小鼠小肠上皮细胞经γ射线照射后蛋白质组差异分析

目的　分析γ射线照射后 ,在辐射损伤期和修复期小鼠肠上皮细胞蛋白质组的改变 ,以探讨肠上皮细胞损伤与修复的分子机理。方法　采用 9Gy全身照射BALB c小鼠 ,分别于照射后3h和 72h取小肠制备卷肠切片 ,染色并观察小肠形态。分离未照射小鼠及照射后 3h和 72h小鼠的肠上皮细胞 ,制备蛋白样品 ,采用双向电泳技术分离样品 ,PDQuest软件处理双向电泳图谱 ;并对差异的蛋白质点进行肽质量指纹分析。结果　小鼠肠上皮在照射后 3h以损伤性改变为主 ,72h后出现明显再生修复。采用双向电泳技术在正常对照组、照射后 3h组以及照射后 72h组分别检测到(6 38± 39)、(5 6 6± 32 )和 (5 91± 2 9)个蛋白质点。对其中 2 8个差异蛋白质点进行了肽质量指纹分析 ,经数据库检索 ,初步鉴定为一些与代谢、过氧化应急、信号转导相关的蛋白质。结论　电离辐射能诱导小鼠肠上皮细胞蛋白表达的改变 ,双向电泳技术对从整体方面揭示辐射损伤的分子机理有重要价值。     

白细胞蛋白酶抑制因子促进真皮间充质干细胞增殖的机制

目的研究白细胞蛋白酶抑制因子（secretory leukocyte protease inhibitor，SLPI）对真皮间充质干细胞（dermal mesenchymal stem cells，dMSCs）的增殖作用及其机制。方法利用贴壁生长的特性分离dMSCs，细胞在无血清IMDM培养液中培养48h后，加入不同浓度的SLPI，24h后加入[H^3]Thymidine，通过液闪计数器计数。提取对照组和SLPI作用后细胞的总RNA和蛋白，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测SLPI因子作用前后cyclin A、CDK2、CDK4的变化，Western blot检测SLPI因子作用前后cyclin D1、cyclin E的表达变化。结果分离的大鼠dMSCs呈梭形．在体外显示多向分化潜能。加入SLPI因子后，[H^3]Thymidine掺人活性增强。RT—PCR提示在SLPI诱导下，CDK2表达增强，而cyclin A和CDK4表达没有明显变化，Western blot提示SLPI因子作用后cyclin DI、cyclin E表达均明显增强。结论SLPI能够促进dMSCs的增殖，其机制可能是通过调节cychn D1、cyclin E、CDK2等细胞周期素的表达。