HLA-DR位点的基因芯片分型与临床应用

目的：建立一种新型的HLA－DR位点的基因分型方法，为HLA－DR的基因分型提供一个较新的思路。方法：利用基因芯片技术HLA不同基因亚型的独特序列设计探讨，制成分型芯片；待检测样品经PCR反应标记上荧光之后，与芯片进行杂交，根据杂交产生的荧光信号值分析确定样品DR位点的基因亚型，将这一方法应用于70份标准DNA和200份医院移植供受者的HLA－DR基因分型并将部分样品进行基因测序。结果：检测结果表明HLA－DR基因分型芯片可准确分辨出DR位点等位基因30大类，耗时3h 。结论：基因芯片用HLA－DR的基因分型，分辨率高，特异性强，重复性好，操作简便，对比常规的PCR－SSP和PCR－SSO方法，HLA－DR基因芯片方法更为直观，并具有集成化优势。可以在一张芯片上同时检测HLAⅠ类的A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用和骨髓库，脐血库的建立。     

调节性DC分泌的外体诱导免疫耐受功能的体外研究

为了探讨树突状细胞(DC)分泌的外体(Dex)在诱导T细胞免疫耐受中的作用,体外研究采用供体Dex降低同种异体移植排斥的可能性。从正常人外周血单个核细胞中诱导培养未成熟DC(imDC),用TGF-β1联合IL-10诱导调节性DC,LPS诱导DC成熟。采用流式细胞术方法观察TGF-β1和IL-10对DC表型、吞噬功能的影响;采用超速离心和超滤的方法提纯Dex;Western blot方法检测imDC分泌的Dex(imDex)与调节性DC分泌的Dex(rDex)表达的相关分子;通过CCK-8法分析异源iDex和mDex在混合淋巴细胞反应(MLR)中的生物学功能,并比较rDex与iDex诱导免疫耐受的能力。结果显示,TGF-β1和IL-10可下调DC表面的共刺激分子CD80、CD83、CD86的表达,并诱导调节性DC分泌更多的rDex;异源的mDC分泌的Dex(mDex)在mDC存在时增强MLR,而异源的imDex在imDC存在时一定程度上抑制MLR,rDex诱导的抑制T细胞增殖作用显著强于iDex;rDex表达更多的FasL,提示TGF-β1和IL-10诱导的调节性DC分泌的rDex在免疫耐受中发挥重要作用,有望应用于同种异体移植抗免疫排斥。     

红、白系细胞具有不同形式的KEL基因mRNA 转录本

目的 了解不同细胞KEL基因转录本的差异.方法 分别抽取K阴性、K阳性、K0的DNA、红系细胞RNA和总RNA,应用逆转录PCR、巢式PCR分别扩增、测序及克隆测序分析KEL基因第1～19外显子以及第2～8外显子.同时,4种单抗标记后流式细胞术检测红、白细胞上的Kell蛋白表达情况.结果 红系RNA均为忠实于基因组序列的正常KEL转录本,而K0产生4种不同的转录本.但总RNA作模板时,可以发现不同个体产生不同的转录本,以正常、缺失第3外显子、第7外显子之前插入16 bp内含子的转录本为最常见,这些异常拼接也见于K0的红系RNA;总RNA第1～19外显子扩增片段虽然电泳条带只有一条,但测序显示为多种序列的混合.流式细胞技术检测证实K0红细胞上无Kell抗原的表达,其余个体的红细胞均有Kell抗原的强表达,但其白细胞上有不同程度Kell抗原的弱表达或无表达.结论 KEL基因在不同细胞中存在不同的转录本,可能导致Kell抗原在红、白细胞上有表达或无或弱表达.证实了KEL基因的表达转录研究中红系mRNA比总RNA更可靠.     

