PIK3C3与SMAD4在胰腺癌中的表达及作用

背景与目的 III型磷脂酰肌醇3-激酶（PIK3C3）及SMAD家族成员4（SMAD4）参与的信号通路与胰腺癌（PAAD）关系密切,但两者与PAAD发生及预后是否有关尚不十分清楚。本研究初步探究两者在PAAD中的表达及其对患者预后的影响。方法 利用UALCAN在线网站分析PIK3C3 mRNA和SMAD4 mRNA在PAAD中的表达及两者各自对PAAD患者预后的影响;从TCGA数据库下载PAAD患者PIK3C3 mRNA和SMAD4 mRNA的表达数据和相应临床病理资料,基于PIK3C3和SMAD4联合的mRNA表达水平,用一致性聚类分析将PAAD患者分为两个聚类,用Kolmogorov-Smirnov检验及Kaplan-Meier法分析两个聚类患者PIK3C3与SMAD4的mRNA表达模式、临床病理因素和总体生存率的差异;用免疫组化的方法检测PAAD和癌旁组织组织芯片中PIK3C3及SMAD4蛋白表达水平,并用独立样本t检验及ROC曲线下面积（AUC）评估两个蛋白在癌和癌旁组织中的差异;采用Kaplan-Meier的方法分析PIK3C3和SMAD4的蛋白水平单独及联合对PAAD患者生存的影响。结果 分析结果表明,PIK3C3 mRNA或SMAD4 mRNA水平在PAAD中均无明显变化,并且两者单独均不影响PAAD患者的预后（均P>0.05）。PAAD中与PIK3C3 mRNA与SMAD4 mRNA具有较高的共表达相关性。两个聚类的PAAD患者之间,两基因的mRNA水平及年龄有明显差异（均P<0.05）,其中,PIK3C3 mRNA及SMAD4 mRNA均高表达聚类的PAAD患者预后较好（P=0.006）。PAAD组织中PIK3C3和SMAD4的蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（均P<0.001）,AUC分别为0.7417及0.7991。PIK3C3和SMAD4蛋白之一阳性患者比两蛋白均阴性的患者预后更好（P=0.0359）。结论 PIK3C3和SMAD4蛋白可作为PAAD潜在的诊断标志物,PIK3C3和SMAD4联合分析可成为PAAD患者预后评估的新指标。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及HIF-1α mRNA表达的影响

目的:研究常氧条件下姜黄素对Hep1细胞的增殖及HIF-1α mRNA表达的影响。方法CCK-8法检测常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞增殖的影响;用终浓度为15μmol/L姜黄素对体外肝癌细胞系Hep1细胞进行干预,流式细胞术分析Hep1细胞凋亡的变化;常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞作用24h后,RT-PCR检测Hep1细胞HIF-1α mRNA表达水平的变化。结果:5、10、15、20μmol/L的姜黄素在作用1周后,呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞增殖;流式分析显示15μmol/L的姜黄素使Hep1细胞凋亡率增高,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,10μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),15、20μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高更为显著(P0.01)。结论:常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞的增殖,促进Hep1细胞的凋亡和HIF-1α mRNA的表达,常氧条件下姜黄素抑制肝癌Hep1细胞增殖的机制可能与缺氧条件下姜黄素的抑瘤机制有所不同。     

影响安罗替尼临床疗效和预后的多因素分析

目的:观察经过安罗替尼治疗的不同瘤种恶性肿瘤患者的相关指标,探索影响安罗替尼临床疗效和预后的因素。方法:2018年7月至2019年12月使用安罗替尼治疗的晚期恶性肿瘤患者101例,取患者治疗过程中的血液,用ELISA法和实时荧光定量PCR法检测血清中VEGF、FGF、c-Kit、Bcl-2、PARP蛋白含量和mRNA相对表达量。另一方面,评价安罗替尼的疗效和随访观察PFS。结果:全部病例的总的中位PFS为4.8月（95%CI:3.8~5.8）,PR 18例（17.82%）,SD 61例（60.40%）,PD 22例(21.78%),ORR 17.82%,DCR 78.22%。TSH升高患者的DCR较未发生者高（P=0.039 0）。既往曾使用铂类化疗者较未使用者具有更长的中位PFS（5.3月 vs 3.6月,Log-rank P=0.038 0）,TSH升高患者较未升高患者的中位PFS显著延长（6.4月 vs 4.0月,Log-rank P=0.046 0）,发生手足综合征者中位PFS较未发生者显著延长（11.4月 vs 4.2月,Log-rank P=0.021 0）。血清bFGF的蛋白含量（P=0.009 0）及Bcl-2 mRNA相对表达量（P=0.012 0）是安罗替尼治疗晚期恶性肿瘤预后的独立影响因子。结论:血清bFGF含量及Bcl-2 mRNA表达量是安罗替尼疗效的独立影响因素;既往曾使用铂类、发生手足综合征和促甲状腺素升高者具有更长的PFS。     

慢性乙型病毒性肝炎中Bcl-2及Bax的表达与T、B淋巴细胞数量变化的关系

目的:研究Bcl-2及Bax在慢性乙型病毒性肝炎(简称慢乙肝)患者肝组织中淋巴细胞的表达与T、B淋巴细胞数量变化的关系.方法:用免疫组织化学的方法,检测57例慢乙肝患者肝脏活检组织和20例肝血管瘤患者外科手术切除标本正常肝组织淋巴细胞中Bcl-2,Bax的分布及数量的变化,并同时进行CD3和CD20免疫组织化学染色,计算T和B淋巴细胞数量变化与表达Bcl-2、Bax的淋巴细胞数量变化的关系.阳性细胞的计数和分析数据均使用病理图像分析仪获得.结果:随着肝炎炎症活动度和纤维化程度的增加,慢乙肝患者肝组织中表达Bcl-2、Bax的淋巴细胞数量增加,同时T、B淋巴细胞数量也增多,均明显多于正常肝组织(P＜0.01).结论:Bcl-2、Bax在慢乙肝患者肝组织淋巴细胞中的表达与T、B淋巴细胞数量的变化有关,并影响慢乙肝患者炎症活动度和纤维化程度的进展.     

