LncRNA ABHD11-AS1在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其机制

［摘要］目的： 探讨长链非编码RNA(long non coding RNA,lncRNA)α/β 水解酶结构域蛋白11的反义链1(α/β hydrolase domain containing protein 11 antisense strand 1,ABHD11 AS1)在Erastin诱导的胰腺癌细胞铁死亡中的作用及其潜在机制。方法: 通过GEPIA平台分析ABHD11 AS1在胰腺癌中的表达和患者预后。采用荧光实时定量PCR(qRT PCR)检测人胰腺癌PANC1、MIApaca 2和PaTu8988细胞中ABHD11 AS1表达,CCK8法计算Erastin半数抑制浓度(IC50)。在PANC1细胞中过表达ABHD11 AS1,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1 ABHD11 AS1质粒;在PaTu8988细胞中干扰ABHD11 AS1表达,分别转染siControl、siRNA1、siRNA2,qRT PCR检测转染效率,分别予以对照(0 μmol/L Erastin)、Erastin(IC50浓度)处理,CCK8法检测细胞活性,ELISA法检测丙二醛和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量;另在pcDNA3-1-ABHD11-AS1和siRNA1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin 1,坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂Z-VAD-FMK,CCK8法检测细胞活性;免疫印迹法检测5组胰腺癌细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)以及磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平。结果: 胰腺癌组织中ABHD11-AS1表达水平明显高于癌旁组织,高表达ABHD11-AS1组患者预后较差(P<0.05)。ABHD11-AS1相对表达量由低到高依次是人胰腺癌PANC1、MIApaca 2和PaTu8988细胞,Erasin IC50趋势与ABHD11 AS1表达量相同,依次是2.245、11.760、17.120 μmol/L。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1 ABHD11 AS1组细胞活性及GSH含量明显增高,而丙二醛含量明显降低(P<0.05);与siControl组相比,siRNA1组和siRNA2组细胞活性及GSH含量明显降低,丙二醛含量明显增高(P均<0.05)。仅Ferrostatin-1可以挽救pcDNA3.1-ABHD11 AS1和siRNA1组细胞活性(P<0.05)。过表达ABHD11 AS1可促进mTOR活化,增强GPX4表达(P<0.05);而干扰ABHD11 AS1则相反。结论: LncRNA ABHD11 AS1可通过活化mTOR促进GPX4表达,从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。     

艾迪注射液对肺癌细胞A549放射增敏作用的实验研究

目的研究艾迪注射液对人肺腺癌细A549放射增敏作用及机制。方法（1）MTT法测定药物对细胞的抑制作用,计算半数抑制浓度IC50。（2）应用集落形成法观察药物对细胞的放射增敏作用。（3）流式细胞仪分析药物对细胞周期分布、凋亡的影响。结果药物作用48小时后,细胞生长受到抑制,且细胞抑制率随药物浓度的升高而增加。IC50为16.04 mg/mL。加药照射组与单纯照射组比较,细胞存活率下降,药物有放射增敏作用,随药物作用时间的延长放射增敏作用增强。单纯照射组、加药24小时、48小时后照射组三组D0值依次为2.13 Gy、2.04 Gy、1.64 Gy,Dq值依次为2.88 Gy、1.68 Gy、1.51 Gy,加药24小时及48小时后照射组放射增敏比SERD0分别为1.04、1.3,SERDq分别为1.71、1.91。流式细胞仪检测药物作用后G2/M期细胞增加,细胞凋亡率升高,药物作用时间延长以上变化更显著。结论艾迪注射液对肺癌细胞A549有抑制作用及放射增敏作用,其放射增敏作用机制可能为抑制细胞亚致死损伤修复,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡。     

桑黄总三萜的提取及其体外抗脑胶质瘤U251活性

目的:优化药用真菌桑黄总三萜的超声提取工艺并测定其对脑胶质瘤U251生长的抑制作用.方法:采用正交设计试验对超声辅助提取过程中影响桑黄总三萜得率的乙醇体积分数、超声时间、超声温度和料液比等因素进行优化;采用MTT比色法测定桑黄总三萜对U251细胞株增殖的抑制率,应用倒置相差显微镜观察桑黄总三萜对肿瘤细胞形态结构的影响.结果:超声辅助提取桑黄总三萜的最佳工艺条件为70％乙醇,超声提取20 min,温度60℃,料液比1∶25.在此条件下,桑黄总三萜提取率可达9.40 mg·g-1.桑黄总三萜对脑胶质瘤U251细胞株有抑制增殖作用,且表现出浓度依赖关系,倒置相差显微镜下可见部分细胞形成凋亡小体.结论:采用超声辅助提取桑黄总三萜时间短、得率高,是一种高效、快捷的方法,桑黄总三萜可抑制脑胶质瘤U251细胞株的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡.     

内源性HMGB1调节低氧乏养胰腺癌细胞脂肪酸代谢及其机制

目的 研究内源性高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在低氧乏养胰腺癌细胞脂肪酸代谢重编程及线粒体融合/分裂中的作用及机制.方法 GEPIA数据库分析胰腺癌组织中HMGB1表达水平与胰腺癌患者生存率的相关性;CCK-8法、划痕实验和Transwell实验分别检测内源性HMGB1对低氧乏养Patu8988细胞增殖、侵袭及迁移的...     

