腺病毒介导的人野生型P53、GM-CSF和B7-1基因转移有效地诱导肝癌细胞的生长抑制和凋亡

观察携带人野生型Ｐ53、ＧＭ ＣＳＦ和Ｂ7 1基因的重组腺病毒载体 (ＢＢ 10 2 )转染ＢＥＬ 74 0 2、ＨＬＥ及ＨｕＨ 7肝癌细胞后Ｐ53基因的表达 ,以及诱导肝癌细胞的增殖。ＢＢ 10 2转染肝癌后的不同时间 ,用锥虫蓝染色计数活细胞数 ,免疫组织化学法检测Ｐ53基因的表达 ,ＴｄＴ法原位检测肝癌细胞的调亡。结果表明 ,转染ＢＢ 10 2后肝癌细胞生长明显受到抑制 ,ＢＥＬ 74 0 2、ＨＬＥ及ＨｕＨ 7肝癌细胞的受抑率分别为 58.5%、81.5%及 71.1% ,其中对Ｐ53基因突变的肝癌细胞的抑制程度要大于对Ｐ53基因为野生型肝癌细胞的抑制程度 ,转染ＢＢ 1…     

小鼠及人正常组织谷胱甘肽－S－转移酶π基因与三种癌基因的分布和相互关系的研究

用Ｈａｂｉｇ改良法测定人及ＤＡＢ小鼠正常组织中谷胱甘肽－Ｓ－转移酶活性及π基因与３种癌基因的分布。人７种正常组织中ＧＳＴπＲＮＡ相对含量为４．８６～０．２５，以胎盘最高，其次为膀胱、肺、胃。小鼠的ＧＳＴ活性为１７．７～１２．４７，肝最高，其次为胃、肺和肾。ＧＳＴπＲＮＡ为１．９８～０．４２５，以胃最高，脾和肺次之，ＧＳＴ活性与ＧＳＴπＲＮＡ的检测结果基本一致。人７种正常组织中，Ｎ－ｒａｓ的相对含量为２０～２．９４，以胎盘含量最高，直肠、乳腺次之。Ｃ－ｍｙｃ为２３．４～７．３８，胎盘、肺、膀胱较高。ｖ－ｅｒｂ－Ｂ为９．０５～０．３８，以胎盘最高，直肠、胃次之。在小鼠６种组织中，Ｎ－ｒａｓ的基因相对含量为６．２３～１．０４，以肺、脾较高，胃、肝、心、肾次之。Ｃ－ｍｙｃ为１３．７６～５．３１，肺、胃较高。ｖ－ｅｒｂ－Ｂ为８．７２～２．０９，肺、胃较高，脾次之。说明ＧＳＴπ对肿瘤的发生有一定的制约作用。     

雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立

目的 建立雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型,为进一步研究雌激素受体β基因在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用提供平台.方法 用外科手术方法对16只β基因敲除小鼠进行自体子宫移植,术后14 d、21 d取病灶组织进行光镜观察分析.结果 建模成功率达95.8%,可形成明显囊肿,内含囊液,囊肿内壁有子宫内膜上皮细胞生长.结论 应用本方法可建立稳定的子宫内膜异位症转基因小鼠模型,便于研究雌激素受体β亚型及其相关基因、蛋白在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用机制.     

从人源全合成抗体库中筛选到抗人干扰素α1b单链抗体

目的研究开发人源抗huIFN—α的基因工程抗体,为系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus,SLE）的治疗提供有效的抗体药物。方法本研究利用噬菌体表面展示技术,以纯化的人干扰素α1b（huIFN-α1b）和人干扰素α2b（huIFN—α2b）蛋白为抗原从人源全合成抗体库中筛选抗huIFN-α的基因工程单链（single chain variable fragment,scFv）抗体,通过phage—ELISA对噬菌体单链抗体的结合特异性和稳定性进行验证。将单链抗体基因克隆到原核分泌表达载体pET22b上在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,通过Western blot检测单链抗体的分泌表达,并通过ELISA对单链抗体的结合特异性进行验证。通过金属螯合亲和层析纯化单链抗体,并用Western Blot对单链抗体的结合特异性进行鉴定。结果经过3轮富集筛选,获得100株对huIFN—α1b有特异性结合的噬菌体单链抗体。对得到的86株克隆的测序分析表明,共有9株带有不同的抗体轻重链可变区序列及其组合的抗体,有7株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL3家族,有2株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL1家族。获得了5株稳定且特异针对huIFN—α1b而与huIFN-α2b和huIFN-γ无交叉反应的人源单抗。这5株抗体在BL21（DE3）中分泌表达,有3株单链抗体能特异性结合huIFN-α1b而与无关抗原无交叉反应。结论通过噬菌体表面展示技术,从人源全合成抗体库中筛选得到3株稳定且特异结合huIFN—α1b的人源治疗用基因工程单克隆抗体。     