EGCG联合放疗治疗鼻咽癌裸鼠移植瘤模型

目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应及survivin和VEGF的表达及意义.方法 体外培养低分化鼻咽癌CNE-2细胞,接种于20只雄性裸鼠皮下,待肿瘤结节约4～6 mm时,随机分为生理盐水组、EGCG组(30 mg/kg)...     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响

目的研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂RG50864对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肺动脉平滑肌细胞增生的影响。方法用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用细胞计数法,噻唑蓝(MTT)比色法及Giemsa染色法对PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生等情况进行分析。结果与对照组相比,RG50864处理组能在24、48、72h显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生,且呈剂量依赖性。结论RG50864可显著地抑制PDGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增生。     

原发性肝癌Twist基因表达的研究

目的：研究Twist基因在人原发性肝癌（primary liver cancer,PLC）组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SABC染色方法检测45例PLC组织及癌旁组织中Twist蛋白并采用RT-PCR对TwistmR-NA的表达进行分析研究。结果：PLC组织、癌旁组织及正常肝组织中Twist的阳性表达率分别为80.0%、57.8%和22.2%。PLC和癌旁组织与正常对照肝组织中Twist的表达相比较差异均有统计学意义,P〈0.05。肿瘤包膜也可见Twist表达。RT-PCR检测Twist结果显示,PLC组织中Twist mRNA表达显著上调。结论：PLC组织中高表达转录因子Twist对肿瘤的发生、发展起着重要作用。     

改进型颈动脉注射法构建裸鼠脑转移瘤模型

目的 建立桡足类超绿色荧光蛋白（copepod super green fluorescent protein,copGFP）与纳米荧光素酶（nano luciferase,Nluc）标记的MHCC97-H人肝癌细胞株,通过改进型颈动脉注射法构建应用小动物活体成像系统观察的裸鼠脑转移模型。方法 使用携带目的基因的慢病毒载体质粒通过磷酸钙法转染293FT细胞,包装慢病毒后感染MHCC97-H细胞,经嘌呤霉素筛选感染阳性细胞,通过有限稀释法纯化得到稳定表达copGFP及Nluc的单克隆细胞株。通过改进型颈动脉注射法构建裸鼠脑转移模型,应用活体成像系统监测颅内转移灶生长情况。结果 成功建立了copGFP与Nluc标记的MHCC97-H肝癌细胞稳定株。分别使用稳定株与原始株细胞通过改进型颈动脉注射法造模,2组荷瘤裸鼠体质量变化及生存曲线无统计学差异,使用稳定株造模裸鼠可通过活体成像系统实时监测到脑转移的形成,所检测生物发光信号强度随肿瘤生长逐渐增强。结论 经copGFP与Nluc标记的MHCC97-H人肝癌细胞通过改进型颈动脉注射法成功构建裸鼠脑转移模型,可通过活体成像系统进行无创、连续可视化监测,为肝癌脑转移机制的研究及治疗药物的研发提供理想的动物模型。     

2型糖尿病高尿酸患者动脉粥样硬化与白细胞介素10和脂联素的关系

目的探讨2型糖尿病高尿酸血症患者动脉粥样硬化与血清白细胞介素10(IL-10)和脂联素之间的关系。方法分别检测2型糖尿病高尿酸患者合并动脉粥样硬化65例(高尿酸组)、2型糖尿病患者合并动脉粥样硬化68例(尿酸正常组)、正常对照组30例的血尿酸、血清IL-10和脂联素等指标,分析与动脉粥样硬化的关系。结果高尿酸组、尿酸正常组血清IL-10水平显著低于正常对照组,高尿酸组血清IL-10水平低于尿酸正常组;高尿酸组、尿酸正常组血清脂联素水平显著低于正常对照组,高尿酸组血清脂联素水平低于尿酸正常组;相关分析显示:内膜中膜厚度与IL-10、脂联素呈负相关,与稳态模型法胰岛素抵抗指数、血尿酸呈正相关。多元线性逐步回归分析显示,进入回归方程的因素有IL-10、脂联素、血尿酸、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、稳态模型法胰岛素抵抗指数、收缩压和糖化血红蛋白。结论血清IL-10、脂联素水平降低与胰岛素抵抗、高尿酸血症密切相关,共同参与了糖尿病动脉粥样硬化的发生发展。     

柿叶多糖对糖尿病小鼠降血糖作用及其机制研究

目的:研究柿叶多糖对链脲佐菌素糖尿病小鼠的降血糖作用及其作用机制。方法:将实验小鼠随机分成5组:正常对照组、模型组、格列本脲组(25 mg.kg-1.d-1),柿叶多糖低、高剂量组(150,600 mg.kg-1.d-1)。ig给于药物15 d,并在相应时间采血测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)、丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD)等指标。结果:高剂量的柿叶多糖能较明显的改善糖尿病小鼠的葡萄糖耐量(P<0.01),低、高剂量组均能显著降低糖尿病小鼠的血糖水平(P<0.05),有效降低肝组织MDA值,相应增高SOD活力,并能显著增加胰岛素敏感指数(ISI),改善胰岛素抵抗状态。结论:柿叶多糖具有较强的降血糖作用,可能与其能提高小鼠肝脏抗氧化酶活性、改善胰岛素抵抗等有关。