恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan的病理学观察

目的：前人的研究证实大脑内存在降解Aβ关键酶neprilysin（NEP）,注射NEP的抑制剂thiorphan能够在啮齿类诱发神经元淀粉样蛋白水平升高。但是没有注射thiorphan后对啮齿类大脑病理学观察的报道,更加没有恒河猴身上这方面的实验数据。本课题组拟用该法建立AD模型,就建立AD模型而言需要获得病理学方面的数据,因此,本实验观察Aβ1-42和thiorphan对恒河猴大脑皮质,基底核等部位的毒性影响,为注射thiorphan和Aβ建立恒河猴AD模型提供数据准备。方法：开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色法观察大脑上述部位的形态学改变。结果：实验组以注射位点为中心呈阶梯状,越靠近注射位点神经元的消失就越严重。局部液化坏死,呈筛孔状改变,神经元丢失。可见萎缩神经细胞,大量小胶质细胞增生,噬神经元现象显著。结论：Aβ1-42和Thiorphan联合颅内给药后引起神经元丢失及小胶质细胞增生。     

颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42和thiorphan对恒河猴脑内淀粉样β蛋白表达的影响

目的探讨颅内注射淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)和thiorphan对恒河猴脑内Aβ表达的影响。方法将恒河猴随机分为模型组(n=3)和正常对照组(n=1),模型组开颅后于大脑皮质和基底神经节先注射thiorphan以消耗已存在的脑啡肽酶,然后缓慢注射纤丝状Aβ1-42,再植入含有thiorphan的微渗透泵到基底神经节,持续28d;正常对照组仅注射生理盐水。至50d时处死恒河猴,开颅取大脑,免疫组织化学法观察海马、基底神经节和大脑皮质等部位Aβ1-42的表达。结果正常对照组恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应阳性,30个高倍视野(×400)的积分吸光度(IA)分别为0.22±0.06,0.20±0.04和0.19±0.07。模型组3只恒河猴海马、基底神经节和大脑皮质Aβ1-42免疫反应均明显增强,海马IA分别为0.57±0.05,0.60±0.05和0.61±0.05;基底神经节IA分别为0.62±0.06,0.63±0.05和0.65±0.05;大脑皮质IA分别为0.67±0.06,0.68±0.05和0.65±0.07。结论颅内联合注射Aβ1-42和thiorphan可增加脑内Aβ1-42的表达。     

恒河猴大脑注射Aβ1-42和Thiorphan诱发脑内广泛炎症反应

目的：观察颅内给Aβ1-42和thiorphan后是否可以在恒河猴大脑内诱发类似AD患者的炎症反应．探讨该法建立猕猴AD模型的可行性。方法：开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ1-42,后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核。HE染色及免疫组化观察大脑的炎症反应情况。结果：HE染色显示侧脑室室管膜的单层上皮结构消失．大量小胶质细胞浸润,形成多细胞层,小胶质细胞增生聚集成灶。免疫组化结果显示实验组恒河猴海马、基底核及皮质等部位出现星形胶质细胞增生。结论：Aβ1-42和thiorphan联合颅内给药后可以在恒河猴大脑内诱发广泛的炎症反应。     

类固醇肌萎缩症与上皮钠通道表达的实验研究

目的 基于类固醇肌萎缩症(SMA)大鼠模型,分析大鼠骨骼肌萎缩与其上皮钠通道蛋白(ENaC)表达的相关性,探讨ENaC在SMA发病机制中的可能作用.方法 将32只3个月龄雌性SD大鼠分为4组分别给药:对照组(C组)每周4次肌内注射生理盐水;低频给药组(L组)、中频给药组(M组)和高频给药(H组)分别予以每周2、4、6次肌内注射地塞米松(Dex)每次1.0 mg/kg.给药4周停药处死,取腓肠肌称质量,石蜡包埋制片,行苏木精-伊红(HE)染色形态学观察,肌纤维横截面积(FCSA)测量,以及糖皮质激素受体(GR)和旷上皮钠通道蛋白(α-ENaC)免疫组织化学检测(IHC)及其相关性分析.结果 (1)各给药组大鼠体质量和腓肠肌湿质量均较C组下降,且有剂量依赖性.(2)各给药组FCSA均较C组减少,且有剂量依赖性.(3)GR的M和H组积分光密度(IOD)值较C组增高;α-ENaC的L、M和H组IOD值较C组增高,且有剂量依赖性;GR和α-ENaC的IOD值变化呈正相关.结论 GC诱导骨骼肌组织ENaC表达增高,可能与SMA的肌萎缩病变相关.     