CTXФ在霍乱弧菌两个染色体上的整合分析

目的 研究是否可以在没有TLC(toxin-linked cryptic)因子的非产毒霍乱弧菌染色体上整合,以及是否可以在霍乱弧菌小染色体上整合.方法 筛选染色体上没有整合CTXФ及TLC基因组的霍乱菌株(CTX-TLC-),检测这类菌株染色体上是否有类似的CTXФ染色体整合位点attB.以含有CTXФ的RS区及整合位点的自杀质粒pKRSn与pKRSe结合转移到CTX-TLC-及CTX-TLC+菌株,观察染色体整合情况,并分析整合位置的序列.结果 CTX-TLC-菌株存在与CTXФ染色体整合位点相似的序列.在CTX+TLC-菌株当中,CTXФ基因组存在于小染色体上.自杀质粒pKRSn与pKRSe可以在TLC+及TLC-菌株的大染色体发生整合,也可以在TLC-菌株的小染色体发生整合.结论 CTXФ可以在霍乱弧菌的两条染色体上通过高度相似或一致的attB位点发生整合,另外也提示TLC在CTXФ的大染色体整合中可能发挥作用.     

肋骨骨髓树突状细胞的诱导及在肿瘤免疫治疗中的应用前景

树突状细胞 (ＤＣｓ)是专业性抗原递呈细胞 ,在肿瘤免疫中起重要作用。在临床实验研究中 ,大多利用患者外周血干细胞诱导扩增ＤＣｓ,我们从肾癌患者手术切除的肋骨骨髓中获得ＤＣｓ ,对诱导方法及ＤＣｓ特性鉴定报告如下。材料与方法　ＧＭ ＣＳＦ为美国先灵葆雅药厂产品 ;ＩＬ 4和ＴＮＦ α由军事医学科学院生物工程所惠赠 ;ＣＤ80、ＣＤ86和ＣＤ1ａ纯化单抗为Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司产品 ;标记抗体ＣＤ45、ＣＤ14、ＣＤ4、ＣＤ8、ＣＤ3、ＨＬＡ ＤＲ为Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ公司产品。树突细胞的获得和培养 :从肋骨冲出的细胞 ,经密度梯…     

ULBP1启动子报告质粒的构建及NS3/4A蛋白对ULBP1基因转录的作用

目的: 构建含有ULBP1基因启动子的报告质粒, 并初步研究NS3/4A对ULBP1转录的影响.方法: 将ULBP1启动子核心区序列连接在pGL3-enhance载体上构建ULBP1报告质粒pGL3-ULBP1质粒;将HCV的蛋白酶NS3/4A基因亚克隆到pcDNA3-Flag载体上(pcDNA3-Flag-NS3/4A), Western blot 检测其表达.用荧光分度计检测NS3/4A对ULBP1转录水平的影响.结果: 成功构建了含有ULBP1启动子的报告质粒pGL3-ULBP1和FLAG-NS3/4A真核表达质粒, 并检测到NS3/4A可以抑制ULBP1的转录.结论: HCV的蛋白酶NS3/4A可以抑制ULBP1的转录.     

中国南海织锦芋螺毒素的分离及鉴定

目的从中国南海织锦芋螺中分离新的芋螺毒素,为药物发现、药物设计提供新的活性多肽或前体多肽,比较不同地域织锦芋螺毒素的构成,研究环境对织锦芋螺毒素分泌的影响。方法织锦芋螺毒液经预处理后,凝胶层析分离粗毒,用HPLC进一步分离,氨基酸测序。结果分离得到了10余个织锦芋螺毒素组分,确定了10个织锦芋螺毒素的氨基酸序列,其中4个为新型织锦芋螺毒素,6个与已报道的相同。结论中国南海织锦芋螺毒液中含有丰富的M族芋螺毒素,毒素成分与菲律宾宿务岛(Cebu)、马尼拉岛的织锦芋螺相似。     

鼠疫耶尔森菌菌株91001的蛋白质组学初步研究

目的建立鼠疫耶尔森菌的蛋白质组学研究方法,获得鼠疫耶尔森菌的基本蛋白质组数据。方法以对人无致病能力的布氏田鼠疫源地菌株91001为研究对象,按照溶解性的不同分别收集菌体蛋白,以3种不同方法(Shotgun-LC-MS-MS,1D-LC-MS-MS和2D-MS)进行分析,将分析数据与基于91001菌株基因组全序列建立的蛋白质理论数据库进行比对,确定91001菌株本实验培养条件下所表达的蛋白组分。结果Shotgun-LC-MS-MS方法鉴定了971种蛋白,1D-LC-MS-MS鉴定了915种,而2D-MS方法则鉴定了233种蛋白质,三者合计为1193种蛋白质,占基因组预测CDS的28．7％(1193／4143)。结论不同的蛋白质组分析方法鉴定的蛋白质种类和数目都存在差异,为更全面地获得鼠疫耶尔森菌蛋白质组数据,有必要同时采取多种方法进行分析。