TGF-β1联合IGF-1诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化的效应研究

目的 探讨TGF-β1联合IGF-1诱导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cell,hAMSC)向韧带成纤维细胞分化的效应和相关分子表达水平。方法 分离培养第3代hAMSC,过表达TGF-β1(Ad-TGF-β1)和IGF-1(Ad-IGF-1)腺病毒转染细胞后,将细胞分为空白对照组、IGF-1组、TGF-β1组和TGF-β1+IGF-1组,使用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测韧带成纤维细胞相关基因表达情况,使用细胞免疫荧光观察TGF-β1联合IGF-1对hAMSC向韧带成纤维细胞分化的特异性标志因子包括Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ),Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ),腱调蛋白(tenofovir,TNMD)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在基因和蛋白表达水平改变。结果 培养至第3代,hAMSC贴壁生长,呈长梭状、漩涡形态;TGF-β1和IGF-1过表达腺病毒转染第3代hAMSC 24h后;PCR结果显示,使用TGF-β1+Ad-IGF-1诱导第3代hAMSC后第7天时,韧带成纤维细胞相关基因包括COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、FN、TNMD的mRNA表达水平显著高于其他各组(P<0.05);细胞免疫荧光染色结果显示Ad-TGF-β1转染细胞联合IGF-1诱导第3代hAMSC后,第7天与第3天比较,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著高于其他各组。结论 体外通过使用腺病毒,高表达TGF-β1与IGF-1,可显著增强诱导hAMSC向韧带成纤维细胞分化,并且韧带成纤维细胞相关基因和蛋白水平表达明显增强。