不同品系小型猪对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的敏感性筛选

目的 筛选对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)敏感的小型猪品系, 以用于HP-PRRS活疫苗的评价。方法 本研究选择蓝塘猪、蕨麻小型猪、巴马小型猪、五指山小型猪(白系)接种PRRSV NVDC-JXA1株强毒, 并以本地二元杂猪作为对照。攻毒后每天观察动物精神、食欲、死亡等情况, 死亡动物进行剖检, 并采取肺组织做RT-PCR检测病毒, 连续观察5周, 试验结束时采取存活动物血清分别检测PRRSV抗体。结果 攻毒后各组都有动物出现精神沉郁、食欲下降、死亡等现象, 死亡动物RT-PCR检测都显示为阳性, 存活动物PRRSV抗体检测阳性。从死亡率看, 巴马小型猪和五指山小型猪白系对PRRSV NVDC-JXA1株强毒的敏感性最高, 并且敏感性超过了对照组二元杂猪。结论 巴马小型猪和五指山小型猪白系对HP-PRRSV敏感, 可用于HP-PRRS活疫苗的检验。     

胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的 建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌(Helicobacter bilis,H.bilis)TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的qPCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。结果 所建立的qPCR检测方法,质粒DNA浓度在10⁸~10¹拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR(7.8%)的检出率高。结论 建立的H.bilis qPCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。     

水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响

目的研究我国南海区某海洋钻井水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响。方法在19.75~158 mg/L浓度下,对3月龄诸氏鲻虾虎鱼染毒,并用试剂盒法测定超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果 SOD对水基钻井液的毒性暴露不太敏感,在染毒第1天只有最低浓度组受到一定程度的抑制,染毒第2天各浓度组酶活性均受到一定程度的诱导(12.4%~25.5%),这种诱导作用在第4天即有所减弱,之后酶活性的变化变缓。CAT则对水基钻井液表现出较强的敏感性。染毒第1天,各组酶活性均受到明显的诱导,并且各组酶活性表现出明显的浓度效应关系。最高浓度组酶活性最大诱导率达到97%(P0.05)。随后虾虎鱼CAT酶活性逐渐下降,第7天,各染毒组酶活性的抑制率达到58.4%~89.1%。结论 CAT在中毒反应中表现出了敏感性,具备了作为生物标志物的重要条件,有望在今后的实际应用中发挥作用。     

BMPs在中枢神经系统发育和神经保护中的作用

骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是转化生长因子-β(transforming growth factor-β)超家族的成员,现已经发现BMPs很多亚型BMP分子在神经系统的不同区域呈持续性表达,但是表达在空间和时间具有差异性,提示不同亚型BMPs的功能在神经系统也存在差异。本文主要就BMPs在中枢神经系统发育中的作用和神经保护功能作一综述。     

中国大陆柯萨奇病毒A组16型全基因参照序列的初步建立和分析

目的 建立中国大陆柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)流行株的全基因参照序列.方法 从GenBank中获得CoxA16中国大陆分离株的所有全基因序列和氨基酸序列,用DNAstar/MegAlign软件对所得序列进行多序列比对和进化分析,按照参照序列标准拟定CoxA16的全基因参照序列和氨基酸序列,并与参考序列进行比对分析.结果 中国大陆分离的CoxA16毒株全基因序列共8株,分离于2005-2009年,其中2008年5株,广东省5株;通过序列比对获得了大陆CoxA 16全基因和氨基酸参照序列;参考毒株间核苷酸序列同源性介于79.0％～98.8％,氨基酸序列同源性为94.3％～99.9％,与参照序列的核苷酸同源性为79.7％～97.0％,氨基酸同源性介于95.1％～99.5％之间,同源性最低的为2008年安徽阜阳的FY18株.结论 比对分析了中国大陆CoxA16毒株全序列,成功建立了中国大陆CoxA16全基因和氨基酸参照序列.