慢性病毒性肝炎与宿主基因

肝炎病毒感染后可呈现不同的转归,这种情况除与病毒的毒力有关外,与宿主对病原体感染的敏感性(即与宿主的遗传多态性)有一定的关联。本文就乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染的转归与人类白细胞抗原、肿瘤坏死因子-α、甘露糖结合蛋白、血色素沉着蛋白、Vit D受体基因多态性的相关性作了综述。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

六亚甲基二乙酰胺对K562细胞作用的实验研究

目的：研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）体外对K562细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化的作用。方法：MTT法检测不同浓度HMBA对于K562细胞的增殖抑制率；流式细胞仪（FCM）检测HMBA对于K562细胞周期分布的影响；Annexin V／PI染色方法检测HM—BA诱导K562细胞凋亡的作用；通过瑞氏染色、联苯胺染色和FCM检测分化抗原研究K562细胞分化情况。结果：HMBA可以抑制K562细胞增殖，1、2、3和4mmol／L对K562细胞增殖抑制率分别为21．97％、36．05％、41．56％和47．59％；HMBA可以阻滞K562细胞周期，主要表现为G0／G1期的阻滞；HMBA诱导K562细胞凋亡的作用不明显，4mmol／L的HMBA对K562细胞诱导凋亡率〈5％；HMBA处理后，瑞氏染色显示K562细胞有一定程度的成熟表现，联苯胺染色基本为阴性；K562细胞膜表面CD11b、CD14、CD68和胞质内溶茵酶抗原的表达在HMBA处理前后均为阴性。结论：HM—BA可以抑制K562细胞的增殖，提示具有一定的治疗作用；HMBA对K562的作用机制和阻滞细胞周期有关，诱导凋亡不是主要作用机制；HMBA有促进K562细胞分化的迹象，但分化方向和机制有待进一步研究。     

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎后TGF-β1及肝纤维化指标的变化观察

目的探讨IFN -α对慢性乙型病毒肝炎抗肝纤维化的治疗作用。方法 :血清TGFβ1检测采用酶联免疫吸附试验法 ,HA、LN和PCⅢ测定均采用放射免疫法。结果 :治疗前两组患者的血清TGFβ1、HA、LN和PCⅢ无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗组在治疗后TGFβ1、HA、LN和PCⅢ都比治疗前有明显下降 (P <0 .0 1) ,而对照组治疗前后统计学无意义 (P >0 .0 5 )。且HBeAg转阴率与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :IFN -α具有一定的抗肝纤维化作用。     

抗慢性粒细胞性白血病bcr/abl mRNA真核表达载体的构建

目的：构建一个含M1RNA、具有特异性抗慢性粒细胞性白血病（CML）细胞融合基因bcr/ablmRNA的真核表达载体，以用于CML的分子靶向治疗。方法：以pTK117为模板，通过PCR方法合成一个带有导引序列（GS）的M1RNA，再将PCR产物克隆到真核表达载体pNAV-1上，得到重组质粒pAVGS4，转化大肠埃希菌JM109，以碱裂解法小量抽提，酶切电泳鉴定，并测序鉴定。结果：以EcoRI和SalI酶切、1％的琼脂糖凝胶电泳显示在500和6500bp附近各有一条明亮的条带。应用PCR方法测序的结果与模板序列一致。结论：构建的pNAV-1经酶切和测序鉴定，与目标序列一致，含有核酶、具有抗bcr/abl mRNA的真核表达载体构建成功，预期可用于CML细胞株和原代细胞的实验研究。     

血液信息系统网络设计

2006年起,卫生部陆续颁布的"一法两规"(<血站管理办法>、<血站质量管理规范>和<血站实验室质量管理规范>)提出了血站必须运用计算机管理采供血和相关服务过程,以保障血液的质量和安全的要求.     

血液保存液枸橼酸钠室内质控的探讨

枸橼酸钠作为抗凝剂在血液保存液中应用广泛,但用于临床之前需经过严格地质量检测.笔者从1997年起运用室内质控方法,对枸橼酸钠的检测采取了批、次室内自我质量控制,对保证和提高检测结果的准确性和可靠性有显著意义.