食管癌干细胞辐射抗性与相关蛋白表达的研究

目的 探讨NS398联合X射线照射对食管癌干细胞和贴壁肿瘤细胞辐射增敏效应的差异,并分析食管癌干细胞的辐射抗性及其与相关蛋白表达的关系。方法 采用无血清培养基分离细胞系ECA109的食管癌干细胞;流式细胞仪检测细胞表面标记物CD44+和CD271+的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测NS398联合不同照射剂量(0、4和8 Gy)对细胞增殖能力作用的联合效应;克隆形成实验检测NS398对亲本细胞和细胞球辐射增敏效应的差异;Western blot检测细胞内4种相关蛋白的表达水平。结果 在无血清培养基中可分离培养稳定传代的肿瘤干性细胞球。细胞球CD271+的表达高于亲本细胞(t=3.81,P<0.05)。照射后细胞球增殖能力大于亲本细胞。NS398联合照射时,亲本细胞的存活分数(SF₂)小于细胞球(t=2.91,P<0.05),NS398对亲本细胞的SER大于细胞球。细胞球内Bmi-1、c-Myc、β-catenin和CyclinD1的表达水平较亲本细胞均升高(t=8.09、7.90、7.50、7.15,P<0.05);4 Gy照射后细胞内CyclinD1的表达水平均升高(t=9.74、6.67,P<0.05);NS398联合4 Gy照射组与4 Gy照射组相比,亲本细胞β-catenin和CyclinD1表达水平降低(t=10.15、12.12,P<0.05),细胞球β-catenin和Cyclin D1表达水平亦降低(t=3.23、7.45,P<0.05)。结论 无血清培养基分离培养的食管癌干细胞高表达干细胞表面标记物CD271和干细胞相关蛋白,并具有辐射抗性,其机制可能与β-catenin分子及其下游靶蛋白的表达水平有关。