重复经颅磁刺激对抑郁症患者的抑郁程度和HPA轴的影响

目的探讨重复经颅磁刺激对抑郁症患者的抑郁程度和下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴活性的影响。方法采取双盲对照试验方案,将确诊的40例抑郁症患者随机分入工组（治疗组）和Ⅱ组（假刺激对照组）,每组治疗10天。在治疗前及治疗结束后当天检测Hamilton抑郁量表（HAMD）积分、血清皮质醇（CORT）及血清促肾上腺皮质激素（ACTH）浓度。结果治疗前全组的HAMD积分与血清CORT（r=0．948）和ACTH（r=0．971）浓度和治疗后治疗组的HAMD积分与血清CORT（r=0．920）和ACTH（r=0．978）浓度间均呈显著正相关关系（均P〈0．05）。治疗前两组的HAMD积分（t〈0．001）、血清CORT（t=-0．328）和ACTH（t=-0．228）浓度无统计学差异（均P〉0．05）;治疗后两组的上述指标均有统计学差异（P〈0．05）。结论抑郁症患者的抑郁程度与其血清CORT和ACTH浓度呈正相关。rTMS有改善抑郁症状的作用,其抗抑郁作用的机制可能与其下调HPA轴的活性有关。     

大黄联合益生菌对急性呼吸窘迫综合征患者免疫功能的影响及机制

目的 探讨大黄联合益生菌治疗对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者免疫功能的影响,并研究其作用机制。方法 本研究为前瞻性多中心随机对照临床研究,选取2020年7月至2021年8月期间入住江苏大学附属医院、句容人民医院及江苏省人民医院溧阳分院ICU的ARDS患者90例,随机分为对照组、大黄组和联合治疗组,各30例,分别给予常规治疗、常规+大黄灌肠治疗、常规+大黄灌肠+益生菌治疗。14 d治疗后,ELISA法测定三组患者炎症细胞因子水平,流式细胞术检测患者免疫功能,16S rRNA测序技术检测患者肠道菌群的变化。结果 联合治疗组患者血清IL-6及TNF-α水平较对照组和大黄组显著下降(P<0.05);外周血淋巴细胞计数和人类白细胞抗原-DR(mHLA-DR)表达水平均较对照组和大黄组明显升高(P<0.05),调节性T淋巴细胞(Treg)表达水平则显著下降(P<0.05);肠道内的菌群多样性及结构较对照组和大黄组明显改善(P<0.05)。结论 大黄联合益生菌治疗可以显著改善ARDS患者的炎症反应,提高机体细胞免疫力,其机制可能与改善肠道菌群结构有关。     

麇鹿角醇提液对正常小鼠IL-2和IFN-γ的影响

目的:观察麋鹿角醇提液对正常小鼠细胞因子白介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)的影响.方法:30只ICR小鼠随机分成3组:正常组、麇鹿角醇提液低剂量组(2 g·kg~(-1)·d~(-1))、高剂量组(4 g·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃给药,连续7 d.采用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2,IFN-γ的浓度,RT-PCR法检测脾淋巴细胞IL-2,IFN-γ mRNA的表达.结果:麋鹿角醇提液高剂量组小鼠血清中IL-2和IFN-γ的浓度升高,脾淋巴细胞IL-2,IFN-γ mRNA的表达增强.结论:麋鹿角醇提液能促进正常小鼠细胞因子IL-2,IFN-γ的分泌与表达,增强其细胞免疫功能.     

齐墩果酸乌苏酸积雪草酸护肝及抗氧化作用的比较研究

目的 研究比较3种五环三萜化合物齐墩果酸(OA)、乌苏酸(UA)、积雪草酸(AA)的护肝及抗氧化作用.方法 建立小鼠D-氨基半乳糖/脂多糖(D-GalN/LPS)肝损伤模型,检测OA、UA、AA对损伤小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性以及肝组织脂质过氧化的影响;运用体外自由基清除试验,测定3种化合物对超氧阴离子和羟自由基的清除作用.结果 100 mg·kg-1 OA、UA、AA均能有效抑制D-GalN/LPS引起的小鼠血清AST及ALT活性的显著上升;明显减少肝组织脂质过氧化产物MDA的生成;一定浓度3种化合物能有效清除超氧阴离子和羟自由基,且3个化合物清除自由基能力存在显著差异.结论 3种五环三萜化合物OA、UA、AA均具有显著护肝和抗氧化活性,且AA、UA的护肝作用优于OA,其机理可能与其具有更强的清除自由基能力有关.     

扑热息痛致小鼠肝细胞线粒体损伤机制的研究

目的 研究扑热息痛(APAP)引起小鼠肝细胞线粒体损伤的机制.方法 小鼠分为对照组及40、80、160、320 mg·kg-1APAP组,腹腔注射12 h后测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力和肝组织中谷胱甘肽(GSH)的水平,测定肝细胞线粒体膜电位、肿胀敏感性及游离钙的含量.结果 与对照组相比,APAP组小鼠的血清中ALT、AST的活性显著增高、肝组织中GSH的水平降低,肝细胞线粒体的膜电位下降、肿胀敏感性下降,同时检测到80、160、320 mg·kg-1APAP组小鼠肝细胞线粒体内钙离子超载.随剂量的增大,APAP对小鼠各指标的影响逐渐增加.结论 随着APAP剂量增加,小鼠肝损伤加剧,线粒体损伤加重,可能与线粒体内钙超载导致线粒体的膜通透性转运孔高通透性开放有关.     

基因治疗研究进展

介绍基因治疗的基本概念、基本方法及面临的主要问题,就基因转移的载体、基因表达的调控、基因治疗的安全性方面的研究进展进行综述和评价,并探讨今后基因治疗的发展方向。