射）相比无显著性差异,且预处理照射组与预处理非照射组IL-8含量比值≥6.5。     

新型冠状病毒疫苗受体结合域抗原含量检测方法建立

目的 建立通用的新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)受体结合域(RBD)抗原含量检测方法。方法 以新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)RBD的重组抗体为标准品,先将疫苗中的蛋白解吸附,采用酶联免疫吸附试验检测疫苗中的RBD蛋白含量,并验证方法的线性、定量下限、准确度、精密度和稀释可靠性,同时对部分上市新冠疫苗进行检测。结果 3次试验标准曲线的决定系数(R²)分别为0.996 6,0.995 8,0.997 5(n=6);定量下限为7.81 pg/mL;批内和批间准确度均值为质控标示值的91.98%～110.16%(精密度试验)和93.68%～101.01%(稀释可靠性试验),X,Y,Z公司的加样回收率分别为86.81%,82.97%,105.41%,测定值的变异系数均小于10%。X,Y,Z公司新冠疫苗中RBD蛋白的平均含量分别为302.96 pg/mL、1 010.80 pg/mL、42.92μg/mL。结论 该方法的方法学验证指标均符合2020年版《中国药典(四部)》通则9012指导原则相关要求,可用于多种技术路线新冠疫苗的RBD抗原含量检测。     

一测多评法测定染发产品中37种染发剂的含量

目的:建立氧化型染发产品中对苯二胺等37种染发剂含量的一测多评方法,并验证该方法在染发产品质量控制中的适用性和准确性。方法:采用HPLC法,以TechMate AQUA-STⅢ(250 mm×4.6 mm, 5μm)为色谱柱,以含4%(体积分数)乙腈的乙酸铵溶液-乙腈的混合液为流动相进行梯度洗脱,利用二极管阵列检测器,于235 nm和280 nm波长下进行测定。以2-硝基对苯二胺为参照物,建立该成分与其他36个成分的相对校正因子(f_si),利用f_si计算其他成分的含量;通过实际样品测定,将一测多评的计算值与标准曲线法测定值进行比较。结果:37种染发剂在线性范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999;加标回收率为81.7%～114.8%,重复性RSD均小于5.0%(n=6)。利用一测多评法与标准曲线法测定6批样品中各染发剂成分的含量,相对平均偏差(RAD)均小于4%,测定结果基本一致。结论:建立的一测多评法可同时对染发产品中37种染发剂进行定量分析,且操作简便,结果准确,节约对照品,可为染发产品的质量控制和风险监测提供参考。     

黄豆苷元杂质谱与其生产工艺的相关性研究

目的:研究黄豆苷元的杂质谱以及与其生产工艺的相关性。方法:通过高效液相色谱[色谱柱为C₁₈柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为水-乙腈(65∶35),检测波长249 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,进样量20μL,运行时间为主成分保留时间的6倍]对最大未知杂质进行定量检测,结合高效液相色谱-离子肼质谱联用仪(一级、二级质谱)和核磁共振谱仪(氢谱、碳谱)对杂质结构进行确证。通过对生产工艺的分析研究推断杂质来源并提出工艺改进建议。结果:黄豆苷元原料药及制剂的主要杂质为杂质A,在原料药合成工艺中引入,与合成工艺中使用的N,N-二甲基甲酰胺二甲缩醛和乙醇有关。结论:本文主要研究了黄豆苷元杂质谱的液相检测方法,并利用核磁对最大未知杂质结构进行了确证,质谱研究进一步验证了异黄酮类化合物的质谱裂解规律,对生产工艺的提高、质量标准的修订以及黄豆苷元衍生物的合成研究具有重要的意义。     

基于多组分分析的痢泻灵片质量标准研究

目的 建立痢泻灵片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对痢泻灵片中拳参、穿心莲、苦参进行定性鉴别;采用HPLC对痢泻灵片中穿心莲类成分和苦参碱类成分进行测定。结果 拳参、穿心莲、苦参薄层斑点清晰,分离效果良好,重复性好。穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱在各自的浓度范围内线性关系良好,仪器精密度、重复性、稳定性、加样回收率的RSD值均符合要求。结论 建立的方法简单易操作,可用于控制痢泻灵片的质量。     

HPLC法测定奥卡西平及其制剂中有关物质

目的:建立使用C₁₈色谱柱同时测定奥卡西平及其制剂中8个杂质的高效液相色谱法。方法:采用ACE Excel C₁₈(4.6 mm×150 mm, 3μm)色谱柱,流速1.0 mL·min^-1,以6.8 g·L^-1磷酸二氢钾溶液(每1 000 mL加三乙胺2 mL,用磷酸调pH 6.0)为流动相A,乙腈-甲醇(11∶8)为流动相B,梯度洗脱,检测波长240 nm,柱温45℃。结果:奥卡西平与8个杂质分离度良好,奥卡西平和卡马西平分别在0.05～4.0μg·mL^-1和0.08～40μg·mL^-1浓度范围内呈现良好线性(r≥0.999 9),奥卡西平和卡马西平的定量限分别为1.03、0.65 ng,检测限分别为0.34、0.33 ng。共测定奥卡西平原料2个企业5批样品、奥卡西平片2个企业6批样品,其中1批原料检出杂质E,含量为0.004%;3批片剂检出卡马西平,含量分别为0.008%、0.005%、0.006%;1批片剂检出杂质C和杂质D,含量为0.006%、...     

药品微生物经典分析方法的验证探讨

本文通过研读分析药品、食品和环境微生物分析方法验证的相关规范性文件,结合药品微生物分析实践,对药品微生物经典分析方法的验证进行了研究,总结了微生物分析方法验证的考察指标,包括专属性、灵敏度、精密度、检测限和定量限、线性、范围、耐用性及方法适用性等,并阐述了各指标在药品微生物分析中的含义、测量方法、影响因素和可接受标准。为规范经典微生物分析方法的验证,获得可靠的微生物检验结果及建立相关指导原则,提供了参考依据。